Способ определения алкилирующего соединения в органах и тканях животных

Патент 787989

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

О ООк ЗН,,й.

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-вувЂ” (22) Заявлено 120279 (2}) 2727507/28-13 с присоединением заявки Нов (23) Приоритет

Опубликована 15,12.80. Бюллетень Мо 46

Дата опубликования описания 15.12.80 5 /М,,(л З

6 01 N 33/12 //

G 01 N 31/08

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 637.516 (088.8) (72) Авторы изобретения

Т.Г.Аббасов и Г.А.Таланов

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии (71) Заявитель (541 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКИЛИРУЮЩЕГО СОЕДИНЕНИЯ

В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к способам газо-хроматографического определения циклофосфамида в органах и тканях лри токсикозе животных.

Известен способ определения алкилирующего соединения в органах и тканях животных, предусматривающий гомогенизацию пробы и экстрагирование органическим растворителем (1).

Однако этот способ не позволяет с достаточной точностью определять алкилирующее соединение °

Цель изобретения вЂ” повышение точности определения.

Указанная цель достигается тем, 35 что после экстрагирования производят концентрирование с последующим растворением остатка в водно-спиртовом растворе, затем добавляют иэотонический раствор хлористого натрик и осу- 39 ществляют дополнительное экстрагирование и концентрирование, а остаток растворяют в ацетоне и вводят в колонку газового хроматографа с термоионным детектором, а о количестве 2з алкилирующего соединения судят, сравнивая высоту или площадь пика исследуемой пробы с эталонной. В качестве органического растворителя исполь. зуют хлороформ, а основное экстрагирование производят в присутствии без- водного сернокислого натрия.

Способ осуществляют следующим образом.

Органы и ткани животных экстрагируют с хлороформом в присутствии сульфата натрия. Затем экстракт фильт руют в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в спирто-водном растворе(1:3), переносят в делительную воронку, добавляют изотЬнический раствор NaCт, и дважды дополнительно экстрагируют хлороформом. Отделяют хлороформ, объединяют и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в ацетоне, переносят в про бирку с притертой пробкой, добавляют 1-2 r безводного сернокислого натрия и конечное определение проводят количественно на газовом хроматографе с термоионным детектором.

Условия хроматографирования: хроматограф "Цвет-5" с термоионным детектором; рабочая шкала электрометра

1 10 "о A скорость протяжки картограммы самописца 1 см/мин; газ-носитель азот со скоростью 24 мл/мин, водород 16 мл/мин, воздух 400 мл/мин, колонка стеклянная с длиной 600 мм и внутренним диаметром 3 мм, фаза

787989

Формула изобретения

Составитель И.Кутукова

Редактор Т. Веселова Техред Н. Ковалева Корректор,О,Биллах.

Заказ 8343/51 Тираж 1019 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП"Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4

ХЕ-60 (3%) на хроматоне (60-80 меш); температура колонки 200-220 С, испарителя - 250 -260 С. В колонку вводится 3 -5 мкл стандартного раствора или раствора анализируемой пробы.

Абсолютная чувствительность стан", дартного циклофосфамида составляет

5 нг. Чувствительность определения циклофосфамида в мясе,,органах и тканях составляет 8 мкг в пробе (100 r) или 0,08 мг/кг. Процент. извлечения циклофосфамида из мяса, органов и тканей,составляет 70-90 Ъ.

Линейность детектирования соблюдается s пределах 5-50 кг. Время удерживания циклофосфамида 2,2 мин. )$

Пример. Берут 100 г. гомогенизированной пробы (мяса, органы и ткани), добавляют 30 r безводного сернокислого натрия и экстрагируют 50 мл хлороформа в течение одного часа при 20 комнатной температуре. Затем экстракт фильтруют в фарфоровую чашку и упаривают досуха под током воздуха. Сухие остатки растворяют 5 мп спирто-водного раствора (1 3) и переносят в дели- э5 тельную воронку. Сюда же добавляют

50 мл изотонического раствора йаСt и экстрагируют дважды по 30 ья хлороформа в течение 2-х мии. Отделяют хлороформ, объединяют и упаривают досуха. о

Сухие остатки растворяют 5 мл ацетона переносят в пробирку с притертой пробкой, добавляют 1-2 г безводного сернокислого натрия и разделение .проводят на хроматографе"Цвет-5"c тер.моионным детектором.

Количественное определение проводят методом сравнения высоты или площади пика исследуемого вещества в пробе и известного количества стан- 4{) дарта.

Расчет ведут по формуле

А5 А Н, Ч

Х= или x,=

51- Ч1. Ч Ц. Ч„Ч g 4$ где Х вЂ” количество препарата в мг/кг

A - количество препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, в нг;

$„- площадь (Н - высота)пика стандартного раствора препарата, введенного в хроматограф, мм. (мм); площадь (Нр - высота)пика

-препарата в пробе, мм (мм), Ч1 - объем экстракта, введенного в хроматограф, в мкл, Ч - общий объем экстракта после упаривания, в мл, Ч - количество анализируемой пробы, r.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения циклофос- фамида и может найти широкое применение для контроля препарата в продуктах животноводства в исследователь- . ских лабораториях ветеринарной и медицинской службы страны.

1. Способ определения алкилирующего соединения, преимущественно циклофосфамида, в органах и тканях живот. ных, предусматривающий гомогенизацню пробы и экстрагирование органическим растворителем, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности определения, после экстрагирования производят концентрирование с последующим растворением остатка в водно-спиртовом растворе, затем добавляют изотонический раствор хлористого натрия и осуществля:и дополнительное экстрагирование,а остаток растворяют в ацетоне и вводят в колонку газового хроматографа с термоионным детектором, а о количестве алкилирующего соединения судят, сравнивая высоту или площадь пика исследуемой пробы с эталонной.

2. Способ по п. 1, о т л и ч аю шийся тем, что в качестве органического растворителя используют хлороформ, а основное экстрагирование производят в присутствии безводного сернокислого натрия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Obrecht et а Ф, Stach. F Krebsforsch, бб, 151, 1964 °