Штамм лиа-т-049-продуцент кислой протеиназы

Штамм лиа-т-049-продуцент кислой протеиназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

«ii 779383

Ф

/ 7 г

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт, свид-вуФ (22) Заявлено 22,0179 (21) 2734475/28-13 (51) М. Кл. с присоединением заявки ¹

С 12 D 13/10

С 12 N 15/00

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 15.11.80. Бюллетень ¹ 42

:: -: Дата опубликования описания 1511.80 (53) УДК 577.15 (088.8) О.С. Кузнецова, Ю.Е. Конев, О. П. Камышко, В.A.Ãàëûíêèí, Г.Е. Гринберг и С.Ф. Клих (72) Авторы

: изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (71) Заявитель (54) ШТАММ ACREMON i UM CHRYSOGENUM ЛИА-T-049

ПРОДУЦЕНТ КИСЛОЙ ПРОТЕИНАЗЫ

1 2

Изобретение относится к медицинс- тднко пушистые, сухие, -бледно-желтые. кой промышленности, в частности к На 10.-й день колонии достигают 8микробиологическому синтезу Фермен- 15 мм в диаметре. Обратная сторона тов. колоний и агар окрашены в интенИзвестен штамм Acremonium chryso- 5 сивный хромово-желтый цвет. Наиболее

genum — продуцент кислой протеиназы, интенсивный рост наблюдается в кисхарактеризующийся следующими морфоло- лом вишневом arape.

ro-культуральными признаками 11). недостаток штамма — недостаточно

Штамм образует простые конидиено- высокая активность фермента. сцы, прямостоящие, с гладкими стенка-10 Цель изобретения — выявление ми, бесцветные, 25-50 мкм длиной, штамма способного синтезировать

1,5-2,5 мкм в диаметре у основанй1т - кислую прдтеиназу с молокосвертыи 0,6-1,2 мкм у вершины. Конидии в вающей активностью. плотных слизистых головках эллипсо- . Штамм Acremonium chrysogenurn идные, бесцветные, с несколько уп- 15 ЛИА-Т-049 выделен из почвенного облотненным нижним концом, иногда разца 9 8520 Ленинградской области. слабо искривленным, с хрупкими Штамм Acremonium chrysogenum гладкими стенками. Конидии у типо- продуцент кислой протеиназы. вого штамма имеют размеры 4 1-4,3 х Хранится в коллекции Всесоюзного

2-,4-2,6 мкм, иногда до 1,6-1,8 мкм 20 научно-исследовательского техноло,шириной. Типичные хламидоспоры от- гического инсти тута антибиотиков сутствуют. В старых культурах гифы и Ферментов медицинского назначения распадаются на фрагменты,:подобные под номером ЛИА-Т-049. артроспорам. Морфологические признаки. Культура

Спорообраэование чаще весьма скад-25 Acremonium chrysogenum ЛИА-Т-049 ное. Усиление споруляции можно до- образует неразветвленные несептиростигнуть, применяя среды co"ñòåáëÿìè ванные конидиеносцы, в виде боковых люпина. прямостоящих веточек до 30-90х2,0 мкм.

Колонии дрожжевидные, слизистые, Конидии эллипсоидные, одноклеточтонко складчатые, хромд-желтые или ЗО ные, бесцветные, 3-4,5 х 1,5 мкм, 779383

3S собраны в плотных слизистых головках шириной 4,5-9 мкм, длиной б мкм. Ти" пичные хламидоспоры отсутствуют.

Гифй тонкие, слабб септированные, ветвящиеся, 1,5 мкм толщиной. В старых культурах гифы распадаются на фрагменты, подобные артроспорам.

Спорообразование чаще скудное.

Культуральные признаки. Агар Чапека с глюкозой. Колонии светло-бежевые, на 8-й день достигают б мм в диаметре, складчатые, сухие.,Воздушный

" мицелий беловатый, пушистый. Раство+ ри ый пигмент отсутствует. Суслоагар. Колонии бледно-желтые, сухие, складчатые, достигают 10-12 мм в. диаметре на 8-10-й день. Воздушный 15 мицелий белый, пушистый. Растворимый пигмент отсутствует. Среда не окрашена. Картофельный агар.

Колонии светло-бежевые, сухие, тонко-складчатые, 9-10 мм в диаметре, Я с пышным, белесым мицелием. Растворимый пигмент отсутствует. Агар - . не окрашен.

Кукурузный агар. Колонии желтоватые, сухие. На 8-10-й день колонии достигают 12-14 мм в диаметре.

Воздушный мицелий беловатый, пушистйй. Среда не окрашена.

Органическая среда с переваром Хоттингера. Колонии светло-бежевые, 6-8 мм в диаметре. Воздушный ми- ЗО целий беловатый, слегка пушистый.

Растворимый пигмент отсутствует.

Крахмало-аммиачный агар. Колонии светло-бежевые, сухие, складчатые до 6 мм в диаметре на.8-й день роста. Воздушный мицелий белесый, пушистый. Растворимый пигмент отсутствует.

Физиолого-биохимические признаки.

Усваивает как органический,так и не органический азот. Оптимальная температура роста 23-25 С.

Развйтие культуры лучше при рН 6,0-.

6,5. В качестве единственных источников углерода и энергии используют глюкозу, сахарозу, крахмал, арабинозу, ксилозу, мальтозу, маннит, :инозит, не усваивает фруктозу, рамнозу, галактозу. Хорошо разжижает желатину, молоко коагулирует и пептонизирует, крахмал гидролизует, растет на клетчатке. Антимикробных свойств штамм не проявляет.

Культура. хранится на агаре Чапека и в лиофильно высушенном виде.

При глубинной ферментации штамм

Acremonium chrysogenum ЛИА-Т-049 выделяет-культурапьную жидкость кислую протеиназу молокосвертывающего действия. Биосинтез кислой про теинаэы проводили на качалке ф) (220 об/мин) при температуре 23-24 С в течение 5 сут. в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл со 100 мл среды следующего состава, вес.Ъ: кукурузный экстракт 0,1 (по общему 65 азоту); соевая мука 2,0, сернокислый аммоний 0,2; глюкоза 2,0, крахмал 2; рН до стерилизации

6,7-6,8.

По окончании ферментации протеолитическая. активность культуральной жидкости при рН 4,0-5,0 составляла

2,0-1,2 ПЕ/мл. Молокосвертывающая акт @ность культуральной жидкости

200-300 ЕД/мл. Время створаживания молока 1,5-2,0 мин.

Для выделения кислой протеиназы культуральную жидкость центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 мин при 10-12оС

Осадок отбрасывали,к нативному раствору добавляли сульфат аммония (0,6% насыщения) при 4-6 С, жидкость оставляли в холодной камере на 18 ч. Затем осадок отделяли и растворяли в дистиллированной воде. Полученный раствор концентрировали с помощью ультрафильтрационной установки, за- . тем подвергали диафильтрации и лио фильной сушке.

Изучение препарата кислой протеиназы показало, что он обладает протеолитической активностью в кислой области рН 4-5 (0,6-0,7 ПЕ/мг) а при совместном инкубировании с пейаином потенцирует протеолитическую активность последнего.

Пример. Проведено испытание штамма Acremonium chrysogenum

JIHA-T-049 при глубинной ферментации в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл на качалках (n=220 об/мин) при температуре 23-24 С. Для хранения культуры и приготовления посевных партий была использована агаризованная среда следующего состава, Ъ: rJIMKOSa 2,0, К2НР040,1,МаМОЗ 0 3, КСЕ 0,05, I4gSCÄ 0,05, FeS04 0,0015, агар-агар 2,0, рН до стерилизации 6,7.

Ъ

Выращивание проводили при 27 С в течение 21 сут .Ферментационная среда, Ъ:кукурузный экстракт 0,1 (по общему азоту); соевая мука 2,0; сернокислый аммоний 0,2; глюкоза

2,0, крахмал 2,0; мел 0,3; рН до стерилизации 6,7-6,8. При культивировании указанного штамма в колбах, содержащих 100 мл.ферментационной среды, протеолитическая активность культуральной жидкости при рН

5;0 на 5-е сутки роста составляла

2 ОПЕ/мл. Молокосвертывающая активность культуральной жидкости 300 ЕД/мл.

Время створаживания молока 1,5 мин.

Проведенные фармакологические исследования показали, что препарат кислой протеиназы не токсичен при введении внутрь и мало токсичен при внутрибрюшинном и внутривенном введении. Пероральное введение препарата мышам в, дозах до 5000 мг/кг не вызывало гибели животных.

779383

Формула изобретения

Составитель И. Привалова

Редактор Н. Потапова Техред M.Ðåéâåñ

Корректор С. Шекмар

Заказ 9294/3 Тираж 522

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )Х-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород,. ул. Проектная, 4

Штамм Acremonium ch rysogenum

JIHA-T-049 †.продуцент кислой протеинаэы.

Хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения под номероМ ЛИА-Т-049.

Морфологические признаки ° Культура образуЕт неразветвленные несептированные конидиеносцы в виде боковых прямостоящих веточек до 30-90 х 2,0 мкм. Конидии эллипсоидные, одноклеточные, бесцветные, размером

3,0-4,5 х 1,5 мкм, собраны в плотные слизистые головки шириной 4,5-9 мкм, длиной б мкм.

Типичные хламидоспоры отсутствуют .

Гифы тонкие, слабо септированные, ветвящиеся, 1,5 мкм толщиной, в старых культурах распадаются на фрагменты, подобные артроспорам. Спорообразование чаще скудное.

Культуральные признаки. Агар Чапека с глюкозой. Колонии светло-бежевые, на 8-й день роста достигают б мм в диаметре складчатые, сухие. Воздушный мицелий беловатый, пушистый.

Растворймый пигмент отсутствует.

Сусло-агар. Колонии бледно-желтые,сухие, складчатые, достигают

10-12 мм в диаметре на 8-10-й день.

Воздушный мицелий белый, пушистый.

Растворимый пигмент отсутствует.

Среда не окрашена.

Картофельный агар. Колонии светло-бежевые, .сухие, тонкоскладчатые, 9-10.мм в диаметре, с пышным белесым мицелием. Растворимый пиг-. мент отсутствует. Агар не окрашен.

Кукурузный агар, Колонии желтоватые, сухие, на 8-10-й день колонии достигают 12-14 мм в диаметре..

Воздушный мицелий беловатый, пушистый. Среда не окрашена.

Органическая среда с переваром

Хоттингера. Колонии светло-бежевые.

6-8 мм в диаметре. Воздушный ми-. целий беловатый, слегка пушистый.

Растворимый пигмент отсутствует.

Крахмало-аммиачный агар. Колонии светло-бежевые, сухие, складчатые, до б мм в диаметре на 8-й день

15 роста, Воздушный мицелий белесый, пушистый. Растворимый пигмент отсутствует.

Физиолого-биохимические,признаки.

Усваивает как органический, так и

gp неорганический азот. Оптимальная тем.пература для роста 23-25 С. Оптимум . рН 6,0-6,5. В качестве единственных источников углерода и энергии использует глюкозу, сахарозу, крахмал, ара25 бинозу, ксилозу, .мальтозу, маннит, инозит.

Не усваивает фруктозу, рамноэу, галактозу.

Хорошо разжижает желатину, молоко коагулирует и пептонизирует, крахмал гидролизует, растет на клетчатке.

Антимикробных свойСтв штаМм не проявляет;

Источники информации, 35 Риня ые so в н ание при экспертизе

1.Mat ter Gams Ceppa(ospori um-arf i ge

:,Ichimme8pigzo (Tlyphomyceus), pena, 1971, р. 109 (прототип).