Способ фиксации бактерий для электронноймикроскопии

Способ фиксации бактерий для электронноймикроскопии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

O ll И С А Н И K (ii)834125

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советскик

Социалистическик

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-вуI (51)М. Кл.

С 12 М 1/00

С 12 Н 1/00

С I2 R 1/00 (22) Заявлено 25. 10. 79 (21) 2832599/28-13 с присоединением заявки М(23) П риоритетГввудврственньв квинтет

СССР вв делам нэебретенкй н вткритнй

Опубликовано30. 05. 81. Бюллетень .% 20

Дата опубликования описания 30. 05 (53) УДК 576 8 .093.4(088.8) 6 .P+ тj()$ т/ 1»

В. Н. Милютин и Т.И. Горб асева

t !

Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (T2) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ФИКСАЦИИ. БАКТЕРИЙ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННОЙ

МИКРОСКОПИИ

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к методам электронной микроскопии бактерий.

Известен способ фиксации бактерий, заключающийся в том, что к взвеси бактерий, выращенных в жидкой питательной среде добавляют О,IX-ный раствор четырехокиси осмия на ацетат вероналовом буфере, центрифугируют,. .10 осадок суспендируют в мясопептонном бульоне, фиксируют в IХ-ном растворе четырехокиси осмия на том же буфере в течение ночи, а затем фиксированную суспензию разводят буфером, аент15 рифугируют и осадок обезвоживают(1).

Однако известный способ не всегда обеспечивает устойчивость структур бактериальной клетки в условиях фиксации.

Цель изобретения — повышение устойчивости структур бактериальной. клетки.

Указанная цель достигается путем выращивания микроорганизмов, приготовление взвеси бактерий в жидкой питательной среде на основе экстракта кормовых дрожжей с последующим добавлением О,IХ-ного раствора четырехокиси осмия.на ацетат-вероналовом буфере, центрифугированием, суспендированием полученного осадка в жидкой питательной среде на основе экстракта кормовых дрожжей, фикса" цией раствором четырехокиси осмия на том же буфере в течение ночи, центрифугированием и обезвоживанием осадка.

Пример 1. Бактерии чумы (штамм EЯ,.выращенные на агаре (посевная доза )О млн. м.кл.), петлей (3-4 петли}переносят в пробирку с

4,5 мл жидкей питательной среды на основе экстракта кормовых дрожжей (ЭКД); К полученной сусйензии добавляют 0,5 мл О,IX-ного раствора четы- ф>ехокиси осмия на ацетат-вероналовом

83412 буфере и центрифугируют 20 мин при 3-4 тыс. об./мин. После этого осадок суспендкруют в 0,1 мл питательной среды иа основе ЭКД, добавляют 1 мл

1Х-ного раствора четырехокиси осмия на том же буфере и фиксируют ночь.

Затем без разведения буфером суспензию центрифугируют и осадок .обезвоживают.

Жидкая питательная среда, в кото- 1О рой ведется фиксация, готовится extemporae Hs сухого концентрата: на

100 мл дистиллированной воды берется

3 г концентрата и 0,3 r NaCl, рН 7,27 4. 15

П р и и е р 2. Холерные вибрионы (штаммы 75 и 31)9),выращенные íà агаре, .фиксируют по методу, описанному в примере 1.

При исследовании тонкой структуры бактерий, фиксированных раствором четырехокиси осмия в питательной среде на бснове очищенного дрожжевого экстракта, зафиксирована хорошая сохранность бактериальиых структур. 25

Использование предлагаемого изобретения позволяет фиксировать бактерии различйых видов как бульонных, так ш. агаровых культур.

Формула изобретения

Способ фиксации баКтерий для электронной микроскопии путем выращивания микроорганизмов, приготовления взвеси в жидкой питательной среде с последующим добавлением 0,1Х-ного раствора четырехокиси осмия на ацетат-вероналовом буфере, центрифугированием, суспендированием полученнЬго осадка в жидкой питательной- среде, фикса- . цией раствором четырехокиси осмия на том же буфере, центрифугированием и обезвоживанием осадка, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения устойчивости .структур бактериальной клетки, приготовление взвеси микроорганизмов и суспендирование осадка ведут в жидкой питательной среде на основе экстракта кормовых дрожжей.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Тихоненко Л.С. и Беспалова И.А.

Метод сохранения тонкой структуры бактерий, зараженных фагом, на ультратонких срезах. "Микробиология", т.33, вып.2, 1964, с. 353-355.

Составитель Л. Чаплина

ТехредН.Бабурка Корректор Г; Решетник

Редактор Л. Филь

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 4128 47 Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва Ж-35 Раушская наб., д. 4/5