Штамм для идентификации -плазмид
Патент 786329
Авторы
Штамм для идентификации -плазмид
Иллюстрации
Реферат
О П И С А Н И Е < >73632g
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛВСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 13.07.79 (21) 2796708/28-13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 23.01.82. Бюллетень Хо 3 (45) Дата опубликования описания 07.02.82 (51) М.Кл з С 12 1Ч 1/00//
//С 12 N 1/00
С 12 R 1!19
Государственный комитет ла лолам изобретений и открытий (53) УДК Л616-07 (088.8) (72) Авторы изобретения
А. И. Коротяев, H. Н. Кисличкин, T. В. Малышева, М. Ш. Манувахова, В. Ф. Максимов и А. Г. П нов., Кубанский государственный медицинский инст тут им. Красной Армии +, .1 (71) Зая(витель (54) ШТАММ ESCHERICHIA COLI MF—
ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ R-ПЛАЗМНД
Изобретение относится к области микробиологии, а именно идентификации определенных R-плазмид, обусловливающих устойчивость бактерий к антибиотикам и другим лекарственным препаратам.
Известен штамм Escherichia coli К12 F— для идентификации R-плазмид (1).
Однако известный штамм хотя и обладает свойствами универсального реципиента в генетических скрещиваниях, но лизируется фагом ТЗ и фагом Т7.
Целью изобретения является новый штамм, обладающий свойствами универсального реципиента в генетических скрещиваниях.
Штамм Е. col i MF выделен из кишечника белой мыши.
Штамм Е. coli MF депонирован во
Всесоюзном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером
В-1805.
Морфологические признаки. Клетки E. со11 MF имеют вид прямых палочек величиной 1,5 — 3,ОХО,З вЂ” 0,5 мкм, слабо подвижны, перитрихи, спор и капсул не образуют, по Граму не окрашиваются.
Культуральные признаки. На мясо-пептонном бульоне (рН 7,2 — 7,4) через 18 ч при 37 Е. coli NF образует равномерное помутнение и осадок, на мясо-пептонном агаре — круглые слегка выпуклые полупрозрачные колонии диаметром 1 — 3 мм, на среде Эндо — круглые колонии, окрашенные в темно-красный цвет с металлическим блеском, диаметром 1 — 3 мм, на среде Левина (мясо-пептонный агар с эознн-метиленовым синим) — круглые колонии, окрашенные в темно-синий цвет, диаметром 1—
so 3 мм, на среде Плоскирева — круглые колонии, окрашенные в розовый цвет, диаметром 1 — 3 мм, на кровяном мясо-пептонном
arape — круглые колонии без гемолиза, полупрозрачные, диаметром 1 — 3 мм, на
l5 голодном агаре с глюкозой (среда М-9+
+ 0,4% глюкозы + 2 /а агар-агар а) через
48 ч — плоские полупрозрачные колонии размером от 1 до 3 мм в диаметре (прототроф) . Штамм размножается при 20 — 40, 20 оптимум роста 36 — 37 .
Физиологические признаки. E. co!i MF не образует оксидазу, глюкозу расщепляет с образованием кислоты и газа, ферментирует арабинозу, лактозу, мальтозу, манно25 зу, сорбит, ксилозу, восстанавливает нитраты в нитриты, образует индол, обладает лизин- и орнитиндекарбоксилазой, дает положительную реакцию с метиловым красным, не ферментирует сахарозу, дульцит, инозит, не образует ацетилметилкарбинола, 786329
Формула изобретения
Корректор С. Файн
Техред Л, Куклина
Редактор Н. Аристова
Заказ 25/33 Изд. № 104 Тираж 504 Подписное
НПО <Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
ll3035, Москва, Ж-35, Раушскаи наб., д 4/5
Тын. Харьк. фил. пред. <Патент> не усваивает цитрата натрия, не образует сероводорода, не обладает уреазной активностью.
Генетические особенности. Штамм Е.
coli MF — служит хорошим реципиентом в опытах по передаче R-плазмид от различных доноров. Штамм Е. coli MF обладает природной устойчивостью к фагам ТЗ, Т7, Х и PI. Однако Е. coli MF- становится чувствительной к фагу ТЗ и Т7 после пере- 40 дачи ей путем конъюгации Р-плазмид некоторых групп несовместимости, например, Inc J — и Inc Х
С целью облегчения отбора эксконъюгантов в опытах при генетических скрещива- 15 ниях из исходного штамма Е. coli MF получены два мутанта, один из которых обладает устойчивостью к 120 мкг/мл налидиксовой кислоты (Е. coli MF — Nal ), другой — к 200 мкг/мл рифампицина (E. coli 20
NF Rif ).
Пример практического использования штамм а.
У диких штаммов шигелл и кишечной . палочки выявлены 23 различные конъюга- 25 тивные R-плазмиды: pKMR 13, pKMR 14, pKMR 16, рКМК 20, pKMR 26, pKMR 34, pKNR 46, pKNR 51, pKMR 64, pKMR 73, pKMR 74, pKMR 77, рКМК 90, pKNR 95, рКМ;К 98, pKMR 105, рКМК 111, рКМК 117, 30 рКМК 155, pKMR 161, pKMR 169, pKNR
182, pKMR 200. Передачу этих R-плазмид проводят E. coli MF Nal (R!f ) по стандартной методике. Культуры донора (дикие штаммы кишечных бактерий, обладающие 35 устойчивостью к антибиотикам) и реципиента (Е. coli MF ) выращивают в течение 12 ч в 5 мл мясо-пептонного бульона (МПБ), разводят свежим МПБ в соотношении 1: 10, подращивают в течение 3 ч, гото- 40 вят конъюгационные смеси из донора и реципиента 1: 10 соответственно, смеси выдерживают в термостате 2 ч и 20 ч, производят высев смесей на селективные (с антибиотиками) питательные среды в чашках, 45 чашки выдерживают в термостате 24 ч, эксконъюганты отсевают на питательные среды в пробирках. Все 23 R-плазмиды были переданы Е. coli MF
Штамм Е. coli NF и его производные — Е. coli MF — Nal и Е. coli MF—
Rif были проверены на устойчивость к колифагам ТЗ, Т7, Х и Рl методом спорт-теста. Для этого 0,1 мл четырехчасовой бульонной культуры бактерий вносят в расплавленный и охлажденный до 45 С
0,7%-ный МПА, который перемешивают и наслаивают на пластинку 1,5 /о-ного МПА.
После охлаждения чашки подсушивают и на поверхность верхнего слоя МПА пастеровской пипеткой наносят капли фагов ТЗ, Т7, Х и Pl с титром 10 бляшкообразующих единиц в 1 мл (БОЕ/мл). Посевы инкубируют в течение ночи при 37 С и учитывают результаты опыта по наличию или отсутствию лизиса бактерий в точках нанесения соответствующих фагов.
Предложенный штамм является универсальным реципиентом в генетических скрещиваниях, но в отличие от известного штамма Е. coli К 12 F и его производных не лизируется колифагами Т3, Т7, А и Pl.
Вместе с тем штамм Е. coli MF- приобретает способность лизироваться фагом ТЗ при передаче ему путем конъюгации R-плазмид Inc Х вЂ”, Inc А, Inc J групп несовместимости и фагом Т7 — после передачи ему К-плазмид Inc J u Inc Х вЂ” групп несовместимости, что позволит быстро идентифицировать исследуемые R-плазмиды.
Штамм Escherichia coli MF для идентификации R-плазмид. Хранится в музее культур промышленных микроорганизмов института «ВНИИгенетика» под номером
В-1805.
Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:
1. Жакоб Ф., Вольман Э. Пол и генетика бактерий. М., «И. Л.», 1974,