Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума

Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

чл С " мотфка „ ОПИСАНЙ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскнх

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 261278 (2() 2702203/28-13

A 61 К 39/10 с присоединением заявки È9 (23) Г риоритет осударствеииьй комитет

CC Ñ Р ио делам изобретений и открытий

Опубликовано 07.1280. юллетань ¹45 (53) Уд (57 б, 8, 097. .3(088.8) Дата опубликования описания 07.12.80 (72) Авторы изобретения

Н.П.Иванов и В.Б.Бельченко

Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт, Восточное отделение Всесоюзной академии сельскохозяйственных

1 наук им. В.И.Ленина и Карагандинская научно-исследовательская ветеринарная станция (71) Заявители (5 4 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕ НИЯ БРУЦЕЛЛЕЗ НОГО ЭР ИТРО ЦИТАР НОГО

ДИАГНОС 1ИКУМА

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к получению биологических препаратов.

Известен способ получения бруцел-. лезного эритроцитарного диагностикума путем дезинтеграции бруцелл ультразвуком с последующим выделением антигена и сенсибилизаций формалини-. зированных эритроцитов (1).

Однако известный способ не позволяет получить диагностикум с высокой стабильной активностью, Целью изобретения является повышение активности диагностикума, Эта цель достигается тем, что де- (5 зинтеграцию ведут в дистиллированной воде при рН 8,0-9,0 и сенсибилизацию эритроцитов проводят при 70-72 С в течение 5-10 мин, Пример, Бруцеллы шт .19, выра- 29 щенные на мясопептонном печеночном глюкозо-глицериновом агаре смывают с питательной среды стерильным физиологическим раствором поваренной соли, дважды отмывают им же от остатков питательной среды . Затем доводят до концентрации 100 млрд. микробных тел в 1 мл (по бруцеллеэному стандарту мутности) дистилированной водой с рН 8,0-9,0. Полученную взвесь подвер-ЗО гают воздействию ультразвуковых волн до просветленйя (10-16 мин), По окон чанйи озвучивания микробной дезинтеграт центрифугируют 30 млн, при 5-бтыс. об/мин с целью осаждения неразрушенных клеток.

Надсадочная жидкость в рабочем разведении на обычном физиологическом растворе служит антигеном для сенсибилизации формалинизированных и таннизированных эритроцитов.

Формалинизацию эритроцитов проводят по методу Фили при рН 7,2-7,4 . С этой целью донорскую дефибринированную кровь разводят 1:1 буферно-физиологическим раствором: хлористого натрия 0,137 М, двузамещенного фосфорнокислого натрия 0,01 М, однозамещенного фосфорнокислого калия 0,003 М (при рН 7,2-7,4).

К 100 мл разведенной крови быстро добавляют смесь, состоящую из 200 мл буферного раствора. гадательно перемешивают и инкубируют, перемешивая каждый 15 мин на водяной бане при

37 С в течение 2 ч.

В процессе обработки эритроциты постепенно приобретают темно-коричневый цвет. Смесь центрифугируют при

900-1000 об/мин, четырехкратно отмы784879 вают и готовят 2,5Ъ-ную взвесь (примерный выход со 100 мм крови 500 мл эри роцитарной взвеси) .

Таннизацию эритроцитов проводят раствором таннина в разведении

1:20000. При этом смешивают равные объемы 2, 5Ъ-ной взвеси эритроцитов и раствора таннина. Перед смешиванием обе части смеси нагревают в термостате при водяной бане при 370 С и после смешивания выдерживают при 37 С в течение 15 мин. Затем эритроциты трижды отмывают от таннина обычным физиологическим раствором хлористого натрия и разбавляют буфернофиэиологическим раствором с рН 6,06,2 до 2,5Ъ-ной концентрации. После 3$ этого взвесь таннизированных эритроцитов соединяют с равным объемом раствора антигена (1г100) и выдерживают в водяной бане при 70 С.в течение о

5 -10 мин.За 2-3 мин до окончачия сен- Я сибилизации добавляют 0,5Ъ формалина (38-39 Ъ формальдегида), Затем эритроциты дважды отмывают от избытка антигена нормальной кроличьей сыворот,кой,разведенной физиологическим раст вором до 1г100 и доводят ею же или

0,4Ъ-ным глицерином до 2,5Ъ-ной канцент ации. г осле этого к эритроцитлрной взвеси добавляют 0,5Ъ формалина (в качестве консерванта) и используют для постановки реакции.

Результатами испытания специфич.ности диагностикумов в реакции нейтрализации на культурах различных возбудителей, патматериале от здоровых и зараженных бруцеллезом животных установлено, что данный диагностикум не уступает по специфичности аналогичным диагностикумам, выпускаемыми ДагНИВИ и ВИЭВ.

Результаты испытания эритроцитарных диагностикумов на активность в

РИГА представлены в таблице. диагностикумов на активность в РНГА

Результаты испытания эритроцитарных

Вид животных, количество проб

ЧИ H3I

Крупный рогатый скот

54 пробы

16 10 26 32

48,2 29,6 18,5,48,2 59,2 31,5 9,2

1:919 1:538 1:270 1:504 1:409 1:159

12 9 8 б 6 21

38

14,8 ll 1 11,1

16,6

Мелкий рогатый скот, 10 проб

2,5

1 2 6

20 50

1:50

4 1

40 10

20

10 3 5

10 10

100 . 100

1:425 1:125

1! 200

100 30 50

1:700 1:315 1:250

1 4

10 40

l4 33

28

29 10

47,3

1:734

17.

37,8

1:593

23,5 14,8 12,2 14,8 9,5 33 7

Предлагаемый способ позволяет получить Ьруцеллезный эритроцитарный диагностикум, обладающий высокой активностью и специфичностью.

ФоРмУла изобретения

Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума путем

65 дезинтеграции бруцелл ультразвуком с

Положительно реагирующие

Процент положительно реагирующих

Средний титр реакций

Сомнительно реагирующие

Процент сомнительно реагирующих

Положительно реагирующие

Процент положительно реагирующих

Средний титр реакций

Сомнительно реагирующие

Процент сомнительно реагирующих

Свиньи,:, Положительно реагирующие

10 проб Процент положительно реагирующих

Средний титр реакций

Сомнительно реагирующие

Процент сомнительно реагирующих

74 про- Всего положительных бы Процент положительно реагирующих

Средний титр реакций

Сомнительно" реагирующие

Процент сомнительно реа-гирующих наименование антигенов

20 10 20 60

1:125 1:50 1:100 1:158

2 - 1 1

18,9 44,6 64,8 37,8 13,5

1:264 1:441 1:381 1:141

9 11 7 25

784879

Составитель С.Малютина

Техред M,Ïåòêî Корректор М. Внгула

Редактор П.Горькова

Заказ &700/4 Тираж 673

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Филиал ППП ПатЕнт, г.ужгород, ул.Проектная,4 последующим выделением антигена и сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения активности диагностикума,дезинтеграцию ведут. в дистиллированной воде при рН 8,09,0 и сенсибилизацию эритроцитов проводят при температуре 70-72 С в течение 5-10 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, Иванов А.B., Бельченко В.Б.

РНГР для диагностики Бруцеллеза телят;. Ветеринария, I, 1975.