Субстрат щелочной фосфатазы

Субстрат щелочной фосфатазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОЛ ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социапистическик

Республик (

Государстоениый комитет

СССР ло делам изобретений н открытий

Опубликовано 07.08.81. Бюллетень М29

Дата опубликования описания 10 .08.8 1

Ю. 10 Кулис, В. Й. Разумас и А. А. Малинаускас (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Институт биохимии АН Литовской CCP (54)СУБСТРАТ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ и измерении количества продуктов, образующихся в результате этой реакции.

Однако известные субстраты позволяют определять активность щелочной фосфатаэы только в прозрачных средах(т.е. спектрофотометрическим путем)и не применимы в непрозрачных

10 средах- Определение активности щелочной фосфатаэы электрохимическим путем с использованием известных субстратов невозможно, так как последние образуют при гидролизе продукты, ко1$ торые легко окисляются при наложении напряжения.

Х

О и

0-P-OH т

011

Целью изобретения является повышение универсальности .субстратов, применяемых для определения активности щелочной фосфатазы, т.е. обеспечение возможности определения активности щелочной фосфатазы в мутных и окращенных средах.

Изобретение относится к применению моноэфиров ортофосфата общей формулы где Х вЂ” ОН в орта-положении или йн в пара-положении, в качестве субстрата для определения активности щелочной фосфатазы.

В литературе описаны субстраты для определения активности щелочной фосфатазы, например моноортофосфат нитрофенола, дифосфат фенолфталеина, фенилфосфат (11.

Определение активности щелочной фасфатазы заключается в проведении ферментативной реакции(в результате чего происходит гидролиэ субстрата) (5l)M. Кл.

G О1 N 31/14

С 12 и 9/16 .

С 07 F 9/09

С 07 С 39/02

С 12 (} I/42 (53) УДК 661.635. .5(088.8) где Х-ОН в орто-положении или NH в пара- о положении, в качестве субстрата для опрделения активности щелочной фосфатазы.

Указанные соединения получают известными способами 2,31.

Используемый в качестве субстрата моноортофосфат.п-аминофенола применяли ранее для синтеза в органической химии, а именно для синтеза N арилтиокарбамоил -и-аминофеноловых эфиров (2).

Моноортофосфат пирокатехина использовали ранее в качестве соединения, обладающего антиокислительными свойствами 31.

Пример.Для определения активности щелочной фосфатазы берут термостатированный буферный раствор, в конкретном случае 0,1 M раствор трис-НС1, содержащий 0,01 моль Mg504 (pH 8,0,температура 25оС)и субстрат2 ммоль моноортофосфата пирокатехина или 1 ммоль моноортофосфата . аминофенола. В раствор погружают электрохимический преобразователь, 35 состоящий из платинового анода, электрода сравнения и вспомогательного электрода, и вводят пробу определяемой щелочной фосфатазы. Потенциал анода в случае моноортофосфата пирока40 техника устанавливают 0,3 В, а в случае моноортофосфата п-аминофенола — 0,18 3.

Регистрируют увеличение тока во времени, скорость увеличения тока прямо

45 пропорциональна гидролазной активности. Измерение занимает 1-3 мин.

Формула изобретения

Применение моноэфира ортофосфата общей формулы

0 и

О-Р-OH

0Н где Х вЂ . ОН в орто-положении или 1ЧМ в пара-положении, в качестве субстрата для определения активной щелочной фосфатазы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, Berqmeyer H.0.,"Hethods of

Fnzymatic Analysis"Academic Press, N-y., london, 1965, 783.

2. Галстухова Н. Б., Панкина З.А., Берзина И. М, и Щукина И.Н. Синтез производных тиомочевины- Журнал органической химии,1974, 10,(1), 804-807.

3. Humphris КJ. Gerald S. néåchanlsms of Antioxidant Action: Products

of tne Reaction between Hydrope oxides

and î-Phenylene Phosphites", J. Chem

Soc Реги!п 11, 1о. 6, 1973, 831-835. .Результаты измерения активности щелочной фосфатазы при использовании в качестве субстрата 2 ммоль моноорто-5О фосфата пирокатехина следующие:

ВНИИПИ Заказ 5643/20 Тираж 907 Подписное

Филиал ППП "Патент", г„ Ужгород,ул.Проектная,4

3 853536 4

Указанная цель достигается приме- Скорость изменения Количество щенением моноэфира ортофосфата общей тока преобразова- лочной фосфатаформулы теля, нА/мин тазы„10 ед/мл

3,66 2,6

5,0 5,2

И 6,71 7,8

Х

0-Р -ОН 8,0 10,4

0Н 11,6 13,0

13,0 15,6

12,66 18,2

19,33 23,4

Результаты измерения активности щелочной фосфатаэы при использовании в качестве субстр,"та 1 ммоль моноортофосфата и -аминофенола следующие:

Скорость изменения Количество щетока преобразовате- лочной фосфателя, нА/мин тазы, 10 ед.мл

5 2,6

12 3 7,8

20,7 13,0

29,3 33,4