Способ получения гиалуронидазы

Способ получения гиалуронидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сок1ъ Советских

Социалистических

Республик и >787032 (61) Дополнительное к авт, сеид-ву (22) Заявлено 261278 (2! ) 2728195/28-13 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет—

Опубликовано 15,1?80, Бюллетень ¹ 46

Дата опубликования описания 15,1280 (51)М. Кл.з

A 61 К 37/56

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (53) УДК 615.45:615.. 34 (088.8) (72) Авторы изобретения

З.P. Кускова, A.Ë . Бийчанинова и Л.A. Грачева

Томский ордена Трудового Красного Знамени научноисследовательский институт вакцин и сывороток (71) Заявитель. (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИАЛУРОНИДАЗЫ

Изобретение относится к биологии и медицине и касается получения ферментных препаратов.

Известен способ получения гиалуронидазы путем экстрагирования раэмель-5 ченной плаценты, осаждения целевого продукта и очистки (11.

Однако известный способ сложен, длителен и трудоемок из-за использования колоночных методов очистки. 1Î

Цель изобретения — упрощение способа.

Укаэанная цель достигается тем, что в качестве источника сырья используют плацету. человека, которую экст-15 рагируют бидистиллированной водой„ подщелачивают, раствор обрабатывают ацетатным буферным раствором, полученный осадок обрабатывают водой при рН 6,3-6,4, добавляют гель фосфата 2() кальция, центрифугируют и лиофилизируют.

Кроме того, добавляют гель фосфата кальция, содержащий сухого остатка геля к белку в соотношении 25

0,6-0,7:1.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример . Свежую или свежезамороженную плаценту раэмельчают на 30 электрической мясорубке, отмывают охлажденным физиологическим раствором от пигментов крови до получения однородной массы бледно-розового цвета.

К 300 r полученной массы добавляют

450 мл (1,5 объема) бидистиллированной воды, рН взвеси доводят до 9,01 н. раствором йаОН. Экстрагирование гиалу" ронидазы проводят в течение 18-24 ч при 4-10 С при периодическом перемешивании. Далее взвесь центрифугируют при 4000 об/мин и 4-10 С в течение 30 мин. Из супернатанта осажцают фермент путем снижения рН раствора до 5,0 с помощью 2М ацетатного буферного раствора с рН 4,0. Осадок формируется в течение 30 мин при 3-4 С. о

Далее осадок отмывают от остатков гемпигмента бидистиллированной водой (рН 6,2-6,4), фермент осаждают центри" фугированием и растворяют в бидистиллированной воде с рН вЂ” 7,0, объем которой составляет 1/10 от исходного объема экстракта. Полученный раствор соединяют с гелем фосфата кальция в соотношении 0,60-0,70 г сухого остатка геля на 1 r белка, выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин, гель удаляют центрифугированием при

4000 об/мин в течение 30 мин. Надоса787032 формула изобретения

Составитель С.Малютина

Техред Т.Маточка Корректор Н.Шныдкая

Заказ 8215/4 Тираж 673 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д. 4/5

Редактор Т.Веселова филиал ППП "Патент", r. ужгород, ул. Проектная, 4 дочную жидкость, представляющую собой раствор гиалуронидазы, стерилизуют фильтрацией, определяют однородность, содержание беЛка и специфическую активность и лиофилиэируют.

Предлагаемый способ получения гиалуронидаэы технологически прост и досту5 пен, предусматривает утилизацию ценного сырья, препарат, полученный предлагаемым способом, содержит минимальное количество балластных бел ков, следовательно, не будет вызывать нежелательных побочных реакций, 1. Способ получения гиалуронидаэы путем экстрагирования размельченной плаценты, осаждения целевого продукта и очистки, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве источника сырья используют плаценту человека, которую экстрагируют бидистиллированной водой, подщелачивают, раствор обрабатывают ацетатным буферным раствором, полученный осадок обрабатывают водой при рН 6Ä3-6,4, добавляют гель фосфата кальция, ценхрифугируют и лиофилиэиpQ ют

2. Способ по и. 1, о т л H а шийся тем, что добавляют гель фосфата кальция, содержащий сухого остатка геля к белку, в соотношении 0,6-0,7:1.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Э."б 0сбЕп", И77,чар. 485-4М.