Способ удаления тритильных защитныхгрупп c производных нуклеозидов,нуклеотидов и олигонуклеотидов

Способ удаления тритильных защитныхгрупп c производных нуклеозидов,нуклеотидов и олигонуклеотидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсхих

Социалистических

Реслублик

< >82862! с Ю ф ф ;. л с (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 14.05.79 (21) 2768602/23-04 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 30.03.82. Бюллетень № 12 (45) Дата опубликования описания 30.03.82 (51)М.Кл з С 07 Н 19/00

С 07 Н 21/00

Государственный комитет

СССР (53) УДК 547.455.07 (088.8) ло делам нзсбретеннй и открытий (54) СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ТРИТИЛЬНЫХ

ЗАЩИТНЫХ ГРУПП

С ПРОИЗВОДНЫХ НУКЛЕОЗИДОВ, НУКЛЕОТИДОВ И ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ

Изобретение относится к усовершенствованному способу удаления тритильных защитных групп с производных нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов и может быть использовано, например, в области химического синтеза фрагментов нуклеиновым кислот.

Тритильные группы щироко применяются для временной защиты первичных GIIHp товых групп в нуклеоъидах, нуклеотидах и их производных с целью предотвращения побочных реакций по указанным спиртовым группам в процессе си|нтеза олигонуклеотидов.

Известен способ удаления тритнльной защитной группы действием 80%-ного водного раствора уксусной кислоты,в |пиридине при температуре кипения в течение 5—

10 мин (1).

Тритильные защитные группы удаляют также дейспвием 1О/о распвора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене при температуре 0 С в течение 20 мин при дальнейшей нейтрализации пи рйдином, упари вании,и выделении продукта хроматографическим путем f2).

Известен также способ удаления тритилсодержащих защитных групп действием

80О/о-ной уксусной кислоты цри комнатной температуре;в течение 14 ч для тритильной, 2 ч для монометокситритильной и

15 мин для диметакситритильной групп i(3).

В процессе перечисленных выше обработок происходит значительная деградация (апуринизация) нуклеозидов,,нуклеотидов и олигонухлеотидав.

Наиболее близким к предлагаемому по достигаемому положительному эффекту является способ удаления тритильных защитных прупп с производных нуклеозидов, нуклеотидов .и олигонуклеотидов путем обработки последних бензолсульфокислотой при температуре 0 С в течение 20 мин. Реакцию осуществляют в смеси хлороформа со спиртом. Полученную смесь х роматографируют на силикагеле, а очищенный продукт из раствора, высаживают в инертный,растворитель. Конечный выход продукта 80—

900/о Щ

20 Недостатком да нного способа также является деградация производных нуклеозидов, нуклеотидов н Олигонуклеотидов, которая приводит к уменьшению выхода целевого продукта, а необходимость выделе25 ния целевого продукта методами адсорбционной хроматографии увеличивает п родолжительность синтеза ва 2 — 3 ч.

Цель изобретения — увеличение, выхода целевого продукта за счет устранения де30 градации производных нуклеозидов, нукле828671

1О

20

25 зо

65 отидов и олигонуклеотидов и упрощение процесса.

Поставленная .цель достигается описы ваемым способом удаления тритильных защитных групп с производных нуклеозидов, нуклеотпдов и олигонуклеотидов, который заключается в том, что тритил-, моно- .и диметоксивритильные производные нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов в инертном органическом растворителе, налримср, в хлороформе обрабатывают трихлоруксусной кислотой при комнатной температуре с последующим высаживанием п родукта. В качестве осадителя можно использовать непредельные углеводороды и их смеси с бензолом или эфиром.

П р,и м е р 1. Синтез N-бензоил, 3 -Обензоилдезоксиаденозина.

К раствору 730 мг 5-монометокситритил, Л -бензоил, 3 -О-бензоилдезоксиаденозина в

10 мл хлороформа добавляют 1 r трихлоруксусной кислоты. выдерживают раствор

10 im!!Ia при комнатной тем пературе, промывают 2 мл насыщенного раствора KHCO., затем водой, сушат органи ческий слой безводных сульфатом нат рия и прикапывают его к 150 — 200 мл смеси гексан-бензол (8: 2 по объему) . Осадок отделяют, промы вают 20 — -30 мл смеси гексан-бензоч и высушивают в вап<ууме. Выход хроматографически чистого продукта 415 — 430 мг, что составляет 90 — 94% в расчете на (МеО) Тп1А " IOBr) . Продукт анализир; ют методом тонкослойной хроматографии на силикателе в системе хлороформ-этанол (в соотношении 9: 1). Rf продукта 1,07 (относительно Rf(NeO)TrdT).

Пример 2. Синтез N-бензоилдезоксиаденозин-3 - (п-хлорфенил) (ц ианэтил) фосфата.

К раствору 850 мг 5 -диметокситритил, Х-бензоил дезоксиаденозин-3 -(и-хлорфенил) (цианэтпл) фосфата ((МеО) 2Тгс1Св р (C1Ph) (CE)) в 5 мл хлороформа добавляют

5 мл 4%-ного раствора трихлоруксусной кислоты в хлороформе, выдерживают pacvBop при комнатной тем пературе 5 мин, затем!npoMbIBaþò последовательно 0,1 М

NHqHC0q и водой. Раствор сушат безводным сульфатом, натрия и приеапывают его к 200 мл смеси гексан-эфир (9: 1 lno объему). Осадок отделяют центрифугированием и высушивают в вакууме. Выход хроматографичсски чистого продукта составляет

540 — 550 мг, что составляет 94 — 96% в расчете на (I!NeO)>TrdC" р (CIPh (CE).

Продукт анализнруют методом тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе хлороформ-этанол (в соотношении

9: 1) Rf продукта 0,80 (относительно

Rf (МеО) TrdT) .

Пример 3. Синтез 4-N-бензоил-ихлорфени I.Iesoêcèöèò! I Ièëèë- (3 — 5 ) -6-Nбензоил-3 -О-ацетилдезоксиаденозина (dC" р (C 1 P h) А" (ОАс) .

К раствору 120 мг 5 -тритил-4-N-бензоилп-хлорфенил-дезоксицитидилил - (3 —:- 5 ) -6Л -бензоил-3 -Π— ацетилдезоксиаденозина в

10 мл диоксана добавляют 1 мл 50% ного раствора трихлоруксусной кислоты в метиловом спирте, выдерживают раствор при комнатной тем пературе 20 мин и:прикапывают сго к 70 мл гексана. Осадок отделяют, промывают 20 — 40 мл смеси гексанэфир и,высушивают iB вакууме. Выход хроматографически чистого продукта 90 мг, что составляет 98% в расчете на TrdC"" p (ClPh) A " (ОАс) . Продукт анализируют методом тонкослойной хроматографии на сили кагеле в системе хлороформ-этанол (в сост ношении 9: 1) И,продукта 0,74 (относительпо Rf (MeO) TrdT) .

Формула изобретения

1. С пособ удаления тритильных защитных групп с .произ1водных нуклеозидов, нуклеопидов и олигонуклеотидов путем обработки тритил-, моно- и диметокситритильных производных нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов в инертном органическом растворителе детр итилирующим агентом с последующим высаживанием продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения процесса, в качестве детритилирующего агента используют трихлоруксусную кислоту и процесс осуществляют при комнатной температуре.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в:качестве инертного органического раств орителя используют хлороформ.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выса»кивание осуществляют .непредельными углеводородами;ил и .их смесями с бензолом или эфиром.

Источноки и нформации, прин ятые во внимание п ри экспертизе:

1. Kenner G. W., Todd A. P., Webb R. F.

and Юеугпопй F. J. Nucleotides, Part

XXVIII a Synthesis of ridine-5, Triphosphate (ИТР) J. Chem. Soc. 1954, 2288.

2. Catlin J. С. Cramer F., Synthesis of

uridinc-5 1. Org. Chem. 38 (2), 245 — 253, 1973, 3. М. Smith, D. Н. Raminber, 1. Н. GoldЬегд and Н. G., Khorana «Studies on Polynuc1cotidcs, XIV, Specific synthesis of the С5—

С;, inter-rebonucleotide zinkage J. Am.

Chem. Soc. 84, 430, 1962.

4. Sta vinsky 1., Hozumi Т., Narange S. А., Hahlib С. P., Фи К. Suntheses о1 Uridylyl— (3 — 5 ) - uridene and Vridylyl — (5 — 5 )—

",dcnosine г1цс1. Acids.

Res. 4 (2), 353 — 371, 1977 (прототип) .