Способ определения состояния клеточного иммунитета

Способ определения состояния клеточного иммунитета

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскими

Социалистических

Реслублик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (ii) 7891 04 (61) Дополнительное к авт. саид-ву е (22) Заявлено 280878 (21) 2658608/28-13 (51) М. Кл.з

A 61 Б 10/00 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР пв делам изобретений и открытий

Опубликовано2 312.80. Бюллетень ¹4 7

Дата опубликования описания 23. 12. 80 (53) УДК 6 12 . 017 . 1 (088.8) (72) Автор изобретения

С, Н, Атанадэе

Научно-исследовательский институт полиомиелйва, и вирусных энцефалитов (71) Заявитель (5(() СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ КЛЕТОЧНОГО

ИММУНИТЕТА

ИИПЛ= оо (- =, 30

Изобретение относится к медици:не и может быть использовано для выяснения этиологии и диагностики ряда заболеваний.

Известен способ определения состояния клеточного иммунитета путем проведения реакции между лейкоцитами исследуемой крови и антигеном с последующим инкубированием реакционной смеси и определением адгеэивных свойств лейкоцитов (11.

Однако известный способ требует больших объемов крови (15-20 мл), трудоемок и длителен.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Эта цель достигается тем, что для проведения реакции используют цельную дефибринированную кровь, реакционную смесь помещают в миграционные капилляры ПерфильеваГабе, затем центрифугируют и по степени уменьшения 3оН адгезии лейкоцитов в капиллярах определяют состояние клеточного иммунитета;

Определение клеточного иммунитета осуществляют следующим образом.

Исследуемую кровь, взятую у пациента из локтевой вены в количестве 1-2 мл, (ефибрийируют при помо2 щи стеклянных бус диаметром около

2 мм, вносят по 0,1 мл в лунки из аппарата Такачи . В эти лунки при помощи петель из названного аппара5 та прибавляют по 0,025 мл антигена и его контроля (в одну лункуантиген, в другую — контроль).Иэ каждой лунки заполняют кровь по две пластины с миграционными капил10 лярами (всего по 10 капилляров).

Затем пластины маркируют, торцовые отверстия капилляров герметиэируют зубным цементом и после затвердения последнего центрифугируют

10 450 g. При этом происходит четкое расслоение крови в капилляре на зону эритроцитов, зону прилипших лейкоцитов и зону плазмы.

Замер длины зоны прилипших лейкоцитов в капилляре производят при помощи окуляр-микрометра под микроскопом при увеличении в 56 раз и выражают. в единицах шкалы микрометра. Показателем выраженности кле25 точного иммунитета служит индекс ингибиции прилипания лейкоцитов (ИИПЛ), который вычисля от по формуле

789104 где Т. — средняя длина зоны прилипших лейкоцитов в 10 капиллярах, содержащих кровь с антигеном; средняя длина зоны прилипших лейкоцитов в 10 капиллярах, содержащих кровь с контролем антигена.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Отделение корено- )0 го клеточного иммунитета.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мп исследуемой дефибринированной крови.. В первую лунку добавляют 0,025 мл коревого антигена в рабочем разведении. Рабочее разведение данной серии антигена находят . предварительно путем построения кривой зависимости выраженности реакции при серийных разведениях антигена с кровью доноров заведомо .иммун- 20 ных. В качестве коревого антигена используют культуральную жидкость перевиваемых клеток ПАО, инокулированных штаммов Ленинград-4 или

Эдмонстон вируса кори. Во вторую 25 лунку. добавляют 0,025 мл контроля антигена в разведении соответствующем рабочему разведению коревого антигена. В качестве контроля антигена используют культуральную жидкость незараженных клеток IIAO.

После перемешивания крови с антигеном (или .контролем антигена) иэ каждой лунки заполняют по две пластины с капиллярами (из каждой лунки по 10 капилляров). Торцовые отверстия капилляров герметизируют зубным цементом и, после затвердения последнего, центрифугируют 10 мин при 450 g. Затем замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опыт- 40

I ных и 10 контрольных капиллярах, вычисляют .среднюю арифметическую для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина зоны лейкоцитон в опытных капиллярах равн 8,3+0,9 единиц 4 шкалы микрометра и в контрольных—

16,0+1,4.. Индекс ингибиции прилипания лейкоцитов равен

4оо(1- — =48 /о.

83

16O )

Пример 2. Определение кле точного иммунитета к вирусу клещеного энцефалита.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мп исследуемой дефибрини рованной крови. В первую лунку добав ляют 0,025 мл антигена нируса клещевого энцефалита в рабочем разведении, а во вторую лунку — контрЬль антигена в том же объеме и в аналогичном разведении. В качестве анти- 60 гена вируса клещевого Энцефалита используют надосадочную жидкость гомогената мозга белой мыши, инокулированной штаммом Софьин вируса клещевого энцефалита. Контролем антиге- б5 на служит надосадочная жидкость гомогената головного мозга интактной мыши.

Кровь перемешивают с антигеном (или с контролем) и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров. Отверстия последних герметизируют и пластины с капиллярами центрифугируют 10 мин при 450 g. Замеряют длину эоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и

10 контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте равна 8,6

0,98 и в контроле 15,9+0,74 единиц шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкопитов равен со g- „, =46О/о.

Пример 3. определение клеточного иммунитета к туберкулину.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мл исследуемсй дефибринированной крови. В первую лунку добавляют 0,025 мл коммерческого туберкулина в рабочем разведении, а во нтЬрую лунку контроля антигена которым служит среда Р 199, при помощи которой разводят туберкулин.

Кровь перемешинают и из каждой лунки заполняют по 10 калиллярон.

Отверстия капилляров герметизируют и пластины с капиллярами центрифу— гируют 10 мин. при 450 д. Затем замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и 10 контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте 6,9+0,8 и в контроле 16,2+

2,0 единиц шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкоцитон равен юо(- — ) = 7 /оПример 4. Определение клеточного иммунитета к экстракту белого вещества мозга.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мп исследуемой дефибринированной крови. В первую лунку добавляют 0,025 мл рабочего разведения экстракта из белого вещества мозга, приготовленного по Casals, а но вторую лунку в этом же объеме контроль антигена, которым служит среда Р 199, при помощи которой готовят и разводят экстракт.

Кровь перемешивают и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров.

Отверстия капилляров герметиэируют и пластины с капиллярами центрифугируют 10 мин при 450 g Затем замеряют длину эоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте 11,9+ 1,3, а в контро789104

Составитель С.Малютина

Редактор С.Патрушева Техред Н.Ковалева Корректор%.Макаренко

Заказ 8920/3, Тираж 673 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035,Москва,Ж-35,Раушская наб.,д.4/5 т

Филиал ППП "Патент",г.ужгород, ул.Проектная,4 ле 16,5 Г1,1 единиц. шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкоцитов равен

100(Ь g )=. 27 ФУ

ИД

Предлагаемый способ позволяет повысить производительность труда (расход времени на одну реакцию нримерно 0,5 ч, а при известном спОсобе - около 5 ч). !

Благодаря использованию в качестве исследуемого материала цельной крови и капилляров Перфильева-Габе в предлагаемом способе затраты исследуемой крови существенно сокращаются. Так, при исследовании клеточного иммунитета к 1-2 антигенам предлагаемым способом достаточно

0,6-0,8 мл крови, в то время как при известном способе для этих целей необходимо 15 мл крови.

Формула изобретения

Способ определения состояния клеточного иммунитета путем проведения реакции между лейкоцитами исследуемой крови и антигеном и определением адгеэивных свойств лейкоцитов, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, для проведения реакции используют цельную дефибрини- раванную кровь, реакционную смесь помещают в миграционные капилляры

Перфильева-Габе, затем центрифугиру" ют и по степени уменьшения зон адгезии лейкоцитов в капиллярах опре+ деляют состояние клеточного иммунитв та.

Источники информации, 15 принятые во внимание при экспертизе

1. НаЦ 16ау W.6.,Mafuish A. jsbi-.

sher W.Í.Defection of antitremourееИ mediated immunity and :serum

20 blocking factors in cancer patients

by the feucocite adherence inhibition test.-British J. Cancer, 1974, 29,1, р.34