Способ получения глюкоамилазы

Способ получения глюкоамилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

С©й>В Соеетскик

Соцнаамстнческик

Реищблнк

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТИЛЬСТВУ

<11800185 (61) ???????????????????????????? ?? ??????. ????????-????????” (22) ???????????????? 24.03.79 (21} 2745896>

Опубликовано 3Щ)1.81, Бюллетень М 4

Дата опубликования описания 3001В1 (51)М. Кл.з

C 12 D 13/10

Государственный комитет

СССР оо делам изобретений н открытий (53) УДК 5 7 7 . 1 5 . ,07 (088.8) I

Е. А. двадцатова, Н . Н. Воронцова, Л.1С, Щт)ож

Э. И. Бурцева, Г. И. Комарова, В. Л. 11ровенко

Б. A. Устинников, Г. Ф. Булаваа, Т. B .(фасМей

И. А. Костецкая, В. B. Димитрова и В. С фри@

I ьК ii<

Всесоюзный научно-исследовательский и 1ст брожения (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОАИИЛАЗЫ

Изобретение .относится к микробиологической промьвнленности, а именно к способам получения ферментного препарата глюкаанщлаэы, используемой при ферментативном расщеплении крахмала в спиртовой и крахмалопаточной промышненйости.

Известен способ получения глюкоамилазы, предусматривающий выращивание посевного материала, приготовление питательной среды путем гидролиза кукурузной муки солодом или бактериальной ef, -амилаэой, разделение полученного гидролизата на два потока, один из которых используют на стадии 15 ферментации, а другой разбавляют до содержания сухих веществ 6-7% и используют для выращивания посевного материала, культивирование грибов

Aspergi11us awamori 466 на питатель- 20 ной среде, содержащей гидролиэат кукурузной муки t1 )

Недостатком известного способа является длительность процесса получения фермента (280-320 ч). 25

Цель изобретения — ускорение процесса.

Указанная цель достигается тем, что выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, З( содержащей крахмал, азотнокислый магний, однозамещвнный фосфорнокислый калий, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки, в течение 22-24 ч при температуре

28-30 С,гидролнэ кукурузной муки ведут в течение 30-40 мин при 5860 С при этом в питательную среду добавляют диаммонийфосфат .

Диаммонийфосфат добавляют s две стадии: на первой стадии — в количестве 0,2-0,4Ъ к объему среды после гидролиэа кукурузной муки, а на второй — 0,1-0,2В через 20-24 ч после начала культивирования.

Предлагаемый способ состоит в следующем, Посевной материал культуры Aspergi f3us аиавогi 466 готовят на жидкой питательной среде, содержащей картофельный крахмал, азотнокислый нат" рий, фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки.

Выращивание осуществляют в течение

20-24 ч при 28-30 С.

Подготовленную жидкую посевную культуру передают на стадию культи.вирования в инокулятор. для культивирования посевной культуры в иноку800185 ляторе и далее для ферментации в производственных условиях жицкую питательную среду готовят сле,ующим об— разом.

Кукурузную муку смешивают с водой в соотношении 1:3, разваривают при

148-154 С под давлением 0,3-0,4 MIla в течение 15-20 мин,охлаждают до 60 С и осахаривают солодовым молоком или бактериальной о(.-амилазой в течение

30-40 мин при 58-60 С до образования эритродекстринов. От полученного сус- 10 ла, концентрация сухих веществ в котором составляет 18-20%, делают объем среды и разбавляют его водой до концентрации сухих веществ 6-7% а в оставшуюся среду добавляют диаммоний- 15 фосфат в количестве О,ЗЪ к объему среды. Обе полученные среды подкисляют серной кислотой до рН 4,8, стерилизуют острым паром при давлении 0,1—

0,12 мПа в течение 30-40 мин, охлаж- () дают и направляют соответственно на стадию культивирования посевного материала и на стадию ферментации.

Продолжительность культивирования посевного материала в инокуляторе со- ставляет 22-24 ч при 28 -30 С, непрерывном перемешивании и аэрации стерильным воздухом, подаваемым в количестве 16 м > на 1 м среды в час. Ферментацию осуществляют на высококон— центрированном сусле при 35 С, непре- З0 рывном перемешивании и аэрации стерильным воздухом (30-40 м 3 на 1 м > среды в час). Через 20 -24 ч от начала процесса ферментации в среду ввогг дят оставшуюся часть диаммонийфосфата З5 (0,15%) для ускорения биосинтеза глюкоамилазы. Продолжительность ферментации — 72-108 ч. Готовая культура имеет активность не менее 170 ед/мл.

Пример. Посевной материал 40

Aspergil(us awamori 466 выращива.от на питательной среде следующего состава,Ъ:

Крахмал картофельный б

Na NOq 0,91

КН РО, 0,1

KCP 0 05

Ng5O4 0,05

Fe5O4 0,01

Солодовые ростки 3,0

Вода Остальное

Выращивание осуществляют в течение 24 ч при 30 С. Для культивирования производственной. стадии посевного материала и ферментации готовят производственную питательную среду.

Для .этого кукурузную муку смешивают с водой.при 45 С в соотношении 1:3, полученную массу разварива|от при

148 С, давлении 0,4 мПа в течение

15 мин. Разваренную массу охлаждают до 60 С,, затем осахаривают солодовым молоком в ечение 30 мин до красно-бурой окраски водной пробы, что указывает на образование эритродекстринов. Часть сусла разбавляют водой до концентрации сухих веществ бЪ, подкисляют серной кислотой до рН 4,8, стерилизуют острым паром при 121 С, в течение 30-40 мин охлаждают до о

30 С и используют в качестве питательной среды для получения посевного материала в инокуляторе.

В высококонцентрированное сусло вводят О,ЗЪ к объему диаммонийфосфата,подкисляют среду серной кислотой до рН 4,8 стерилизуют при 121 С, в течение 30-40 мин,охлаждают до 35 С и направляют на ферментацию. Фермено тацию проводят при 35 С,давлении

0,03 мПа и аэрации стерильным воздухом в количестве 30-40 м на 1 м среды в час при непрерывном перемешивании турбинной мешалкой с 150170 об/мин. Через 24 ч после начала ферментации для ускорения биосин- теза глюкоамилазы в среду вновь вводят диаммонийфосфат в количестве

0,15%.

Продолжительность ферментации составляет 184 ч, а активность полученной глюкоамилазы — 183 ед/мл.

Предлагаемый способ позволяет на несколько суток сократить процесс культивирования продуцента глюкоамилазы с сохранением высокого уровня активности фермента, Формула изобретения

1. Способ получения глюкоамилазы, предусматрива>ощий выращивание посевного материала, приготовление питательной среды путем гидролиза кукурузной муки солодом или бактериальной о -амилазой, разделение полученного гидролизата на два потока, один из которых используют на стадии ферментации, а другой разбавляют до содержания сухих веществ 6-7% и используют для выращивания посевного материала, и культивирование грибов

Аьрегу f3us awamori 466 на питательной среде, содер>кащей гидролизат кукурузной муки, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения процесса, выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, содержащей крахмал, азотнокислый магний, однозамещенный фосфорнокислый калий, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки, в течение 22 -24 ч при температуре

28-30 С, гидролиз кукурузной муки ведут в течение 30-40 мин при 5860 С, при этом в питательную среду добавляют диаммонийфосфат.

2. Способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что диаммонийфосфат добавляют в две стадии, на первой из которых в питательную среду в коли800185

Составитель Т. 1.елентьева

Техред И.Рейвес Корректо 0 Билак

Редактор Н. Бушаева зэ о оз7Б

Тираж 539 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Ра сная наб. д. 4 5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 честве 0,2-0,4% после гидролиэа кукурузной муки, а на второй стадии

0,1-0,2% к объему среды через 2024 ч после начала культивирования.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США Р 3988204, кл. 195-15, опублик. 197 .