Патогенный для взрослых мышей вирусящура типа a (103)-m, предназначен-ный для оценки иммуногенности противоящур-ной вакцины

Патогенный для взрослых мышей вирусящура типа a (103)-m, предназначен-ный для оценки иммуногенности противоящур-ной вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С A Н И Е»@0810

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союа СоветсКИМ

Социаиистичесиих

Республик

К АВТОРСНОМУ СВЙДЕТЕЛЬСТВЪ (б1) Дополнительное к авт, свид-ву— (22) Заявлено 26.12.78 (21) 2703845/30-15 с п1)нсосдннcниcм заявки J¹ (23) Приоритет— (51) M 1хл э

С 12 К 7/ОО

Государственный комитет но делам иэобретеннй н открытий (43) Опубликовано 07.03.81. Бюллетень ¹ 9 (53) УДК 616.988,43 (088.8) (45) Дата опубликования описания 07.03.81

В. П. Онуфриев, В. К. Муравьев, И. А. Пронин, В. И. Шоршнев, T. А. Леонтьева, А. В. Чепуркин, и В. И. Никонов

Всесоюзный научно-исследовательский ящурныи институт (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) ПАТОГЕННЫЙ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ МЫШЕИ

ВИРУС ЯШ,УРА ТИПА А-,(103)-М, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ОЦЕНКИ

ИММУНОГЕН НОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНОЙ

ВАКЦИНЫ

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть ис.пользовано в научно-исследовательской работе и биологической промышленности для оценки иммуногенной активности противоящурной вакцины из вируса Ат (103).

Известно, что иммуногенные свойства противоящурных биопрепаратов наиболее достоверно определяются в опытах заражения восприимчивых к этой инфекции животных на разных этапах поствакцинального периода.

В научно-исследовательской работе, связанной с изучением вируса ящура, используют метод искусственного заражения восприимчивых )кивотных, Из лабораторных животных для этой цели могут быть использованы 7 — 10-дневные мыши, морские свинки (1). Опыты на крупном рогатом скотс продолжительны, дороги и далеко не всегда выполнимы (например, при изучении иммуногенных свойств противоящурных вакцин), так как требуется большое количсство не иммунных к этой инфекции животных.

Определение иммуногенных свойств противоящурных препаратов на морских свинках требует наличия линейных или высококондиционных жпвотны <, а также сопровождается работой с вирусом, опас. ным в эпизоотическом отношении, т. е. от него заболевает крупный рогатый скот, овцы, свиньи и т. д. С целью устранения этих недостатков предлагается определять им5 муногенную активность противоящурных биопрепаратов на взрослых белых мышах путем тптрования на пммунных и контрольных животных штамма вируса гомологичного типа, адаптированного к взрослым

)10 м ышам.

Известны адаптированныс к взрослым мышам штаммы вируса 12). Однако не известен штамм вируса ящура типа

А7 (103) — N, адаптированный к взрослым

15 мышам

Целью предлагаемого изобретения является получение патогенного («индикаторного») для взрослых белых мышей вируса ящура типа Ат(103)-М, предназначен20 НОГО для Оценки иммунОГенностн Il;)оТНВоящурной вакцины количествснпым методом.

Штамм А7(103)-М получен из вируса

A-,(103), выделенного в эпизоотических ус95 ловиях От ОольнОГО яшуром крупн010 рОгатого скота.

Эппзоотпческпй штамм вируса ящура

Ат(103) непатогснен для взрослых мышей, гибель мышей нс вызывает; патогенен для и0 морских свинок и после их заражения в

810810

5 о0

ЗО

3 йлантарную поверхность задних конечностей вызывает ящур с генерализацией процесса; патогенен для крупного рогатого скота и после сго заражения вызывает образование специфических афт с генерализацисй ящурного процесса; титр шпрекц1.01шости на мышах-coc) HBx 10 "- -" ЛД5оул о на взрослых мышах — О, на крупном рогатом скоте 10 о, ОЛД о„,, на морских свинках 10 4 оо- - о ИДоо1л,.

Патогенный для взрослых мышей вирус

А7(103)-М получсн после 230 — 240 переме жа!Ощихся пассажей Вируса на мып1атахсосунах и взрослых мышах возрастающего веса и возраста. Адаптированный штамм имеет титр 10" -" " ЛД5о1„, на взрослых мышах весом 24 — 26 г.

Штамм хранится в музес Всссо;озного научно-исследовательского ящурного института под названием Ар(103)-М.

Морфология.

Структура, типичная для вируса ящура.

Антигснная структура.

В реакции связывания комплемента сохранены антигенные свойства исходного вируса. В перекрестной реакции нейтрализации нейтрализуется антисывороткой, полученной на вирус ящура А.(103).

Патогенность.

Патогснен для взрослых белых мышей любых весовых категорий и вызывает их гибель; патогенен для морских свинок, афты не образуются, характеризуется миотропность1о и вызывает гибель 50 — 80оф зараженных животных; слабо патогенен для крупного рогатого скота, вызывает образование атипичных афт только на месте введения вируса в слизистую оболочку языка бсз генерализации ящурно1о процесса; титр инфекционности на мышатахсосунах — 10"- " ЛДоо1 ., на взрослых мышах весом 24 — 26 г — 10 ",oЛД зоил, .

Репродукция в организме новорожденных и взрослых мышей.

Вирус 230 — 240 пассажа характеризуется высокой репродукционной активностью в организме новорожденных и взрослых мышей и накапливается до

10о,7+1,о11107,"-з+,о ЛДоо1м,„соответственно в течение 18 — 48 ч инфицирования, Пример использования заявляемого штамма для контроля иммуногенной активности противоящурной вакцины из вируса A7(103).

Для проверки иммуногенной активности вакцины используют взрослых мышей: самцов или неберсменных самок 2 — З-ме. сячного возраста весом 21 — 23 г, свободных от инфекционных и незаразных заболеваний (паратифа, эктромелии, лейкоза, авитаминозов и др.).

Парентеральное введение мышам противоящурной ГОА-форм олвакцины обуславливает образование у них иммунитета

4 против экспериментального заражения патогенными штаммами вируса ящура. Напряженность иммунитета зависит от введенной дозы и иммуноггчшой активности вакцины.

Иммунитет у мьпией, привитых разными дозами вакцины, определяют установлением 50о/о-пой защитной дозы по количеству выживших животных, зараженных через 21 день после вакцинации патогенным штаммом вируса.

Для заражения вакцинированны.. и контрольных мышей используют адаптированнь1й к взрослым бслым мышам штамм вируса ящура А7(103)-М. Вирус хранится при — 20 С. Титрованис вируса и проверку иммуногенности вакцины проводят на мышах, поставляемых из одного питомника.

При титровании готовят развсдсиия вирусВ на фосфатном буферном растворе рН

7,4 — 7,6 от 10- до 10 о. Каждое разведение вируса инъецируют 4 мышам подкожно в области спины в дозе 1,0 мл. Учет павших и выживших мышей проводят в течение 8 дней. Титры вируса рассчитывают но методу Рида и Менча.

Каждую серию вакцины проверяют на

4-х группах мышси по 20 голов в группе.

Перед инъекцией вакцину тщательно взбалтывают и вводят подкожно в областч спины мышам I группы по 0,1 мл, II группы — 0,2 мл, III группы — 0,4 мл и IV группы — 0,8 мл. В качестве контроля оставляют 20 невакцинированных животных.

На 21 день после вакцинации иммунизированных и контрольных мышей заражают патогенным для взрослых мышей штаммом вируса ящура. Заражение мышей проводят подкожным введением по 1,0 мл суспензии, содержащей 10 ЛДоо вируса.

Разведение вируса готовят непосредственно перед заражением на стерильном фосфатном буферном растворе с рН 7,4 — 7,6.

Флаконы с суспензией вируса во время работы должны находиться в ледяной бане. Наблюдение за мышами ведут 8дней.

Дозу вируса, равную 10"ЛД5о, рассчитывают на основании титра, установленного при проверке вирулентности.

Результаты наблюдения регистрируюг в специальном протоколе контроля, куда ежедневно заносят количество павших от ящура мышей в каждой группе. Клиника заболевания мышей ящуром характеризуется угнетенным состоянием, отказом от корма, развивающимися парсзами конечностей, переходящими в общие параличи.

Обычно мыши погибают через 48 — 96 ч после начала проявления клиники заболевания. животные, получившие большие дозы вируса, могут погибать через 24 — 48 ч после заражения.

На основании данных протокола после

5 окончания контроля составляется таблица по следующей форме:

1;оличество выжив!иих мьиисй, ги.

Дозы вакиииы, мс!

Количество и иней, взятых в оиь!т. ьит.

Отношение количества в!>!жив!иих и общему числу животных

810810 ном контроле на крупном рогатом скоте.

При сравнительном количествсчшом определении иммуногенности ГОЛ-формолвакцпны из лапинизированного вируса ящура

5 Ат(103) установлено, что 50%-ная защитная доза вакцины, опрсдслепная 118 мышах, равна 2/3 50%-ной защитной дозы вакцины прп контроле на крупном „"огатом скоте.

2/20

5/20

9,/20

12/20

О/20

5

9 !

О,!

0,2

0,4

0,8

Коитроси, !

П р и м е ч а н и с. В качестве примера приведены результаты определсния иммуногснности на мышах о;!ной пз серий

ГОА-формалвакцины из вируса яшура типа А7 (103) производства Омского оиокомбината.

Для установления 50% -ной за;цитной

ILo3bI вакцины (ИмДьс) I!o.!1 teHHble резуль- 25 таты обрабатывают методом прямолинейной регрессии.

Вычисление ИмД5, производят по формуле:

1g 1.мЭ;в =- 1gDH — о (ZLi — 0,5), где Dn — максимальная из испытанных доз; о — логарифм кратности дозы вакцины, т. е. 2;

Х1..1 — сумма значений;

1.! — отношение числа выживших < общему числу животных по каждой дозе вакцины.

По приведенному примеру в табл!ще:

/2, 5 9 !21

igLmDgo = 1g 0,8 — 1g2 — + — -,- — —; — х 20 20 20 20./ — 0,5=1,9 — 0,3 (1,4 — 0,5) =1,9— — 0,3 X 0,9 = 1,9 - — 0,27 = — 0,1 — 45 — 0,27 = — 0,37 =- 1,63

LmiDqo —— антилогарифму 1,63 = 0,43 мл.

Примечание: если в контрольной группе погибнет меньше 90% мышей, контроль этой серии повторяют после предваритель пой проверки вирулентности патогенного штамма. Изучением коррелятивной зависимости между 50%-ной защитной дозой вакцины, определенной на взрослых мышах, и контролем иммуногенности па крупном рогатом скотс установлено, что серии

ГОА-формолвакцины из штамма Ат(103), характеризующиеся ИмД5е 0,50 мл и менее, являются иммуногенными при качествен- 60

Формул;1 изо бр стени я

Патогенный для взрослых мышей! вирус ящура типа А-,(103)-М, предназначенный l;IH оценки 0.,1х1 !11огQHHocTH противоящурной вакцины.

Хранится в музее штаммов Всесоюзного научно-исследовательского ящурно1о института под названием А-,(103)-М.

Морфология.

Структура, типичная для вируса ящура.

Антигенная структура.

B реакции связывания комплемента сохранены анти генные свойства исходного вируса.

В перекрестной реакции нейтрализации нейтрализуется антисывороткой, полученной на вирус ящура Ат(103).

Патогенность.

Патогенен для взрослых белых мышей любых весовых категорий и вызывает их гибель; патогенен для морских свинок, афты не образуются, характеризуется миотропностью и вызывает гибель 50 — 80%-Hьtх зараженных животных; слабо патогенен для крупного рогатого скота, вызывает ofiразование атипичных афт только на месте введения вируса в слизистую оболочку языка без генерализации ящурного процесса; титр инфекционности на мышатах-сосунах — 109 -- о ЛДзо!,,„на взрослых мышах 107лз 10 ЛДво! л

Репродукция в организме новорожденных и взрослых мышей.

Вирус 230 — 240 пассажа характеризуется высокой репродукционной активностью в организме новорожденных и взрослых мышей и накапливается до 10 в * о

10 -"+ о ЛДзо,„,, соответственно в Iсчснпа

24 — -48 и инфицирования, Источне!ки информации, принятыс во вниманпс при экспертизе

1. Пяткин 1х, Д. Микробиология. M., «Медицина», 1971, с. 317 — 318.

2. Онуфриев В. П. и др. Пзучсинс иммуногсннь1х свойств вируса ящура lt противоящурных вакцин на !взрослых белых мышах. — «Ветеринария», 1965, № 5, с. 34 — 36 (прототип).