Способ получения нерастворимыхкомплексов протеолитических фер-mehtob

Способ получения нерастворимыхкомплексов протеолитических фер-mehtob

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е 8!0721

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 26.07.78 (21) 2649428/23-04 с присоединением заявки Л вЂ” (23) Приорптет— (43) Опубликовано 07.03.81. Бюллетень Л 9 (45) Дата опубликования описания 07.03.81,Ч 1-., з

С 07 G 7i02

Государственный комитет (53) УДК 577.15.07 (088.8) ио делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

И. Ф. Мишунин, Ю. В. Костенко и И. Н. Баширова (71) Заявитель Ордена Трудового Красного Знамени институт биохимии им. А. В. Палладина (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НЕРАСТВОРИМЫХ

КОМПЛЕКСОВ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к технологии получения нерастворимых ферментных комплексов и может быть использовано в ферментной промышленности.

В настоящее время ферментные препараты находят широкое применение в различных отраслях промышленности для гидролиза белковых субстратов из сырья животного и растительного происхождения.

Обычно в технологических процессах ферментные препараты используются однократно, так как их растворы загрязняются продуктами реакции, после чего активный ферментный раствор становится отходом, что снижает рентабельность производства.

Более перспективным является использование иммобилизованных ферментных препаратов. Однако большинство известных способов получения таких нерастворимых ферментных препаратов достаточно сложны и поэтому неприемлемы для воспроизведения их в промышленных услоьиях, стоимость получаемых ферментных препаратов достаточно высокая.

Известен способ получения нерастворимых комплексов протеолитических ферментов (в частности трипсина), согласно которому, 2,5%-ный раствор фермента в буфере обрабатывают раствором глутароиого альдсгида при концентрации последнего в

2 реакционной смеси до 2 /о в течение нескольких часов, затем проводят осаждение фермента сульфатом аммония (степень насыщения 80%) при перемешивании ь течение 2 ч. Затем удаляют непрореаг ровавший альдегид добавлением UaHSO:„oòäåляют осадок фильтрованием, который многократно промывают 0,15 М раствором

NaC1, буфером и водой и подвергают лио

10 фильной сушке (1).

Недостатком данного способа является

pro продолжительность, наличие большого числа операций, необходимость проведения лиофилизации.

15 Целью изобретения является упрощение процесса при сохранении высокой активности целевого продукта, а также ооеспеченис возможности внсдреиия способа в производство.

2о Указанная цель достигается тем, что в качестве раствора фермента используют

10/p-ный водный раствор фермента, в качестве раствора альдегида — раствор формалина (при концентрации последнего в

25 смеси 2,5 — 3 p), обработку ведут в течение

30 — 40 мин. Осадок отделяют центрифугированием и сушат при комнатной температуре.

Согласно изобретению, описывается зо сffocoo получения нерастворимых комплек810721. 1.итпв нОсть исрастворпмо- !отпор го протсзпма, цпи.,а

280/гпп

Активность псрастворимого протсзигиа.

/Е/

280/мп

1-!омср нпи 1!!!

15

l7

i 18

0.720

0,710

0.710

0,730

ОЯ95

071!

3

4 о

0,710

0,715

0.690

0,720

0,680

0,670

0,630

0,635

0,610

0,590

0,705

9 О 710

10, 0,700

20

30

3а aç 2151

Тираж 419

Изд. ¹ 235

Подписио;

Загорская типография Упрполиграфиздата Мособписпотио., .

3 сов протсолитических ферментов путем обработки 10 /о -ного водного раствора )фермента раствором формалина при копцептра!пш его в реакционной смеси 2,5 — 3% в течение 30 — 40 мин, отделсния осадка цент рифугированисм, промывания осадка водой

1! сушки при комнатной температуре.

Описываемый способ обеспечивает, крсмс того, возможность дополнительного из-!

- лечения целевого продукта пз промывных вод, полученных в результате промывки

ocaäKa, путем их объединения посл

4- — 5 промывок, упаривания в вакууме, повторной обработки формалином, цсптрифугирования и сушки.

Описываемый способ обеспечивает получение нерастворимых комплексов протсолитических ферментов с высокой удельной активностью на уровне 2 — 2,5 ед/м! оелка (по Кунитцу), что составляет 60 †-70% от исходной.

Получаемые ферментные препараты могут быть использованы в технологических процессах 10 — 15 раз без потери активности.

Пример 1. 1 кг протезима (активность

0,650---0,750 сд/мг), выпускаемого опытным производством ИОХ AH УССР, растворяют в 10 л дистиллированной воды и в раствор дооавляют 40%-ный формалин до концентрации 2,5",о, Раствор при перемешивая пи и тсмпсратурс 20 С выдерживаю .

30 мпн, после чего вьшавший осадок о" д,ляют цснтрифугировапием при 2000 об/м !н в течение 20 миц. Осадок суспецзируют в

10 л воды и вновь цснтрифугируют. Надосадочну!о кидкость сливают и осадок вновь промывают водой. Эту промывку повторяют 5 раз. После пятой промывки протеолитическая активность в надосадочной жидкости отсутствуст. Промывныс воды упаривактг в вакууме до концентрации протезима, соответствующей исходному раствору, (1 кг в 10 л волы) и вновь обрабатывают формалином. Осадок ферментного препарата послс пятой промывки высушивают в токе воздуха при комнатной температуре, после чего измельчают до размера частиц

0,2--0,5 мм в диаметрс.

Полученный препарат протезима нерастворим в воде и готов для промышленного использования.

Для определения протеолитической активности 2 мг нерастворимого протезима суспензируют в 1 мл воды и определения проводят по Кунитцу. Активность полученного препарата 2 — 2,5 ед/мг белка, что составляет 60 — 70% от исходной.

Ниже приведены данные, характеризующие активность препарата, полученного данным способом при многократном его использовании. В 15 циклах активность пре4 па рата составляет 0,690 — 0,720 сд/мг, что соответствует уровню 96 — 95 /о от исходной.

Пример 2. 1 кг протосубтилина Г-ЗХ (активность 0,05 — -0,06 ед/мг), выпускаемого Вильнюсским ферментным заводом, растворяют в 10 л дистиллированной воды, добавляют 3,5%-ный раствор формалина и дальнейшую обработку проводят так, кик описано в примере 1.

Активность полученного нерастворимого прспарата протосубтилина 2 — 2,5 ел,мг белка, что составляет 60 — 70% от исходной.

Полученные ферментные препараты с высокой удельной активностью предназначены для гидролиза белка в растворах, представляющих собой отходы пищевой, химической и легкой промышленности.

После отделения ферментного препарата, полученные белковые гидролизаты могут быть использованы в животноводстве.

Формула изобретения

Способ получения нерастворимых комплексов протеолитических ферментов, включающий обработку раствора фермента ра створом альдегида, отделение осадка, npoivibIBKy его водой и сушку. о т л и ч а !о щ и йс я тем, что, с целью упрощен. я процесса при сохранении высокой активности, в качестве раствора фермента испол зуют

10%-ный водный раствор фермента. в качестве раствора альдегида — раствор формалина при концентрации последнего в реакционной смеси 2,5 — 3%, обработку ведут в течение 30 — 40 мин. отделение осадка осуществляют центрифугированием, а сушку проводят при комнатной температуре.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

l. A. F. S. А. Habeeb, «Preparatior! о!

Eusymically Active, % ater-Insolulle Derivatives о! Trypsin», Archives of Biochemistry

and Biophysics, 119. 1697, 264 — 268 (прототип) .