Способ получения сорбента

Способ получения сорбента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Сеюз Советскнх

Соцналнстнческнх

Республнк

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТИЛЬСТВУ ни850203 (61) Дополнительное к авт. саид-ву

{22) Заявлено 231079 (21) 2859241/23-26 с присоединением заявки N9

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 300781. Бюллетень М 28

Дата опубликования описания 300781 .

А,В.Киселев, В.М.Коликов, И.В.Красильников, Ю..Никитин,Б.B.M÷åäëèøâèëè, Т.Д.Хохлова и Л.Б.Эльферт

Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов МН С< СР, Московский государственный университет им. M. ЛомЬнааова,,: и Ленинградский ордена Ленина политехнический инстиТут-им. М.И.Калинина (72) Авторы изобретения (71) Заявители (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕН 1А

Способ получения сорбента осуществляют следующим образом.

Аминокремнеэем смешивают с водным раствором глицеринового альдегида в

1/15 М фосфатном буфере с рН 6-7.

Суспензию встряхивают при 40оС 2-3 ч, затем провеяв щот дистиллированной водой, добавляют 1/15 М Фосфатной буфер с рй 6-7, обрабатывают порошком боргидрида натрия и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч.

Полученный сорбент промывают дистиллированной водой, загружают в хроматографическую колонку и уравновешивают буфером.. Суспенэию, содержащую вирус, вносят в колонку и элюируют тем же буфером, Пример 1. Для приготовления глицеросилохрома С-2 для очистки суспензии вируса клещеваго энцефалита. к 5.мл силахрама С-2 с удельной поверхностью 74 м г, удельным объемом пор 1 75 смог, средним диаметром пор

-1000 и добавляют 10 мл 9%-нога раствора 3-аминопропилтриэтаксисилана в этанале. Суспензию кипятят в течение

3 ч, затем проьжвают этаналом. Количество аминагрупп на полученном аминокремнеземе составляет 0,55 ммоль/г.

Изобретение относится к способу получения сорбентов для очистки вирусных препаратов и может быть использована для хроматографической очистки вирусных суспензий от прнмесных белков .

Известен способ получения сорбента путем обработки поверхности аминокремнезема модиФицирующими агентами (1) .

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ получения сорбента путем обработки поверхности аминокремнезема сначала раство-.1 ром глутароваго альдегида, а затем раствором белка (2) .

К недостаткам известного способа относятся низкая стабильность сорбен- 20 та и адсорбция им прнмесных белков, Цель изобретения — придание сорбенту инертности па отношению к белку и повышение еГо стабильности.

Поставленная цель достигается тем, 25 что в способе получения сарбента обработку поверхности аминокремнезема ведут сначала, водным раствором глицеринового альдегида, а затем баргидридом натрия. (51)М. Кл.з

В Ol J 20/10

С 12 М 7/02 .(53) УДК 661.183 (088. 8) 850203

Формула изобретения

Составитель Н. Строганова

Техред M.Ãoëèíêà Корректор М. Пожо

Редактор Л. Филь

Заказ 6183/9 Тираж 567 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 1 30 35, Москв а, Ж- 35, Раушск ая наб,, д, 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Аминосилохром промывают дистиллированной водой, обрабатывают 5 мл

10%-ного водного раствора глицеринового альдегида в 1/15 М фосфатном буфере с рН 6,3 при 40 С в течение 3 ч.

Осадок промывают дистиллированной водой, затем 1/15 М фосфатным буфером

5 с рй 7, добавляют 200 мг порошка боргидрида натрия, встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч и снова промывают дистиллированной водой. Этим сорбентом заполняют хроматографическую колонку 0,5 х 10 см и уравновешивают 0,1 м трис-буфером с

0,16 М НоСВ с рН 7,8. Затем в колонку вводят 0,1-1,0 мл суспензии вируса клещевого энцефалита, и элюируют ви- 15 рус тем же буфером. Во 2-3 мл элюата выходит до 90% очищенного вируса.

Белковые примеси элюируются из колонки в 3-4 мп элюата» Выход белков полный. 20

Пример 2. Для приготовления глицеростекла для очистки суспензий вируса клещевого энцефалита к 6 мл макропористого стекла МПС-10/0 В-ГХ с удельной поверхностью 50 м г, удель-»5 ным объемом пор 1,34 см/г, диаметром 3 пор 1100 добавляют 10 мл 6%-ного раств ора 3- аминопропилтризтоксисилана в этаноле, смесь нагревают до

50-70 С в течение 3 ч, а затем промывают дистиллированной водой. Коли" чество аминогрупп яа поверхности сорбента 0,13 ммоль/г.

Аминированное пористое стекло смешивают (после промывки дистиллированной водой) с 6-10 М 5%-ного водного N раствора глицеринового альдегида в

1/15 M фосфатном буфере с рН 6,3 и нагревают при 40 С в течение,3 ч.

Осадок промывают дистиллированной водой, затем 1/15 М фосфатным буфером, 40 добавляют 100 мг порошка боргидрида натрия и встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем снова промывают дистиллированной во-, дой.

Полученным глицеростеклом заполняют хроматографическую колонку 0,8 х х 12 см, уравновешивают 0,2 М трисбуфером с 0,15 М йоши% с рй 7,8. В колонку вводят 0,5-1,0 мл суспензии вируса клещевого энцефалита и элюируют вирус тем же буфером. Очищенный вирус полностью выходит после 2,5 мл элюата в объеме 1-1,5 мл. Примесные белки выходят полностью на 5-6 мп злюата.

В ходе предлагаемого в примерах процесса жидкостно-ситовой хромато" графии вирус клещевого энцефалита очищается от примесных белков на

99,6-99,7% . При использовании сорбента, получеййого по известному способу, выход белков в первых опытах составляет 40-50%, в послепующих 70%, Через 20 дней работы выход вируса из хроматографической колонки с известным аминокремнеземом снижается до

60-70%, а из колонок с предлагаемым сорбентом выход вируса остается полным.

Таким образом, использование пред-, лагаемого способа получения сорбента позволяет получить стабильный сорбент, не адсорбирующий примесные белки вирусных суспензий.

Способ получения сорбента для очистки вирусных препаратов путем обработки поверхности аминокремнеэема модифицирующими агентами, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью придания сорбенту инертности по отношению к белку и повышения его стабильности, обработку ведут сначала водным раствором глицеринового альдеги- . да, а затем боргидридом натрия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Авторское свидетельство СССР

Р 651814, кл. A 61 К 47/00, 1977»

2.Авторское свидетельство СССР по заявке М 2461698/26, кл. В 01 Ю 1/22, 1977 (прототип).