Способ получения пентапептидов или их эфиров или их амидов или их солей

Способ получения пентапептидов или их эфиров или их амидов или их солей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБР ТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 1509.77 (21) 252179 7/23-04 (5 t ) M. Ka

3 (23) Приоритет — (32) 16 . 0 9 . 7 6 (31) 30-1350 (33) BHP

С 07 С 103/52 //

А 61 К 37/02

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открыти й

Опубликовано 15.10.80Бкзллетень ¹ 38

Дата опубликования описания 153.0.80 (53) УДК 547.964. .4.07 (088.8) Иностранцы

Шандор Байюс, Андраш Ронай, Иожеф Секели, Ласло Граф и:Хужа тйохай (BHP) (72) Авторы изобретения

Иностранное предприятие

"Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр PT" (BHP) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕНТАПЕПТИДОВ

ИЛИ ИХ ЭФИРОВ, ИЛИ ИХ АМИДОВ, ИЛИ ИХ СОЛЕЙ

Tyr-А-Gly-Phe-В-Х-Y

Изобретение относится к способу получения новых пентапептидов или их солей, обладающих биологической активностью, которые могут найти 5 применение в медицине.

В пептидной химии широко известен способ получения пептидов путем постепенного наращивания пептидной цепи конденсацией аминокислот или пептидных фрагментов с использованием различных методов, например карбодиимидного, метода активированных эфиров и т.п. (11.

Цель изобретения — получение с rioмощью известных методов пептидной

15 химии новых пентапептидов или их со лей, обладающих интересными фармако-логическими свойствами.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения пентапептидов формулы1 где А - G-Alà, 0- Met 0-NLeu

В - N-Leu, изощрен, Pro, Х вЂ” О, NH, Y - Н, Me, Et, или их эфиров или их амидов, или их солей, заключающийся в том, что норлейцин, изолейцин или пролин, или их сложноэфирные, или амидные производные конденсируют с следующими, имеющими у N-конца отщепляемые защитные группы аминокислотами и/или пептидными фрагментами с последующим снятием защитных групп и выделением целевого продукта в виде эфира, амида, соли или кислоты.

В качестве предпочтительного варианта способа конденсацию проводят или карбамидным методом, или с использованием метода активированных эфиров.

В тексте использованы следующие сокращения.

Трехбуквенные сокращения аминокислот следующие:

А!а — аланин

Gly — глицин

3 le — изолейцин

Leu — лейцин

Met †метионин

Phе — фенилаланил

Pro — пролин

Tyr — тирозин

N1е — норлейцин-2-аминогексановая кислота.

772481

9:1

12:20:б:11

Сокращение само по себе означает аминокислоту в L-конфигурации (за исключением неактивного Glу), в то время как в случае 0-аминокислоты это будет отмечаться каждый раз, например, D-Иеt — D-метионин.

Z — бензилоксикарбонил-карбобензокси, Вос — трет-бутилоксикарбонил, OTCP — пентахлорфенокси, ОNP — 4-нитрофенокси, 10

Et — этил, Met — метил.

Ry значения были определены при помощи тонкослойной хроматографии на силикагеле в следующих системах растворителей: 15

Хлороформ.метанол

Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода 240:30:6:11

Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода

Этилацетат-пиридин-уксусная кис25 лота-вода 60:20:7:11

Этилацетат-пири,дин-уксусная кислота-вода 30:20:6:11

Растворы упаривают при пониженном

О давлении на водяной бане при 40 С.

Аминокислотные анализы пептидов проводят при помощи анализатора типа

T1С-5АМ, после полного гидроциза (6N НС1, 24 ч, 110 C).

Пример 1. Получение Е--.èðîзил-D-àëàíèí-глицил-L фенилаланил-L-норлейцина.

Р,. Метиловый эфир бензилоксикарбонил-2-фенилаланил-!,-норлейцина.

К раствору 48 г (10 ммолей),113

Z-Phe-OTCP и 2 г (11 ммолей)

H-Nle-ОМе НСl в 10 мл пиридина добавляют 1,2 (11 ммолей) N-метилморфолина и смесь оставляют на 3 ч. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в 50 мл этилацетата и воды (1:1), органическую фазу отделяют и промывают 1 н.соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток промывают эфиром, фильтруют, промывают эфиром и сушат. 50

Выход 3,6 r (85Ъ),т.пл. 123-124 С, Rf 0,89-0,93.

Б. Метиловый эфир бензилоксикарбонил-глицил-L-фенилаланил-L-норлейцина. 55

5,55 г (13 ммолей) Z-Phe-Nl e-О 1е (пример 1A) растворяют в 100 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (R< 0,23-0,25) катализатор .отфильтровйвают, раствор упаривают и остаток растворяют в 25 мл пиридина. После добавления 4,66 г (12 ммолей) Z-Cly-OTCP смесь оставляют на

3 ч. Реакционную смесь упаривают, 65

Выход 0,47 г (70Ъ), Аминокислотный анализ:

Ala = 1,02, Nle = 1,02

Phe = 1 (для сравнения

0,19-0,23.

Gly = 1,0;

Tyr = 0 98;

). остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат.

Выход 5,28 г (91Ъ), т.пл. 110112 С,R 0,30-0,90.

B. Метиловый эфир бензилоксикарбонил-С-тирозил-D-аланил-глицин-L-фенилаланил-L-норлейцина.

1,92 г(4 ммолей)Š— С1у — Phe-И1е- ОМе. (пример 1Б) растворяют в 30 мл метаноле и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (R 0,10-0,20) катализатор от2 фильтровйвают, раствор упаривают и остаток растворяют в 8 мл пиридина.

После добавления 1,6 r (4 ммолей)

Z-D-A1à — OÒÑÐ смесь оставляют на 3 ч.

Реакционную маасу упаривают, остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат. Полученный продукт (R г 0,67-0,70) растворяют в

50 мл смеси метанол-вода-диметилформамид (1:1:1) H гидрируют в присутс-.âèè палладиевого катализатора.

В конце реакции (R5 0,24-0,29) катализатор фильтруют, раствор упаривают и остаток растворяют в 8 мл пиридина. После добавление 1,75 г (3,5 ммолей) Z-Tyг-OTCP смесь оставляют на 5 ч, упаривают, остаток растворяют в 30 мл этилацетата, промывают водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают, Остаток растворяют в смеси эфира и н-гептана (1:1), фильтруют, промывают водой, смесью (1:1) и сушат.

Выход 2,0 г (80Ъ), т.пл. 195 С (сморщивается при 190 С), R 0,73о 3

0,78.

Г. L-Тирозил — D-аланил-глицин-L-фенилаланил-L-норлейцин.

1,15 г (1,6 ммолей)

Z"Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Nle-ОИе (пример

1В) суспендируют в смеси 4 мл метанола и 2 мл ацетона, омыляют 0,5 н. гидроокисью натрия в присутствии тимолфталеина в качестве индикатора.

Когда поглощение щелочи замедляется, смесь разбавляют 10 мл воды и экстрагируют этилацетатом (3 5 мл).

Этилацетатный слой отделяют, упаривают, получают 0,3 г (26Ъ) защищенного эфира пентапептида. Водную фазу подкисляют 0,5 н. серной кислотой, продукт, выпавший в осадок (R< 0,250,35), суспендируют в 50 мл 80Ъ-ной уксусной кислоты и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

В процессе реакции продукт растворяется. Катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и остаток растворяют в 4 мл холодной воды. Полученное кристаллическое вещество фильтруют, промыва.от холодной водой и сушат.

77?481

Пример 2. Получение гидрохлорида метилового эфира L-тирозил-D-аланил-глицил-L-Фенилаланил-L †íîðлейцина.

0,36 г (0,5 ммолей)

g - T y r - 0- Я l а - G 1 y - Рл е-O lie (пример 1В ) суспендируют в 30 мл 80оо--ной уксус5 ной кислоты и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и остаток растворяют в 1 мл 1 н. метанольной соляной кислоты и затем разбавляют эйиоом. Выпавший в осадок продукт фипьтруют, промывают эфиром и сушат. сушат.

Выход 0,3 г (93Ъ) конечного гидро- 15 хлорида пентапептидного эфира;

R Z 0,55-О,б0.

Пример 3. Получение L-тирозил-0-метионил-глицин-L-фенилаланил— L-норлейцина. 26

1, 8 г (3, 7 ммолей)

Z-Gly-Phe-Nle-ОМе (пример 1Б) растворяют в 30 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (Rq 0,100,20) катализатор фильтруют и раствор упаривают. Остаток растворяют в 4 мл пиридина. Затем добавляют

1,56 г (3,65 ммолей) Вос- D-Net ОТСР и раствор оставляют на 5 ч. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют со смесью эфира и и-гептана (1:1), фильтруют, промывают указанной смесью и сушат. Полученный таким образом продукт (R - 0,70-0,75) оставг ляют стоять в течейие 30 мин с 5 мл

2 н. соляной кислоты в этилацетате, затем разбавляют Н-råïòàíîì, остаток отфильтровыва.от, промывают Н-гептаном, сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный продукт gQ (1, 5 г; R О, 17-0, 27) суспендируют в смеси 2 мл пиридина и 2 мл диметилформамида. После добавления 1, б r (3 ммолей) Вос-Туг-OTCP и 0,7 r (б ммолей) Н-метилморфолина смесь взбалтывают до тех пор, пока добав,ленные вещества не растворятся, и затем оставляют стоять в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и разбавляют 30 мл этилацетата и 30 мл 0,5 н. серной кислоты. Органическую фазу отделя.ют, промывают 0,5 н. серной кислотой и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растворяют в

5 мл ацетона и промывают 1 н. гид- 55 роокисью натрия в присутствии тимолфталеина в качестве индикатора.

В конце реакции раствор подкисляют

0,5 и. серной кислотои и взбалтывают с этилацетатом. Зтилацетатную 60

Фазу упаривают и затем добавляют к остатку 10 мл 2н. соляной кислоты в этилацетате и смесь перемешивают.

Через 30 мин полученную суспензию разбавляют 10 мл воды и водную Фазу 6 нейтрализуют N-метилморфолином. При охлаждении выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывают, промывают холодной водой и сушат.

Выход 1,13 r (60 .) пентапептида, R y 0,3-0,4. Аминокислотный анализ:

Gly = 1,0; Met = 0,98; Nle = 1,0, Tyr = 0,96; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 4. Получение (.-тирозил-0-аланил-глицил-L-фенилаланил— L-изолейцина.

А. Глицил-L-фенилаланил-L-изолейцин.

1,95 r (7 ммолей) Í-Phe-3 1е-ОН суспендируют в 10 мл пиридина, затем добавляют 0,98 г (7 ммолей) триэтиламина и 2,72 r (7 ммолей) Z-Gly — OTCP.

Смесь перемешивают до полного растворения, добавленные вещества оставляот стоять на ночь. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в

50 мл этилацетата и добавляют 0,5 н. серную кислоту до рН водной фазы 2-3.

Органическую фазу отделяют, промывают водой, затем N-бензилоксикарбонилпептид экстрагируют 5Ъ-ным раствором кислого карбоната натрия (3 + ?О мл), объединенные экстракты подкисляют

0,5 н. серной кислотой, выпавший в осадок пептид экстрагируют этилацетатом и раствор этилацетата упаривают.

Остаток !R 0,5-0,6) растворяют в

60 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

Катализатор отфильтровывают, промывают уксусной кислотой, Фильтрат соединяют с промывной жидкостью и упаривают. Остаток. растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия.

Выход 1,87 г (80Ъ) трипептида;

R 0,35-0 45.

Б. 0-Аланил-глицил-L-фенилаланил-L-изслейцин.

1,68 г (5 ммолей) Н вЂ” Glу-Phe-3 lе-OH (пример 4Б) суспендируют в 5 мл пиридина, затем добавляют 0,7 мл (5 ммолей) триэтиламина и 2,02 г (5 ммолей) Е-D-Аlа-ОТСР, перемешивают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают так же, как описано в примере 4А. Полученный г остаток после упаривания (Ry 0,500,55) растворяют в 50 мл 804-ной уксусной кислоты и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

Катализатор отфильтровывают и промывают уксусной кислотой. Растворы уксусной кислоты объединяют, упаривают, обрабатывают эфиром„ фильтруют, промывают эфиром и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия.

Выход 1,7 r (84%) тетрапептида, R@ 0, 10-0, 15.

В. L-Тирозил-D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L èзолейцин.

772481

К суспензии 1,22 г (3 ммоля)

Н-О-Ala-Gló-Phe-3 1е-ОН (пример 4Б) н пиридине добавляют 0>42 мл(3 ммоля) триэтиламина и 1,48 r (3 ммоля)

Z-Tyr-OTCP, перемешивают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь, обрабатывают аналогично примеру 4А.

Полученный при упаринании остаток (Rg 0,55-0,60) растворяют в 50 мл

80Ъ-ной уксусной кислоты и гидрируют н присутствии палладиевого катализатора. Катализатор отфильтровывают и промывают уксусной кислотой. Растворы уксусной кислоты объединяют, упаринают, растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат в вакууме н присутствии гидроокиси калия.

Выход 1,4 r (80Ъ) указанного в названии пентапептида, R g 0,08-0,12.

Аминокислотный анализ: 61у,= 1,0;

А!а = 1,0; Nle = 1,02; Tyr = 0,95;

Phe = 1 (для сравнения).

Пример 5. Получение 1-тирозил- D-аланил-глицил-L-фенилаланил- -пролина.

А. Глицил-L-фенилаланил-L-пролин.

К суспензий 5,25 г (20 ммолей)

Н-Phe-Pro-OÍ в 20 мл пиридина добавляют 2,8 мл (20 ммолей) триэтиламина и 7,77 г (20 ммолей) Z-Gly-ОТСР, перемешивают до полного растворения добанленных"веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают аналогично приме у 4А. Продукт, полученный при упаринании в виде осадка (К; 0,5-0,6), растворяют в 100 мл метанола, гидрируют н присутствии палладиевого катализатора. По окончании реакции катализатор отфильтровывают, промывают метанолом, затем метанольные растворы объединяют и упаринают. Остаток кристаллизуют из эфира, фильтруют, промывают эфиром,и сушат.

Выход 5,43 r (85Ъ) указанного трипептида, Ry 00,31-0,38.

Б. D — Аланил-глицил- L-фенилаланил-1 -пролин.

3,2 r (10 ммолей) Н-G 1 y-Phe-Pro-ОН (пример 5А) суспендируют н 10 мл пиридина, затем добавляют 1,4 мл (10 ммолей) триэтиламина и 4,03 r (10 ммолей) Z-D- Ala-OTCP и перемеши- вают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь.

Реакционную смесь обрабатывают. аналогично примеру 4А. Полученный при з упаринании остаток (Р 0,42-0,53) растворяют в 80 мл метанола и гидрируют и присутстнии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают, промывают метанолом, затем метанольные растворы объединяют и упаривают. Остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат.

Выход 3,2 г (82Ъ) указанного в 4 названии тетрапептида, R< 0,07-0, 11.

Выход 4,4 r (80Ъ) указанного в

15 названии защищенного пентапептида, Rg 0,3-0,4.

Г. L-Тирозил-D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин.

Раствор 2 06 г (3 моля)

;Щ Z-Tyr-D-А1а-С1у-Phe-ОН(пример 5В) н смеси 40 мл метанола и 10 мл диметилформамида гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце

d0

В. Бензилоксикарбонил-L-тирозил— D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин.

3,12 r (8 ммолей)

Н-О-Ala-Gly-Phe-ОН (пример 5Б) суспендируют в 15 ми пиридина, добавляют 1,12 мл (8 ммолей) триэтиламина и 3,95 г (8 ммолей) 2-Tyr-OTCP и.перемешивают до полного растворения добавленных веществ, оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 4А. Продукт, полученный в виде остатка при упаривании, растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат. реакции катализатор отфильтровывают., промывают смесью метанола и диметилформамида 1:1, слитые вместе растворы упаривают, остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром, сушат, вновь растворяют в 4 мл этанола и осаждают зтилацетатом.

Выход 1,16 г (70Ъ) укаэанного в названии пентапептида; R 0,3-0,4.

Аминокислотный анализ: Pro = 1,02;

G ló = 1,0; А1а = 0,98", Tyr =. 1,0;

Phe = 1 (для сравнения).

Пример 6. Получение -тирозил- D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин-этиламида.

0,7 r (1 ммоль)

Z-Tyr-О-Ala-Gly-Phe-Pro-OH (пример

5B) растворяют в 2 мл диметилформамида, затем добавляют 0,1 r (1,24 ммолей) этиламиногидрохлорида, 0,17 мл (1,24 ммолей) триэтиламина и 0,21 r (1 ммоль) дициклогексилкарбодиимида.

Реакционную смесь оставляют на день, фильтруют, и разбавляют 30 мл этилацетата. Раствор промывают 0,5 н. серной кислотой, водой, 5Ъ-ным раствором кислого карбоната натрия и водой, затем сушат.и упаривают. После упаривания остаток (R 0,80-0,85) растворяют в 30 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают, раствор упаривают, остаток растирают с эфиром, фильтруют, промывают эфиром и сушат.

Выход 0,.43 г (0,75Ъ) указаиного в названии пентапептида; R< 0,34-0,44; ф

Пример 7. Получение L-тирозил-О-метионил-глицил-L-фенилаланил- -пралин-гидрохлорида.

0,96 r (3 ммоля) Н-Gly-Phe-Pro-OH (пример 5А) суспендируют в 5 мл пиридина, затем добавляют 0,42 мл (3 ммоля),триэтиламина и 1,27 мл

772481 (3 ммоля) Boo-D-Met-OTCP, перемешивают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь.

Реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 4А. Затем 10 мл

2- н. соляной кислоты в этилацетате

5 выливают, на вещество, полученное в результате упаривания (R 0,30-0,35), 2 и смесь перемешивают. Через 30 мин реакционную смесь разбавляют н-гептаном, фильтруют, промывают н-гептаном и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный таким образом продукт (R 1 0,16-0,24) суспендируют в 5 мл пйридина, затем добавляют 0,84 мл (6 ммолей) триэтиламина и 1,32 r (2,5 ммолей) 15

Вос-Tyr-OPCT, перемешивают до полногo растворения добавленных веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 4А. После упаривания осадок раст- 20 воряют в 10 мл 2н. соляной кислоты, этилацетате, фильтруют, промывают этилацетатом и сушат.

Выход 1,14 г (70%) гидрохлорида пентапептида; R 0,35-0,45. Амино- 5

4. кислотный анализ: Pro = 0,98;

Met = 0,95; Tyr =- 1,0; Phe = 1 (для сравнения).

П p II M e p 8. lloIIy eHIIe L-тирозил-D-норлейцил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин-гидрохлорида.

Используя 0,96 r (3 ммоля)

Н-Glу-Phe-Pro-OH (пример 5А) в качестве исходного продукта, следуют методике, описанной в примере 7, с той разницей, что вместо 1,27 г

Boc-Met-OTCP применяют 1,06 г (3 ммоля) Вос-О-Nle-ONP.

Выход 1,18 г (75%) гидрохлорида пентапептида; Ry 0,35-0,45. Аминокислотный анализ: Pro = 1,0; Glу = 1,0 40

N le = 1,05; Tyr = 0,98; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 9. Получение L-тирозил-D-метионил-глицил-L-фенилаланил— L-пролин-этиламида. 45

A. Глнцил- L-фенилаланил- L-пролинв э тиламид-о к салат .

3,7 r (13 ммолей) Pro-NH-Et растворяют в 50 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (R g 0,2-0,3) ъ катализатор отфильтровывают, промывают метанолом, метанольные растворы упаривают и остаток растворяют в

10 мл диметилформамида. После добавления 3,9 r (13 ммолей) Z-Phe-OH

1,75 г (13 ммолей) 1-оксибензтриазола и 2,7 r (13 ммолей) дициклогексилкарбодиимида реакционную смесь оставляют на ночь и затем упаривают.

Остаток растворяют в 50 мл этилаце- 60 тата и затем промывают 5%-ным раствором кислого карбоната натрия, водой, 0,5 н. серной кислотой и вновь водой.

Органическую фазу сушат над сульфатом натрия И. упаривают. Полученный про- 65 дукт (Rg 0,63-0,68) растворяют в

50 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. Катализатор отфильтровывают и метанольный раствор упаривают. Остаток (Ry

0,1-0,2) растворяют в 10 мл пиридина, затем добавляют 2,09 r (10 ммолей)

Z-G1y-OTCP. Реакционную смесь оставляют на ночь, затем упаривают. Остаток после упаривания растворяют в

50 мл этилацетата, промывают 0,5 н. серной кислотой и органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растворяют в 50 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают и раствор упаривают. Остаток после упаривания растворяют в смеси 2 мл этанола и 2 мл этилацетата, затем добавляют 0,9 г (10 ммолей) щавелевой кислоты и смесь разбавляют 50 мл этилацетата. Выпавший в осадок продукт фильтруют, промывают этилацетатом и сушат.

Выход 2,7 г (62Ъ) трипептидэтиламидоксалата; т.пл. 98-100 С;

R 0,4-0,5.

Б. L-Тирозил-0-метионил-глицил— L-фенилаланил-L-пролин-этиламид.

0,9 r (2 ммоля) трипептид этиламидоксалата (пример 9А) растворяют в 3 мл пиридина, затем добавляют

0,86 г (2 ммоля) Вос-0-Met-OTCP u

0,56 г (4 ммоля) триэтиламина. Реакционную смесь оставляют на ночь, упаривают, остаток растворяют в

30 мл этилацетата, промывают 0,5 н. серной кислотОй, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток (R 0,802

0,85) оставляют с 10 мл 3 н. серной кислоты в этилацетате, после 30 мин разбавляют 30 мл н-гептана, полученный осадок фильтру эт, промывают н-гептаном и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный продукт растворяют в пиридине (5 мл) и добавляют 1,06 r (2 ммоля)

Вос-Туг-OTCP и 0,56 мл (4 ммоля) триэтиламина. Реакционную смесь остав1ляют на ночь, затем упаривают, растворяют в 50 мл этилацетата, промывают 0,5 н. серной кислотой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток (К у 00,85-0,90) растворяют в 3 мл и трифторуксусной кислоты и оставляют на 30 мин. Раствор упаривают и остаток растирают со смесью этилацетата и бензола (1:1). Полученный продукт растворяют в смеси 5 мл 10о-ного раствора карбоната натрия и 50 мл этилацетата. Водну о фазу встряхивают с этилацегатом (3 к 10 мл), объединенные этилацетатные фазы сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток после упаривания растирают со смесью н-гептана и этилацетата (1:1), осадок фильтруют, промывают этой же смесью, затем н-гептаном и сушат.

772481

Формула изобретения

Заказ 6740/75 Тираж 495 Подписное

ВНИИПИ

Филиал ПП Патент, r. ужгород, ул. Проектная, 4

Выход 1,02 r (80%) этиламида пентапептида; R g 0,45-0,55. Аминокислотл . ный анализ: P ro = 1, 0; G l у = 1, О, Met = 0,98, Tyr = 1,02; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 10. Получение L-тирозил-О-метионил-глицил-L-фенилаланил-1.-пролин-амин ацетатгидрата.

0,96 г (3 ммоля) Н-Glу-Phe-Pro-OH (пример 5А) суспендируют в 5 мл пиридина, затем добавляют 0,42 мл (3 ммоля) триэтиламина и. 1,27 г (3 ммоля)

Boc-D-Met-ОТСР и перемешивают до полного растворения добавленных веществ.

Реакционную смесь оставляют на ночь, обрабатывают аналогично стадии A примера 4. К остатку, полученному после упаривания, добавляют 10 мл 1 н. соляной кислоты в этилацетате (R 0,300,35), смесь перемешивают в течение

30 мин, затем разбавляют Н-гептаном, фильтруют, промывают н-гептаном и сушат в вакууме в присутствии гидрооки- си калия. Полученный продукт (R 0,164

0,24) суспендируют в 5 мл пиридина, добавляют 0,84 r (6 ммолей) триэтил- . амина и 1,32 r (2,5 ммолей)Вас-Туг-OTCP и перемешивают до полного растворения добавленных веществ.

Реакционную смесь оставляют на ночь, ее обрабатывают аналогично. примеру

4А. Остаток после упаривания растирают с Н-гептаном, фильтруют, промывают.н-гептаном и сушат. Полученный

Вос-Tyr-Иес-Gly-Phe-Pro-OH (R 0,604.

0,66) растворяют в 5 мл диметилформамида, добавляют 0,52 г (2,5 ммолей) дициклогексилкарбодиимида и 0,4 г (2,5 ммоля) 1-оксибензотриазол аммониевой соли (последнюю получают следующим образом: раствор 1-оксибензотриазола в концентрированной гидроокиси аммония (0,5 г/мл) разбавляют ацетоном, затем выпавшие кристаллы отфильтровывают, проьывают ацетоном и сушат). Реакционную смесь для амидирования оставляют на ночь, фильтруют, упаривают, остаток после упаривания растворяют в метиленхлориде, промывают 5%-ным раствором кислого карбоната натрия, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток после упаривания (R% 0,53-0,58) растворяют в 10 мл трифторуксусной кислоты, оставляют на 30 мин при комнатной-температуре, затем упаривают и остаток (R4 0,50-0,60) сушат в

1 вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный продукт растворяют в 30-40 мл смеси хлороформа и н-бутанола (3:1) и 5-7 мм воды. Водную фазу нейтрализуют твердым кислым карбонатом натрия, экстрагируют указанной смесью хлороформа и н-бутаиола, затем объединенные экстракты упаривают и остаток растворяют в

1 н. .уксусной кислоте и лиофилизуют.

Выход 1,46 г указанного в названии продукта (содержание пептида

84%.), который обладает активностью примерно в пятьдесят раз выше, чем морфин. Аминокислотный анализ:

Pro = 1,0; Gly = Met = 1,0;

Tyr = 0,98; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 11. Получение 1.-тирозил-D-аланил-глицил-L-фенилаланилI

-L-пролин-амида.

К раствору 2,06 г (3 ммоля)

Z-Tyr-Alà-D-Glу-Phe-Pro-ОН (пример

5В) в 5 мл диметилформамида, добавляют 0,46 г (3 ммоля) аммониевой соли 1-оксибензотриазола и 0,62 г (3 ммоля) дициклогексилкарбодиимида.

Реакционную смесь оставляют на ночь, фиксируют и упаривают. Остаток пос20 ле упаривания растворяют в метиленхлориде, промывают 5%-ным раствором кислого карбоната натрия, сушат над, сульфатом натрия и упаривают. Остаток после упаривания растворяют в

40-50 мп метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

В конце реакции (Rf 0 33-,0,38) катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и остаток растирают с эфи30 ром

Выход 1, 2 г (70% ) указанного в названии продукта. Аминокислотный анализ: Pro = l,0; Аlа = 1,0;

Tyr = 0,97; Phe = 1 (для сравнения).

Способ получения пентапептидов фор40 формулы I

Tyr-А-Gly-Phe-В-Х-У, где А - D-Ala, О-NLeu, D-Met, В - Й-Leu, vaoLeu, Pro, Х - О, NH, 45 или их эфиров, или их амидов, или их солей, отличающийся тем, что норлейцин, изолейцин или пролин или их сложноэфирные или амидные производные конденсируют с следующими, имеющими у й-конца отщепляемые защитные группы аминокислотами и/или пептидными фрагментами с последующим снятием защитных групп

55 и выделением целевого продукта в виде эфира, амида, соли или кислоты.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ыредер Э,, Любке К. Пептиды. ч. Т, M., "Мир", 1967, с. 212