Способ определения антибиотика гризина

Способ определения антибиотика гризина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

««802360 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 24.07.79 (21) 2807899/30-15 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М. Кл.з

С 12 F 19/54

С 12 R 1/545

Гасударственный комитет

Опубликовано 07.02.81. Бюллетень № 5

Дата опубликования описания 15.02.81 (53) УДК 615.779. .931 (088.8) па делам изобретений и открытий

P. И. Тумаркин, Е. Б. Кругляк, Л. Л. Губанова, А. М. Макухина, Л. А. Лямина, К. С. Масловский, В. Ф. Ковалев и Ц ."М..бмене

;" -. л

;.з 1=

Всесоюзный научно-исследовательский институт м кробйоло средств защиты растений и бактериальн х прЖаратов -, 4

,". с.. .-,.-,с: ., (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКА ГРИЗИНА

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам определения антибиотика гризина в препаратах кормогризина.

Антибиотик гризин, образуемый культурой Act. griseus и относящийся к группе стрептотрициновых антибиотиков, является основным действующим началом препарата кормогризина, применяющегося в животноводстве и прицеводстве при откорме молодняка. Препараты кормогризина выпускаются промышленностью в виде кормогризина-40, кормогризина-2, кормогризина-10.

Известен физико-химический метод определения грнзина в культуральной жидкости 11).

Метод заключается в выделении антибиотика из культуральной жидкости и его очистке либо с помощью ионообменных смол, либо путем отгонки с паром хромогена, получаемого при конденсации гризина с ацетилацетоном и определении очищенного антибиотика по реакции Эльмона-Моргана.

Недостатками метода являются: большая трудоемкость и многоэтапность стадии выделения и очистки антибиотика, в результате чего способ не может быть использован

2 для серийных определений при промышленном производстве кормогризина-2 (недостаточная точность определений, ошибка определений превышает 15%).

Цель предлагаемого изобретения — создание быстрого и точного способа определения гризина в препаратах кормогризина.

Эта цель достигается тем, что выделение гризина из исследуемых растворов проводят путем избирательного осаждения антибиотика 0,75 — 1,2%-ным раствором молиб1о деновокислого аммония в кислой среде при рН 1 — 3 и получением его в виде молибденовокислой соли. Определение антибиотика в осадке проводят с помощью реакции Эльсона-Моргана. Продолжительность стадии выделения и очистки составляет 10 — 12 мин.

Ошибка способа составляет 5 — 7%.

Пример 1. Построение калибровочного графика.

Готовят основной раствор из эталона гризина с концентрацией 1000 мкг/мл, из которого приготовляют разведения 500 и

750 мкг/мл. Далее в ряд центрифужных пробирок вносят по 5 мл каждого разведения.

Во все пробы приливают по 1 мл 0,1 НС1 и 1 мл 1%-ного раствора молибденовокиг.

802360

489 8 . 10

4 = — тПяà — = Ч1

4.= — оооо 36,8

766 5 10

Формула изобретения

Соответствующая конц.гризина в мкгlмп (по графику) Оптическая

Разведение плотность

1:8

0,29

0,425

766

Составитель Т. Тулякова

Редактор О. Иванова Техред А. Бойкас Корректор С. Щомак

Заказ 10153/32 Тираж 539 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент>, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 лого аммония. После двухминутной выдержки центрифугируют при 8 тыс.об/мин. По окончании сливают надосадочную жидкость.

К осадку приливают 5 мл 0,5 раствора

Na>СОз и 5 мл рабочего раствора ацетилацетона и проводят реакцию Эльсона-Моргана. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром.

На миллиметровой бумаге строят калибровочный график, откладывая на оси абсцисс содержание антибиотика в пробе в мкг/мл, а на оси ординат величину оптической плотности.

Пример 2. Анализ кормогризина-40.

Готовят 10%-ную суспензию кормогризина в 0,2 НС1. Экстракцию проводят в течение 2 час, После фильтрации фильтрат разводят дистиллированной водой 1:5, 1:8.

По 5 мл каждого разведения ломещают в центрифужные пробирки и далее поступают так, как описано выше.

Были получены следующие результаты.

Расчет содержания гризина в препарате рассчитывают по формуле: где А — концентрация гризина в препарате мг/г или г/кг; а — полученная концентрация по графику в мкг/мл; б — разведение фильтра препарата;

10 — начальное разведение экстракта;

1000 — для перевода мкг в мг.

16

Среднее = 38,7 мг/г, т. е. препарат кормогризина.

Пример 8. Анализ кормогризина-10.

То же, что и в п. 2, но разведение фильтрата делается 1:2.

Способ определения антибиотика гризина в препаратах кормогризина, включающий выделение антибиотика из исследуемых растворов и его выявление с помощью реакции

Эльсона-Моргана, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности т способа, выделение гризина из исследуемых растворов проводят 0,7 — 1,2%-ным раствором малибденовокислого аммония в кислой среде при рН 1,0 — 3,0.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Попов А. И., Скворцова М. М. Физико-химический метод определения концентрации гризина в культуральной жидкости.

«Микробиологическая промышленность», 1974, вып. 4, с. 1.