Штамм -68-продуцент леваназы

Штамм -68-продуцент леваназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 300179 (21) 2721429/28-13 5 )< К„з

С 12 К 1/02

С 12 0 13/10 с присоединением заявки ¹

Государственный комитет

СССР по делом изобретений и открытий (23) ПриоритетОпубликовано 301080. Бюллетень ¹ 40 (53) УДК 577.15 (088.8) Дата опубликования описания 301080 (22) Авторы изобретения

Т.И. Баранова, A.A. Бенкен, М.С. Лойцянская, Л.К. Хацкевич и В.И. Элисашвили

Ленинградский ордена Ленина и ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. A.A. Жданова и Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (21) Заявители (54) ((РГАММ ГРИБА Г05АВ(0И SO(ANl — 68

ПРОДУЦЕНТ ЛЕВАНАЗЫ

Известны различные штаммы микроорганизмов, у которых обнаружена фруктоэаназная активность. ферменты проявляли специфичность по.отношению к инулину и левайу. Продуктами гидролиза этих полисахаридов были фруктоэа, леванбиоза, левантриоэа, леваитетраоза, а также олигосахара более высокого молекулярного веса, Известен штамм Streptomgces gri

seus — продуцент леваназы, который после выращивания микроорганизмов в течение трех дней на качалке в .вреде, содержащей щелочной гидролизат соевой муки — 1%, дрожжевой экстракт — 15

0,1%, КН РО4 — 0,1%, леван в концентрации 13 и культивировании при температуре 37оС продуцирует леваназу, которая разлагает леван на фруктору, леванбиоэу и ряд олигосахаридов. Вы- 20 ход фермента не указан.

Целью изобретения является выделение штамма гриба — продуцента леваназы, отвечающего производственным тре-25 бованиям получения ферментных препаратов: высокой леваноэной активностью, высокой интенсивностью размножения, возможностью культивирования на простых пйтательных средах при использо-, 3() 2 вании обычного микробиологического оборудования.

Штамм гриба Fusar(um so(an(— 68 выделен в Красноярском крае в 1973 г. из пораженных гнилью тканей всходов пшеницы. Штамм зарегистрирован в кол" лекции Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений, коллекционный номер 135.

Морфологические и культуральные признаки штамма.

На агаризованной среде Чапека на шестые сутки при температуре 18-.20 колонии гриба достигают в диаметре

3-4 см. Воздушный мицелий беловатый (по шкале A.Ñ. Бондарцева, 1954, -д-1), войлочный.

Обратная сторона колоний са слабой синевато-зеленоватой (б-2) пигментацией. Спороношение обильное, . первоначально преимущественно в мицелии: микро- и макроконидии.

Макроконидии с тремя перегородка« ми 22,4-33,6 х 5,6-7,0 мкм. Микроконидии от 3 до 6 мкм. Хламидоспоры единичные, конечные или промежуточные. На 15-20 сутки под воздушньхи мицелием образуются синевато-зеленоваФ тые спородохии.

775124

Формула изобретения

На картофельном агаре на шестые сутки колонии достигают 3,5-4,5 см в диаметре. Воздушный мицелий беловатый. Колонии рыхлые, слегка порошащие. Обратная сторона колоний без пигментации. На пятнадцатые сутки спороношение обильное, преимущественно микроконидии. Иакроконидии с тремя перегородками, несколько длинее и

;тоньше, чем на агаре Чапека 28,039,4 х 4,2-5,6 мкм. Хламидоспоры единичные.

На зернах риса (по Райло, 1950) окраска культуры серовато-розово-лиловая. Спороношение слабое, Отношение к источнику углерода.

Гриб хорошо усваивает глюкозу, саха- 15 розу, лактозу, крахмал, хуже — целлюлозу. Спородохии обильнее -всего образуются на средах с лактозой.

Отношение к источнику азота, Гриб почти одинаково успешно использует 2Q источники аммонийного и нитратного азота (азотнокислый аммоний и азотнокислый натрий), а также мочевину.

Под воздействием гриба среды с азотнокислым аммонием или мочевиной приобретают розовато-фиолетовую (Н-4) пигментацию.

Штамм продуцирует леваназу во время культивирования гриба в питательной среде, содержащей леван.

Пример. Культуру F. ао!ап)68 выращивают на первом этапе в пробирке со скошенной средой следующего состава, Ъ: агар-агар 2,0, пивное сусло крепостью 8О Баллинга.

Для синтеза леваназы гриб выращивали при температуре 25 или 30 С в питательной среде, содержащей, %: леван 0,8; КС6 0,62, NagHPOg0,25, пептон 0,2, дрожжевой экстракт 0,3.

Среды стерилизовали при 1 атм в те- 40 чение 30 мин, растворы левана стерилизовали отдельно путем дробной стерилизации при нейтральном значения рН и добавляли в питательные среды перед постановкой опыта. Культивирование производили в течение двух суток в колбах емкостью 0,5 л на качалке или в 1 л пи-..ательной среды с стеклянных сосудах для глубинного культивирования микроорганизмов. Посев в эти питательные среды производили водной суспензией культуры, полученной на первом этапе.

Активность готовой культуры составляет 11-15 единиц леваназы в 1 мл культуральной жидкости (за единицу Ы леваназной активности принято количество фермента, которое катализирует уменьшение оптической плотности реакционной смеси на 0,01 при 450 нм за 1 мин инкубации при следующих щ условиях: концентрация левана в реакционной системе 6,7-7,0 мг/мл, используется 0,05 M фосфатный буфер с рН

6,0, температура инкубирования 40 ).

Выделение препарата леваназы из куль- „ туральной жидкости производили после отделения от нее биомассы гриба.

Для этого к культуральной жидкости добавляли сульфат аммония до 80% насыщения и выпавшие осадки отделялн центрифугированием.

Штамм Fusarivm solani-68 - может найти применение для получения леванаэы-фермента, гидролизующего полисахариды леван и инулин. Продукт гидролитического действия леваназыфруктоэа используется в пищевой промышленности, в медицине и научных исследованиях. Леванаэа может быть использована для профилактики зубного кариеса, так как она гидролизует полисахариды, содержащиеся в зубных бляшках. Фермент может быть использован для исследования структуры полисахаридов.

Штамм гриба Fusarium solani-68 продуцент леванааы.

Штамм хранится в коллекции культур Всесоюзного научно-исследователь-. ского института защиты растений, коллекционный номер 135.

Морфологические и культуральные признаки штамма.

На агаризованной среде Чапека на шестые сутки при температуре 18-20 колонии гриба достигают в диаметре

3-4 см. Воздушный мицелий беловатый войлочный.

Обратная сторона колонии со слабой синевато-зеленоватой (б-2) пигментацией. Спороношение обильное, первоначально преимущественно в мицелии: микро- и макроконидии.

Иакроконидии с тремя перегородками 22,4-33,6 х 5,6-7,0 мкм. Иикроконидии от 3 до 6 мкм. Хламидоспоры единичные, конечные или промежуточные.. На 15-30 сутки под воздушным мицелием образуются синевато-зелено-ватые спородохии.

На картофельном агаре на шестые сутки колонии достигают 3,5-4,5 см в диаметре. Воздушный мицелий беловатый. Колонии рыхлые, слегка порошащие. Обратная сторона колоний беэ пигментации . На пятнадцатые сутки спороношение обильное, преимущественно микроконидии. Макроконидии с тремя перегородками, несколько длинее и тоньше, чем на агаре Чапека 28,039,4 х 4,2-5,,6 мкм. Хламидоспоры единичные °

На зернах риса окраска культуры серовато-розово-лиловая. Спороношение слабое.

Отношение к источнику углерода.

Гриб хорошо усваивает глюкозу, саха775124

Составитель И. Привалова

Техред Ж;Кастелевич Корректор Г. Решетник

Редактор Г. Прусова

Заказ 7657/32 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 розу, лактоэу, крахмал, хуже - целлюлозу. Спородохии обильнее всего образуются на средах с лактозой.

Отношение к источнику азота. Гриб почти одинаково успешно использует аммонийные и нитратные формы азота, а также мочевину. Под воздействием гриба среды с аэотнокислым аммонием или мочевиной приобретают роэоватофиолетовую (Н-4) пигментацию.

Штамм продуцирует фермент леваноэу при культивировании микроорганизмов в питательных средах, содержащих ле-, ван в качестве источника углерода.