Способ диагностики сальмонеллезной инфекции

Способ диагностики сальмонеллезной инфекции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

п г(.

О П И С АМЙ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ссиоэ Советскмк

Соцмелмстмчесимв

Республик (1786994

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЮЛЬСТВУ

/ (61) Доттолммтельмое к авт. саид-ву (22) Заявлено 1М6.79 (21) 2780416/28-13 (53)М Кй 3

A 61 В 10/00

Гоеударстве««ы4 «ом«тет

СССР по делам «зобрете««4

«от«рыт«4 (23) Гварнери ни

Опубликовано 14 12,80.бюллетень М 46

Дата оттублияоваммя описания 15.1 280 (S3) УДК 616-07 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Л.K.Ñòånàêoàa, В.A.Âåëaÿ, К.D.Бунин и Л.Г. Токаренко

Научно-исследовательский ордена 1рудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф.Гамалеи и 1-ый Московский ордена Ленина и ордена 1рудового Красного Знамени медицинский институт им. И.И.Сеченова (71) Заявители (54) СПОСОБ ДИАГНОС1ИКИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ

ИНФЕКЦИИ

Ъ

Изобретение относится к медицине, а именно клинической иммунологии.

Известен способ диагностики саль- монеллезной инфекции путем определения наличия специфических антител в сыворотке крови (1) .

Однако этот способ недостаточно специфичен и не позволяет быстро диагностировать сальмонеллезную инфекцию, © так как длительность реакции 18 ч.

Цель изобретения — повышение специфичности и ускорение диагностики.

Цель достигается тем, что в сыворотке крови определяют К-сальмонел.лезные антитела добавлением К О-штам ма В 30 SaImoneIIa typhimurium u люминесцентной сыворотки против I9 человека и по интенсивности свечения клеток К О-штамма В 30 диагносцируют сальмонеллез.

К О-штамм М 30 SaImoneIIa typhi-

murium получен из полноценной по ан+ тнгенному составу К+О-культуры S. 1урhimurium путем селекции под контролем просмотра популяции в косопадающем пучке света с последующим изучением антигенной структуры. Штамм децонирован в коллекции ИЭМ.им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР. Это грамотрицательная, неспороносная палочка, активно под- 3О вивная, не образует пигмента, аэроб, растет на обычных питательных средах.

Оптимум роста 37 С. На мясопептонном бульоне образует равномерную муть, иа мясопептонном агаре дает гладкие S-форьва колонии нормальных размеров, на среде Плоскирева растет в виде бесцветных прозрачных колоний.

Штамм не разлагает лактозу, сахарозу, быстро ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, мальтозу, рамиоэу, сорбит, восстанавливает нитриты до нитратов, образует сероводород.

При просмотре популяции в косопадающем пучке света, в отличие от зеленых с коричневой исчерченностью коло+ Ф" ний исходного K O-штамма К О-культура дает колонии красно-серого свечения. Штамм характеризуется наличием ярко выракенного поверхностного К антигена и нарушенным синтезом О антигеиа. Его агглютинабельность в отношении К антисыворотки составляет

1:640. С g антисывороткой он реагирует только до титров 1:20-1:40. В иммуноэлектрофорезе установлены перекрестные реакции К 0-штамма 9 30 с антисыворотками к сальмонеллам различных вариантов, имеющих К антиген.

786994

П р и м е, р. Больной М. находится в стационаре с диагнозом Пищевая токсикоинфекция. реакцию проводят следующим образ<6 .

На предметное стекло наносят пастеровской пипеткой по g капель суточной 3 агаровой суспенэии K О-штамма Р 30 в фосфатном буфере РН 7,2, содержащей

2х20 клеток, из которых приготавливают 5 мазков. После подсушивания иа воздухе при комнатной температуре маз- © ки фиксируют в течение 5 мин. в метиловом спирте. Параллельно готовят серийные двукратные разведения испытуемой сыворотки, начиная с 1 2. На мазки наносят по l-aN капле различных разведений сыворотки и выдерживают при комнатной температуре 45 мин Мазки отмывают трижды по 5 мин,фосфатным буфером и подсушивают на возду-хе. На препараты наносят по 1-oN капле люминесцирующей крояичьей сыворотки © против глобулииов человека в рабочем разведении l:8 и окрашивают при комнатной температуре в течении 30 мин,,После трехкратного промывания по

5 мин, буферным раствором и высушива» 35 ния на воздухе препараты заключают в буферный глицерин (l ч . фосфатного буфера РН 7,2+9 ч, глицерина) и исседу» вт в лвминесцентном микроскопе ИЛ-25 при увеличении 7х90. ЗЕ

Положительнув реакцию оценивают по интенсивности свечения. За титр

S.paratyphi я.typhimurium

S.haifa

1г128

1:64-1!128

1>2560

2:1280

1-ã.1280

1:64

1!128

1 80

5.virchov

S,newport

1:40.

1!32

0-li320

1г1280

1:32-1:64

1:128

S.typhus (больной (бактерионоситель) l:8

l:160

1:160

S anatum

S. tpndon

1:32

Конт» доноры

Роль Sh,Sonne

Sh.fIecsnerl:

5

1:1280-1-2560

1:1280

Отрицательная реакция с нераэведенной сывороткой. альную серологическую диагностику

Я сальмонеллеэов от других острых кишечных заболеваний иной этиологии, сходных по клинической картине.

Формула иэобретения

Способ диагностики сальмонеллезной инфекции путем определения налиПредлагаемый способ выявления анинтел к поверхностному К антигену сальмонелл в сыворотках больных с помощью селекцнонированного К О тест- штамма позволяет быстро в течение ЗК идентифицировать сальмонеллезнув инфекцию,атакже проводить дифференциК антител принимают то максимальное разведение испытуемой сыворотки, при котором отмечает я специфическое свечение клеток К О-щтамма В 30 на ++.

Контролями в опытах служат

1.,Днтиген (штамм 930) +фосфатный буфер+лвминесцирующая сыворотка.

2. Аитиген (штамм в 30) уразличные разведения нормальной сыворотки+лвмниесцирующая сыворотка.

Э. Антиген. (штамм В 30) +люминесцирующая сыворотка.

4. Антиген (штамм S,giasgo — К О вариант S.typhimurium+a cnexyeaeas сыворотка+люминесцирувщая сыворотка.

Испытание сыворотки больного И. с токсикоинфекцией, вызванной S .virchovг при нспольэованин К .) тест-штамма

S.typhlmurluy в качестве антигена в непрямом методе люминесценции позволяет в течение 3 ч. выявить антитела к поверхностному K антигену сальмонелл в высоких титрах - 1:128.

Изучены сыворотки больных сальмонеллезиьв и заболеваниями, обусловленными, другими сероларами сальмонелл, а также сыворотки дизентерийных больных и доноров.

Результаты опытов по изучению сывороток сальмонеллеэных больных представлены в таблице. Исследования показали высокую специфичность н чувствительность.способа., 786994 ;оставитель.С.Маяцотина техред М. Петко; Корректор Ю.Макаренко

Редактор Т. Веселова

Заказ 8397/75 тираи 673 Подписное вНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рау аская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, г.уигород, ул.Проектная,4 чия специфических антител в сыворотке крови, о т л н ч а ю щ н и с я тем, что, с целью повьыения специфичности и ускорения диагностики, в сыворотке крови определяют К-сальмонеллезные антитела добавлением К О-штамма Ю 30

SaImoneIIa typhimurium и щоминесцеитной сыворотки против 1> человека и по интенсивности свечения клеток К У штамма в 30 диагиосцируют сальмоненеллеэ.

Источники информации, принятые во внимание при зкспертизе

1. Руководство по иммунологии.

Под ред. О.В .Вязова hl.Х.Ходиаева.

И., 1973 ° с.221-227.