Способ получения изолимонной кислоты

Способ получения изолимонной кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Соцнапнсткческии

Рес убп

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

<11842106,Эв (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 291179 (21) 2844702/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 320681. Бюллетень No 24

Дата опубликования описания 300681

51 М Кдэ

С 12 P 7/48

Государственный комитет

ССС P но делам изобретений н открытий (53) УДК 661.734..16(088.8) (72) Авторы изобретения

Н.В. Шишканова, В.И. Илларионова., Т.В. Фино и A.Á. Лоэинов (j1) Заявитель

Институт биохимии и физиологии микрооргани

AH СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способу получения изолимонной кислоты, используемой в медицинской

5 и химической промышленностях.

Изолимонная кислота используется как биохимический препарат, который закупается за рубежом по очень высокой цене — 152.000 валютных руб. за 1 кг (фирма "Se rva", CQlA, 1975), Высокая стоимость продукта определяется сложностью методов его химического синтеза и последующего выделения.

Известен способ получения изолимонной кислоты с помощью дрожжей

HansenuPa Subpe РЕ cu тоза (3FO 1458) на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода этиловый спирт (1). 20

Однако данный способ не обеспечивает достаточно высокого выхода изолимонной кислоты, ее выход от испопьзованного субстрата (60,0 г/л) составляет 23,3%.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения изолимонной кислоты путем культивирования ее продуцента-штамма Candida 1,тро fytiса 704 на питательной среде, со- 3() держащей парафины в качестве источника углерода, азота, фосфора и минеральные соли в условиях аэрации(2).

Цель изобретения — повышение выхода изолимонной кислоты. указанная цель достигается тем, что в способе получения изолимонной кислоты, предусматривающем культивирование ее продуцента-штамма Candida Pipo kytica 704 на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, фосфора и минеральные соли в условиях аэрации, в качестве источника углерода используют зтанол .в концентрации 0,5-0,2%. Эту концентрацию этанола поддерживают путем его дробного введения в ферментационную среду.

Такое ведение процесса позволяет изменить соотношение синтезируемых дрожжами лимонных кислот в сторону преимущественного накопления изолимонной кислоты, что значительно облегчает процессы выделения этой кислоты из ферментационного раствора и последующей химочистки.

В предлагаемом способе используют штамм 704 коттзрый в связи с ор-, ганизацией Музея культур микроорганизмов в ИБФМ и передачей его в этот

842106 партию колб с посевной средой того же состава, объем инокулюма 5Ъ от объема среды.

Вторую партию колб также помещают на качалку и культивируют при

28-30 С в течение 48 ч. о

500 мл посевной культуры вносят в ферментационный аппарат с 4,5 л среды следующего состава, г/л: (й Н4 4. 5 04 2,4

HgS04 7 Н 0 1,4

NaC К 0,5

Са (йОЭ) т 0,8

КН РО4 2,0

К HPO 0,2

Этанол 200 (вносится дробно)

Соль Мора 3,5 мг

Тиамин 500 мкг институт зарегистрирован как Cand i—

da fi роfyt i са ИБФМ у-160.

Пример 1. Дрожжи Candida

tipo kytica 704 (в коллекции института ИБФМ У-160) поддерживают на агаризованной минеральной среде Ридер, имеющей следующий состав, г/л: (NH4)2 504 3,0

М9504 - 7 Hg O йаС В 0 5

Са (йод )2 0,4

КН РО4 1,0

К НРО4 0,1

Этиловый спирт 10,0

Агар-агар 25,0

Дрожжевой автолизат 2,0 мл

Смесь микроэлементов по Буркгольдеру 5 мл

Смесь микроэлементов по Буркгольдеру включает компоненты, мг/л cpeFe 0,05, Дрожжи выращивают на скошенном

arape в течение 3 сут при 28-30 С.

Клетки смывают 5 мл стерильной водопроводной воды, и суспензию переносят в колбу объемом 750 мл, содержащую 50 мл питательной среды.

Среда для выращивания посевного материала имеет следующий состав, г/л: (йН4 )г 504 0 3

И9504 . 7 Н О 0,7 йаСЕ 0,5

Са (NOg ) g 0,4

KH@PO4 1,0

К2НРО4 0,1

Этиловый спирт 10,0

Тиамин 500 мкг

Смесь микроэлементов 5 мл

Выращивание проводят в течение

48 ч на качалке (260 об/мин) при

28-30 С. Полученную посевную кульО туру переносят в новую партию колб 45 со средой того же состава в количестве 5Ъ от объема среды. Через 5 сут культивирования в среде накаплнвается 6,0 r изолимонной и 1,5 r лимонной кислоты. в 1 л. Выход изолимонной кислоты составляет 60Ъ от веса использованного субстрата. Соотношение лимонной и изолимонной кислот 1:4 ,П, р и м е р 2. Выращивание культуры Candida kipo fytica ИБФМ У-160 на с кошенном агаре проводят, как опискино в примере 1. Клетки смывают 5 мл стерильной водопроводной воды,.и суспензию переносят в колбы на 750 мл с 50 мл питательной среды. Состав среды такой же, как в примере 1.

Через 48 ч инкубации полученную посевную культуру переносят в новую

ВНИИПИ Эаказ 4982/25 Ти

Филиал П1111 Патент, г, Формула изобретения

Способ получения изолимонной кислоты путем культивирования ее продуцента-штамма Candida fiро tyti— са 704 на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, фосфора и минеральные соли в условиях аэрации, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода

55 целевого продукта, в качестве источника углерода используют этанол н концентрации 0,5-2,0Ъ.

Источники информации, принятые во внимание при экопертизе

1. Патент Англии N 1199700 кл. С 2 С, опублик. 1970.

2. Авторское свидетельство СССР

9 305187, кл. С 12 D 1/04, 1968.

Пеж 528 Лодпноное

Уетопод, ул. Проектная,4

Смесь микроэлементов 10 мл

2O Bo eM e MeHTaUHH pH среды поддерживают на уровне 6,0 путем введения 10Ъ NaOH, концентрацию кислорода поддерживают на уровне

70-80Ъ насыщения, температуру 28-30 С.

Концентрацию -этанола поддерживают на уровне 5-20 г/л. Если она снижается, до 5 г/л, добавляют еще этанол, но так, чтобы его концентрация в среде не превышала 20 г/л.

Через 138 ч культивирования в среде накапливается 66,0 г/л изолимонной кислоты (31,0 г/л лимонной кислоты); выход кислоты составляет

66,0Ъ от веса использованного субстрата. Соотношение лимонной и изолимонной кислот 1:2.

Таким образом, проведение фермен- тации по предлагаемому способу изменяет соотношение накапливаемых лимонных кислот в сторону преимущест40 ненного накопления изолимонной, повышая ее выход, и тем самым облегчает процесс выделения кислоты из ферментационного раствора и последующей химочистки.