Способ получения лизогенных клоновмикроорганизмов

Способ получения лизогенных клоновмикроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Сееетскин

Социалистических

Республик

О П И С А Н И Е ()823427

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬ (6l ) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 15.03.78 (21) 25g102 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 23.04.81. Бюллет

Гюсуддрстеенний квинтет

СССР не делам изобретений и открытий

Дата опубликовпнип описания 2 (72) Автор изобретения

M. С, Йрожевкина

1 - . с -, " Ы

Ростовский-на-Лону государственный научно-исспедоваЪ ттьский противочумный институт

1 (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИЗОГЕННЫХ КЛОНОВ

М ИК Р ООРГЛН ИЗМ ОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения лизогенных клонов при генетических исследованиях.

Известен способ получения лизогенных клонов микроорганизмов путем совместно

5 го выращивания микробов и фага на питательной среде с последующим отделением биомассы, промыванием и посевом на пластинки с агаром, повторным посевом

10 культуры на пластинки с агаром, инкубированием в присутствии гомологичного фага и отбором лизогенных клонов (1).

Однако при известном способе необхо- димо вычисление количества культуры и фага при первичном посеве, большая про.должительность во времени получения лизогенных клонов (154 ч), значительный расход питательных сред, посуды, антифаговой сыворотки, трудоемкость метода, предусматривающего фильтрацию бульонных культур, посев и изучение каждой отдельной колонии.

Цель изобретения — упрощение способа.

Указанная цель достигается тем, что биомассу промывают раствором антифаговой сыворотки в физиологическом растворе, а повторный посев культуры осуществлятот методом реплик„

Способ поясняется следующим примером.

Пример. В пробирку с 2 мл бульона Мартена вносят 2 мл фага и 0,1 мл трехчасовой бульонной культуры микроба, который хотят пизогенизировать Инкулируют 18 ч при 37 С, центрифугируют при

3000 об/мин 20 мин, осадок трижды промывают (центрифугированием) раствором антифаговой сыворотки (на 5 мл физраствора добавляют 0,1 мл антифаговой сыворотки). После чего разведенный осадок засевают на две агаровые пластинки, так чтобы получать рост изолированных колоний. После 18 ч инкубации при 37 С о выросшие копании (основная чашка) переносят по методу реплик на пластинки двухслойного агара, в мягком слое кото.

23427

3 Ь рого содержится 0,2 мл трехчасовой бульонной культуры индикаторного штампа. о

После 18 ч инкубации при 37 С по зонам лиэиса вокруг колоний определяют наличие или отсутствие спонтанной фагопродукции.

Параллельно и одновременно колонии микробов с основной чашки изучают на чувствительность к гомологичному фагу.

Для этого в 4 мл полужидкого (0,7%/

/агара) расплавленного и остуженного до

45 ", вносят 0,1 мл цельного гомологич/ ного фага, тщательно перемешивают и выливают вторым слоем в чашку Петри на слой плотного (1-1/2%) агара. На приготовленные таким способом и подсушенные агаровые пластинки репликами переносят изолированные колонии с осново

:ной чашки. Выращивают 18 ч при 37 С.

На таком посеве вырастают колонии только реэистентных к фагу микробов. При . этом способе посева одновременно на одной агаровой .пластинке изучают сто и более колоний.

Для работы отбирают лизогенные колонии спонтанно продуцирующие фаг и резистентные к гомологичному фагу.

Предлагаемый способ позволяет получить лизогенные клоны в два с половиной раза быстрее, объединение процесса нромывания осадка с обработкой микробов антифаговой сывороткой для освобождения от свободного фага, использование метода реплик и селективных сред, при отборе лизогенных клонов, упрощает работу, сокращает время исследования и расхода матер иалов.

Формула изобретен ия

Способ получения лизогенных клонов микроорганизмов путем совместного выращивания микробов и фага на питатель ной среде с последующим отделением биомассы, промыванием и посевом на пластинки с агаром, повторным посевом культуры .на пластинки с агаром, инкубированием в присутствии гомологичного фага и отбором лизогенных клонов, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения способа, биомассу промывают раствором антифаговой сыворотки в физиологическом растворе, а повторный посев культуры осуществляют методом реплик.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. 3. i)tliLC%1OHS D19,, 1969, 114, 4, рр. 217-225.

Составитель С. Малютина

Редактор А. Шандор Техред,А.Бабинец Корректор М. Шароши

Заказ 2004/33 Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4