Способ микродиализа

Способ микродиализа

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ п>775695 (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 210878 (21) 2669602/28-13 с присоединением заявки Мо (23) Приоритет—

Опубликовано 301080. Бюллетень Йо 40 (51)М. Кл 3

G 01 N 33/48

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 66. 068 (088. 8) Дата опубликования описания 301080 (72) Авторы изобретения

В. П. Демушкин и Н. M. Шалина (71) Заявитель Московский оРдена Ленина и оРдена ТРУдового Красного

Знамени государственный университет им. М.В.ЛомонОсова (54) СПОСОБ МИКРОДИАЛИЗА

Изобретение относится к способам химического разделения веществ и может быть применено в химии, биохимии, медицине, физиологии.

Известен способ микродиализа путем помещения диализуемой жидкости в емкость иэ пористого материала с последующей инкубацией.

Однако известный способ является трудоемким и обладает недостаточной воспроиэводимостью.

Целью изобретения является упрощение способа. а

Эта цель достигается тем, что в 15 качестве пористого материала используют 10 — 20%-ный полиакриламидный гель, содержащий акриламид и бисакриламид в соотношении 40 — 81:1 — 2,5, который инкубируют в диалиэуемом бу- 20 фере в течение 2 — 12 ч, а затем проводят инкубацию диалиэуемой жидкости в течение 2 — 6 ч.

Пример 1. Готовят раствор

1, для этого берут 40,8 r акриламида и 1,1 г бисакриламида, растворяют в 200 мл 20%-ного раствора сахаровы.

Готовят раствор 2. Берут 0,8 M

Трис-НС1 буфер РИ 7,0 на 20%-ном растворе сахаровы. 30

Готовят раствор 3. 2,2 мл исходного раствора ТЕМЕЛа растворяют в

20 мл 20%-ного раствора са:арозы.

Готовят раствор 4. 1%-ный раствор персульфата натрия на 20%-ном растворе сахарозы.

Готовят 10%-ный гель путем смешивания 1,47 мл раствора 1, 1,47 мл раствора 2, 0,03 мл раствора 3 и

0,03 мл раствора 4.

Смесь быстро вакуумируют в течение 1,5 — 2,0 мин, разливают по

100 мкл в лунки серологической пластины и сверху заливают по 100 мкл метилцеллюлоэы. Полимеризация геля проходит 15 мин. Гель вынимают из лунок пластины, промывают водой в те чение 2 ч в стакане, периодически меняя воду, затем промывают буфером и оставляют в нем на 12 ч. После инкубации гранул геля в буфере каждый гель обезвоживают фильтровальной бумагой, взвешивают, помещают в ячейки серологической пластины и прибавляют равный по весу объем водного раствора С-валина или

1тС-тубокурарина. Пластину закрывают пленкой "Ларафилм". Пробы выдерживают при 1 — 20 С и через определенные промежутки -,.Ремени иэ вод775695 воляет работать с большим количеством проб, так как не требуется отделения геля от диалиэующего раствора, и дает возможность проводить микродиалиэ в объеме менее 100 мкл раст5

Формула изобретения!

О

Пример 3. Для приготовления

20%-ного геля готовят раствор 1 путем смешения 81,6 г акриламида и

2,2 г бисакриламида и растворяют их в 200 мл 20%-ной сахароэы. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.

Составитель С. Малютина

Редактор Г. Прусова Техред Н.Ковалева Корректор И. Муска

Заказ 7736/60 тираж 1019 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35> Раушская наб.,д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ной фазы отбирают пробы по 50 мкл, наносят на бумажные фильтры и считают в толуольном сцинтилляторе на счетчике Марк-2.

Пример 2. Для приготовления

15%-ного геля готовят раствор 1 путем смешения 61,5 г акриламида и

1,6 г бисакриламида. и растворяют в 200 мл 20%-ной сахарсэы. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.

Предлагаемый способ позволяет получать равномерно набухающий гель с высокой однородностью пор проще, поэСпособ микродиализа путем помещения диалиэуемой жидкости в емкость иэ пористого материала с последующей инкубацией, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве пористого материала используют 10-20%-ный полиакриламидный гель, содержащий акриламид и бисакриламид в соотношении

40 — 81 : 1 — 2,5, который инкубируют в диализуемом буфере в течение

2 — 12 ч, а затем проводят инкубацмю диалиэуемой жидкости в течение

6 ч.