Поливалентная вакцина вгнки против лептоспироза животных и способ ее получения и использования

Поливалентная вакцина вгнки против лептоспироза животных и способ ее получения и использования

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскик

Социалистичесиик республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТО РСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<и>828459 (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву(22)Заявлено 02.01.79 (21) 2699101/30-15 (53)M. Кл.

А 61 К 39/02

С 12 N 5/00 с присоединением заявки РЙ

Гесудзрстеекный кевтет

СССР (23) Приоритет

Опубликовано 23.01е83 ° Бюллетень М 3

te делам кзебретеккй и открытий 53) Д 616.986. . 7: 615. 571/

/372(088.8) Дата опубликования описания 26.01.83

Ю.А, Малахов, А.П. Самохвалов, А.Н. Шуплико, В.

P.И. Алехин, В.С. Панов, Г.Ф. Денисенко, A.. Кодйффу :

И.Г. Серегин, й.А. Логинов, В.В. Шорохов, А ). Паиир

Н.И. Иванова и Г.Л, Соболева ;,,,1

Всесоюзный государственный научно-контрольный кйуСщррт..

1 х, >, ветпрепаратов (72) Авторы изобретения (7l ) Заявитель (54) ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ВГНКИ

ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХ

И СПОСО6 ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ

И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Изобретение относится к ветеринар" ной микробиологии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики лептоспироза животных.

Известна поливалентная феноловая вакцина для профилактики лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зверей и способ ее изготовле ния. Способ включает выращивание лептоспир шести серогрупп на сывороточной или альбуминовой среде в балло" нах, смешивание выращенных культур в определенных сочетаниях с последующим консервированием фенолом, рас" фасовкой, проверкой стерильности, безвредности, активности 1,, Известное предложение (11 не позволяет получить в вакцине достаточную концентрацию специфических антигенов, что вынуждает вводить ее животным двукратно в больших дозах: крупному рогатому, скоту - до 25 мл, свиньям - до 17 мл, 2

У вакцинированных животных создается непродолжительный иммунитет " у поросят и ягнят до трех месяцев, у телят и взрослых свиней - до шести месяцев.

Известна вакцина и способ ее изго" товления, включающая. выращивание шести штаммов лептоспир, ВГНКИ-1, ВГНКИ«2, ВГНКИ-3, ВГНКИ"4, ВГНКИ-5, ВГНКИ"6) осаждение лептоспир трихлоруксусной кислотой. в количестве 3,0"3,34 от" стаивание, декантирование надосадочной жидкости, дополнительное сгущение осадка центрифугированием, нейтрали" зацию кислоты в осадке 103"ным -водным раствором аммиака. К нейтрализованно" му центрифугату добавляют дистиллированную воду из расчета, чтобы осадок был сгущен в 25-30 раз по срав20 нению с исходной культурой. К полученной массе добавляют гидроксал до 33"

353"ной концентрации. Вакцина вызывает образование иммунитета продолжительностью до.шести месяцев у молод8459

/ 3 82 няка и двенадцати месяцев у взрослых животных при однократном введении в дозе 0 3 2,0 мп (21

Известная вакцина (2) не нашла при менения из-за сложной технологии приготовления и трудности введения ее животным вследствие большой плотнос" ти.

Цель изобретения - повышение иммуногенности вакцины.

Для достижения цели вакцина содержит антигены указанных серотипов при следующем соотношении, ВГНКИ"2 . l0""40

ВГНКИ"3 10"40

ВГНКИ-4 10-40

ВГНКИ-6 10-40 или антигенов укаэанных серотипов при следующем соотношении их, :

ВГНКИ" 1 10" 40

ВГНКИ" 4 10" 40

ВГНКИ-5 10""40

ВГНКИ-6 10-40 при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины:

Антигены лептoспир 100-120 мг

Гидроокись алюминия 25,7-28,9 г

Сывороточный белок 3,5-7,0 г

Консервант 0,1-0,2 r

Вода : До 1 л

Для достижения поставленной цели обрабатывают трихлоруКсусной кислотой половинный объем культуры лептоспир после осаждения белка и выдер" . живания надосадочную жидкость декан" тируют в количестве 50"703 от обработанной кислотой культуры, а оставшуюся часть после ее нейтрализации смешивают с отделенной второй половиной культуры.

Вакцину вводят в следующих дозах: крупному рогатому скоту в возрасте

1-12 мес. - 4,0 4 мл, а в возрасте от 12 месяцев и старше 8-10 мл, сви- ньям 6-10 мл, поросятам в возрасте

1-3 мес. вакцинируют двукратно в дозе 2,0-2,1 мл, мелкому рогатому скоту вакцину вводят в дозе 2-5 мл, а плотоядным - !"3 мл.

Пример 1. Для приготовления депонированной поливалентной вакцины

ВГНКИ против лептоспироза животных берут шесть штаммов лептоспирВГНКИ-l),ВГИКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4, ВГНКИ"5, ВГНКИ-6, отобранных по ши5

1О

55 роте иммуногенного спектра, обеспечивающих изготовление препарата, профилактирующего заболевание сельскохозяйственных и промысловых животных от лептоспироза в любой точке Советского Союза и в большинстве регионов мира. Выращивают их на сывороточной питательной среде, консервирует тиомерсалом в концентрации 1:10000, далее к половинному объему культуры до бавляют трихлоруксусную кислоту до

3- 3,13-ной концентрации для осаждения белка среды и лептоспир. Полученную смесь выдерживают 2-3 ч для вы" падения осадка, надосадочную жидкость декантируют в количестве 55"

604 от общего объема смеси, оставшийся осадок нейтрализуют аммиаком и%осле нейтрализации, смешивают со второй половиной исходной культуры, затем добавляют 6,0-6,14-ный раствор гидроокиси алюминия в количестве 29-30 .

Полученную таким образом вакцину расфасовывают и контролируют на активность, безвредность и стерильность.

Пример 2. Берут штаммы лепто спир, выделенные от сельскохозяйст.венных животных и селекционированные по признаку максимальной иммуногенной и анти генной акти вности и относящие" ся к шести серологическим группам:

ВГНКИ-1, ВГНКИ" 2, ВГНКИ»З, ВГНКИ"4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6.

Для изготовления вакцины штамьь выращивают на сывороточной среде в ре" акторах или баллонах, смешивают в двух вариантах:

1-й вариант: ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ"4 и ВГНКИ-6.

2-.й вариант: ВГНКИ-1, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5 и ВГНКИ-6 .

Смесь культур лептоспир консервируют мертиолятом 1:10000. Консервированную культуру выдерживают при комнатной температуре не менее 10-12 ч.

Половину объема консервированной и подготовленной для изготовления серии вакцины культуру осаждают трихпорук" сусной кислотой, добавляя к 1 л культуры 30 мл насыщенного раствора трихлоруксусной кислоты, Белок .среды под действием кислоты переходит в состояние геля и выпадает вместе с лептоспирами в осадок. Через 2 ч после добавления кислоты сифогом декантируют надосадочную жидкость в объеме 603 от общего количества обработанной .кислотой культуры.

8284

Осадок нейтрализуют насыщенным раствором аммиака до рН 7,0-7,2. При этом наблюдается растворение осадка.

Нейтрализованную массу вносят в реактор с оставшейся культурой лептоспир и добавляют 303 гидроокиси алюминия

63-ной концентрации, т.е. на 700 мл культур - 300 мл гидроокиси алюминия. Смесь энергично перемешивают и проводят расфасовку вакцины во флако-10 .ны при постоянной работе механической мешалки.

Вакцину, изготовленную этим способом, контролируют на стерильность и безвредность общепринятыми метода- 3 ми °

Таблица l

Состав вакцины

Содержание в l литре вакцины ми нимум максимум е ю аю е ае е е

Компоненты вакцины

МЙФ ВЮ

Антигены лептоспи р 100 мг 120 мг

Концентрированная

Предложенная

Адьювант состо- 29,2 г 35,9 г ящий из: а) гИцроокиси алюми ния и др ° солей

Выход вак" цины на

100 -л, 28,9 г культуры

25,7 r

100 л 5 л

100 л

Иожно привит ь голов

70г

Консерв ан т 0,1 г 0,2г

968,8 мл 970 6 мл

Вода а) Один литр готовой вакцины содержит: 100 мг антигенов лептосяир серогрупп Ictегоkaemorrkagiae, Са"

nico1a, Pomoka, Tarassovi (no 25 мг . на каждую ceporpynny) 29,2 г адьюванта, 0,1 r консерванта - соли тиомерсала (мертиолат) 970,6 мл. воды. б) 1 .л готовой вакцины 2-ro вариан" та содержит в своем составе: 120 мг антигенов лептоспир серогрупп GrippotypPosa, Pomona, Тагаззоч1, Hebdomadis (ло 30 мг на каждую серогрупб) сывороточного бел" ка крови 3,5 г

59 6 пу) 35,9 г адьюванта, 0,2 г тиомерсала, 963,8 мл водь .

Антигенные свойства вакцины контролируют на пяти кроликах весом 2,02,5 кг, которым вводят вакцину внутрибрюшинно однократно в дозе 3,0 мл.

Через 25-27.дней после введения вакцины у кроликов берут кровь и.определяют титр в каждой пробе сыворотки в РИА с лептоспирами всех серологи" ческих групп, входящих в состав вакцины.

Вакцину считают активной, если не менее, чем у четырех из пяти вакциа-" нированных кроликов титр сыворотки будет не ниже 1;400 к лептоспирам:

grippo-typhosa, pomona, tarassovi, hebdomadis e ниже 1:100 к лепто.спирам; ictегоhaemorrhagie, canicola.

Сравнительные данные по феноловой, концентрированной и депонированной вакцине представлены в табл. 2.

Таблица 2

Сравнительная характеристика вакцины

Показатели феноло» вая крупного рогатого скота 4000 2500 10000

Вакцина, изготовленная предложенным способом, имеет значительные преимущества перед применяемой феноловой и концентрированной вакциной.

Поливалентную вакцину ВГНКН вводят однократно в дозе: крупному рогатоМу скоуу до 12 мес. 4 мл., от 1 до

2 лет - 8 мл, взрослым животным»

10 мл, свиньям " до 3 мес. " 2 мл, от 3 до 10 мес. - 6 мп, хрякам и свиноматкам " 10 мл, мелкому рогатому скоту до 6 мес. - 2 мл, от 6 до

12 мес. - 2-5 мл, баранам и овцематкам - 5 мп.

828459 8 или антигенов указанных серотипов при следующем соотношении,их, 3:

ВГНКИ-1 10-40 вгнки-4 10-40

ВГНКИ-5 10-40

ВГНКИ-б 10-40 при соотношении компонентов на 1 л вакцины:

Антигены лептоспир 100-120 мг

Гидроокись алюминия 2,56-28,9 г

Сывороточный белок 3,5-7,0 г

Консервант 0,1,-0,2 г

Вода До 1 л

2. Способ получения поливаментной вакцины против лептоспироэа живот" ных по и. 1, включающий выращивание культур штаммов лептоспир в сь>воро" точной среде, консервацию лептоспир, добавку трихлоруксусной кислоты до 3,0-3,53-ной концентраций для осаждения белка среды и лептоспир, выдерживание полученной смеси для выпадения осадка, нейтрализацию ще лочью и добавление депонирующего ве". щества, отличающийся тем, что обрабатывают трихлоруксусной кислотой половинный объем культуры лептоспир, после осаждения белка и выдерживания надосадочную жидкость декантируют в количестве 50"703 от обработанной кислотой культуры, а оставшуюся часть после ее нейтрализа" ции смешивают с отделенной второй половиной культуры;

3 Способ использования вакцины по и. 1, о т л и ч а ю щ и " с я тем, что вакцину вводят в следующих дозах; крупному рогатому скоту в возрасте

1-12 мес. - 4,0-4,1 мл, а в возрасте от 12 мес. и старше - 8-10 мл, сви" ньям 6"10 мл, поросятам в возрасте

1"3 мес. двукратно по 2,0-2,1 мл, мелкому рогатому скоту - 2-5 мл, а плотоядным - 1-3 мл.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

l Инструкция по изготовлению и контролю вакцины против лептоспироза сельско-хозяйственных и промысловых животных, ГВУ МСХ СССР, 1968, 2..Авторское свидетельство .СССР

И 555664, кл. С 12 К 5/00, 1976.

Штаммы, используемые в вакцине, являются вакцинными и по широте иммуногенного спектра обеспечивают изготовление препарата, профилактируащего заболевание сельскохоэяйственных s и промысловых животных от лентоспироза в любой точке Советского Союза и в большинстве регионов мира, Технология изготовления вакцины по предложенному способу исключает необходимость концентрирования культуры с помощью центрифугирования, что является немаловажным фактором, если учесть, что в стране ежегодно изготавливают около 400000 л противолептоспирозной вакцины; сокращает потребность в трихлоруксусной кислоте.

Введение вакцины животным практически не вызывает затруднений. Концент" .рированную же вакцину можно вводить 20 .только иглами с широкими каналами, что вызывает лишнюю травму тканей животных, но и в этих случаях инъекционные иглы часто засоряются, что затрудняет .массовую вакцинацию животных . Предложенный способ позволяет изготовить из равного объема культуры в 2,5 и 4 раза больше доэ поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспироза животных, чем феноловой и концент"ЗО . рированной вакцины.

Способ позволяет сократить затраты . .биофабрично Ь производства, а применение вакцины обеспечит экономию затрат труда на 35"40 млн. инъекций ежегодно, что составит экономию более 2,8 млн. рублей, исключит гибель от лептоспироза животных, аборты и лептоспироносительство. формула изобретения 4о

1. Поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза животных, содержащая антигены из штаммов лептоспир серотинов ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6, консераант " гидроокись алюминия, сывороточный белок и воду, о т л и ч.а ю щ ая с я тем, что, с целью повышения иимуногенности, вакцина содержит антигены укаэанных серотипов при следую- 50 щем соотношении, Ж:

ВГНКИ-2 10""40

ВГНКИ-3 10-40

ВГНКИ"4 10-40

ВГНКИ-6 10-40

ВНИИПИ Заказ 10790/7 Тираж 711 Подписное филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная,4