Способ определения железопро-теидов

Способ определения железопро-теидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Ресиублик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 19.07.79 (21) 2799744/30-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51) M. Кл.з

G 01N 31/22

Государственный комитет (43) Опубликовано 07.01.81. Бюллетень № 1 (53) УДК 543.545 (088.8) ло делам изобретений и открытий (45) Дата опубликования описания 07.01.81 (72) Авторы изобретения

Н. Е. Алешин, Э. P. Авакян и Е. П. Алешин (71) Заявитель

Кубанский ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственный институт (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖЕЛЕЗОПРОТЕИДОВ и., ". ; ъ

Изобретение относится к биохимическому анализу белков и может быть использовано

8 биохимии, физиологии и практическом культивировании живых организмов.

Известен способ определения железопро- 5 теидов путем проявления индивидуальных белковых компонентов, разделяемых электрофорезом в инертном носителе, на основе способности этих компонентов прочно связывать красители или преципитирующие 10 агенты (1).

Известен также способ определения железопротеидов, включающий диск — электрофорез белков анализируемого препарата в полиакриламидном геле и последующую IG инкубацию геля в присутствии веществ, образующих с железопротеидами окрашенные соединения (2).

Однако данный способ не позволяет определять полный спектр железопротеидов. 20

Способ дает возможность определять электрофоретические спектры только тех железопротеидов, которые обладают ферментативной активностью и не позволяет определять электрофоретические спектры 25 весьма важной группы железопротеидов, не являющихся ферментами.

Описанный способ, кроме того, позволяет определять электр офоретический спектр только одной изоферментной группы желе- 30 зопротеидов, исключая возможность определения электрофоретического спектра железопротеидов одновременно.

Целью изобретения является более полное определение спектра железопротеидов.

Поставленная цель достигается тем, что инкубацию геля проводят в присутствии сульфида натрия.

Пример. Навески свежего растительного материала (апексы, корни, листья риса

Oryza sativa сорт «Краснодарский — 424», фаза кущения) гомогенизируют трисглициновым буфером. Затем проводят электрофорез гомогената. В полиакриламидном геле поддерживают режим: напряжение 2400 в, ток — 2 МА на трубку (при движении белка в концентрирующем геле); 550 в и 4 МА соответственно (при движении белка в рабочем геле). По окончании электрофореза гели помещают в 0,2%-ный раствор сульфида натрия. Через 15 мин в зонах расположения.железопротеидов появляется черная окраска. Электрофоретические спектры железопротеидов различных тканей риса различны. Эти различия характеризует неодинаковость набора активных и регулируемых генов в специализированных и неспециализированных тканях риса, а также неодинаковость этих тканей по функционированию

794512

Формула изобретения

Составитель Т. Роденкова

Техред А. Камышникова

Корректоры: В. Нам и А. Степанова

Редактор Н. Тимонина

Заказ 44/14 Изд. М 147 Тираж 915 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 окислительных и электронно-транспортных систем.

Спектр железопротеидов апекса представлен слабоокрашенными зонами с относительной электрофоретической подвижно- 5 стью (ОЭП) 0,52 — 0,62; 0,7 — 0,86; 0,87 — 0,89 окрашенной зоной с ОЭП 0,6 г — 0,7 и интенсивно окрашенной полосой с ОЭП 0,87.

Корни имеют иной спектр железопротеидов: слабоокрашенные зоны с ОЭП 0,54 — 0,58 и 1о

0,77 — 0,87; окрашенная зона 0,58 — 0,77 и интенсивно окрашенная зона 0,87 — 0,91.

Листья также имеют отличия в спектре железопротеидов. Их спектр состоит из слабоокрашенных зон с ОЭП 0,58 — 0,6; 15

0,77 — 0,83; окрашенной зоны 0,6 — 0,77 и интенсивно окрашенной зоны 0,83 — 0,9.

Таким образом, установлено, что по содержанию интенсивно окрашивающихся железопротеидов листья превосходят корни, а 20 последние апекс. При этом листья содержат электрофоретически менее подвижные формы интенсивно окрашивающихся железопротеидов. По всей видимости, подобные изменения электрофоретического спектра 25 железопротеидов различных тканей риса связаны с различными физиологии по разному дифференцированных клеток, обусловленных различиями в составе блоков активных, регулируемых и заблокированных ге- 30 нов.

Это значит, что предлагаемый способ позволяет характеризовать такие важнейшие физиологические системы клетки, как электронно-транспортные цепи, системы окислительно-восстановительных ферментов и активность генов, их контролирующих, Способ определения железопротеидов позволяет решить ряд практических задач прикладной биохимии и физиологии, в том числе характеризовать набор активных и регулируемых генов в данной ткани, отвечающих за синтез железопротеидов, а также физиолого-биохимические различия тканей, связанные с неодинаковостью спектров железопротеидов.

Способ определения железопротеидов, включающий диск-электрофорез белков анализируемого препарата в полиакриламидном геле и последующую инкубацию геля в присутствии веществ, образующих с железопротеидами окрашенные соединения, отличающийся тем, что, с целью более полного определения спектра железопротеидов, инкубацию геля проводят в присутствии сульфида натрия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Уильямс Б. и Уилсон К. Методы практической биохимии. М., «Мир», 1978.

2. Биохимические методы в физиологии растений. М,, «Наука», 1971, с. 113 — 136 (прототип).