Способ глубинного культивирования клеток dioscorea dеlтоidеа wall
Патент 770194
Авторы
Классы МПК
Способ глубинного культивирования клеток dioscorea dеlтоidеа wall
Иллюстрации
Реферат
™ ФЧЧВФ Ъ Юа а а а
lehr;o ж ва,и т, "атею тЕХ М ИНДЕЕК К. О
Союз Советских
Социолистических
Республик (и) 770I94
Ч 1 Д
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 24.04.78 (21) 2608088/28-13 с присоединением заявки № (51) М. К .
С 12N 5/00 ло долом изоо етеиир (43) Опубликовано 15.09.82. Бюллетень № 34 (53) УДК 567.8.093.1 (088.8) и открытий (45) Дата опубликования описания 15.09.82 (72) Авторы изобретения (71) Заявитель
А. Х. Липский, P. Д. Сойфер и P. Г. Бутенко
Ордена Трудового Красного Знамени институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева (54) СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК
DI0SC0REA DELT0IDEA WALL
ГосУдоРствеииый комитет (23) Приоритет
Изобретение относится к области микробиологической промышленности и касается культивирования растительных клеток.
Известен способ глубинного культивирования клеток Dioscorea deltoidea Wall в питательной среде, содержащей углеводы, минеральные соли, витамины, фитогормоны в аэробных условиях (1).
Однако известный способ не предотвращает адгезию клеток.
Целью изобретения является предотвращение адгезии клеток.
Эта цель достигается тем, что культивирование ведут в присутствии полиоксипропиленгликолевого эфира в концентрации
0,005 — 0,2%/объем питательной среды, причем полиоксипропиленгликолевый эфир используют в виде водной эмульсии с концентрацией 0,1 — 10 .
Пример 1. Готовят питательную среду для культивирования клеток Dioscorea
deltoidea W. следующего состава, мг/л:
КН4ИОз 1650
К1 1Оз 1900
СаС1з.2НзО 440
MgSO4 7Н О 370
КН2Р04 170
НзВОз 6,2
MnSO4 ° 4НзО 22,3
ZnSO4 7НзО 8,6
KJ 0,83
ХазМо04. 2НзО 0,25
CuSO4 5НзО 0,025
СоС1з 6НзО 0,025
5 FeSO4 7НзО 27,85
МазЭДТА 37,25
Фолиевая кислота 0,5
Рибофлавин 0,5
Биотин 1,0
Са-пантотенат 1,0
Пиридокспн 1,0
Тиамин 1,0
Никотинамид 2,0
Кобаламин 0,0015
15 Кинетин 0,1
2,4-D 1,0
Сахароза 30000
Пропинол Б-400 (0,1%-ная эмульсия) 50
20 Приготовленную среду в количестве 4,6л вносят в ферментационный аппарат объемом 7,5 л, стерилизуют в автоклаве при атмосферном давлении в течение 15 мин (температура около 100 С), выдерживают
25 при 0,7 — 0,8 атп 20 мин (температура
116 — 118 С) с последующим плавным спуском давления пара до атмосферного в течение 15 мин. В охлажденный аппарат асептически вносят инокулюм в количестве
30 400 мл, содержащий 2X10 клеток.
770194
Формула изобретения
Редактор О. Филиппова Техред А. Камышникова Корректор Е. Михеева
Заказ 1653/20 Изд. ¹ 218 Тираж 505 Подписное
НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раугиская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
В качестве инокулята используют штамм
Dioscorea deltoidea Wall, выращенный в колбах на качалке при 100 об/мин в термостатируемой комнате при 26+-1 С в темноте в течение 10 суток. 5
Процесс ферментации ведут при 27++0,2 С со скоростью вращения мешалки
500 об/мин при расходе воздуха 1,5—
3,5 л/мин с поддержанием концентрации растворенного кислорода 60 — 90% от пасы- 10 щения максимального по питательной среде.
В ходе ферментации периодически отбирают пробы культуральной жидкости, в «оторых контролируют рН, концентрацию 15 клеток, вес биомассы (влажной и сухой), содержание диосгенина. Накопительное культивирование ведут в течение 2 — 3 педель, получают 4 л культуральной жидкости с концентрацией клеток 7X10 кл/мл 20 (10 г/л сухого вещества биомассы) и содержанием диосгенина 1,37% в пересчете на абсолютно сухой вес биомассы. Общий выход диосгенина составляет 100—
140 мг/л. 25
Пример 2. Питательную среду готовят аналогично примеру 1, при этом пропинол Б-400 вносят в количестве 2 г/л в виде
10%-ной водной эмульсии. Все последующие операции (стерилизация среды, процесс культивирования, биосинтез диосгенина) остаются неизменными.
Использование изобретения позволит увеличить выход целевого продукта.
1. Способ глубинного культивирования клеток Dioscorea deltoidea Wall в питательной среде, содержащей углеводы, минеральные соли, витамины, фитогормоны в аэробных условиях, отличающийся тем, что, с целью предотвращения адгезии клеток, культивирование ведут в присутствии полиоксипропиленгликолевого эфира в концентрации 0,005 — 0,2%/объем питательной среды.
2. Способ по п. 1, отл ич а ющий ся тем, что полиоксипропиленгликолевый эфир используют в виде водной эмульсии с концентрацией 0,1 — 10%.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Бутенко P. Г. «Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений», М., 1964, с. 272.