Способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом материале

Способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом материале

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

С нюэ Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВ ИТИЛЬСТВУ (455502 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) ЗаЯвлено 021079 (21) 2849191/28-13 с присоединением заявки N9 (23) ПриоритетОпубликовано 150881 бюллетень N9 30

Датаопубликования описания 150881 (53)М Кпз G 01 N 33/52

Государственный комитет

ССС Р по делам изобретений н открытий (5З) Д (б 1 2 . 0 15, 1 (088.8) (72) Авторы изобретения

Э.П.Титовец и В.В.Кошкин ( (1

p -: - - " /

Белорусский научно-исследовательский Жтс .иыут неврологии, нейрохирургии и физиотерапии (71) Заявитель (5 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ

В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине! для биохимических исследований °

Известен способ определения активности супероксиддисмутаэы в биологическом материале путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрированием продукта окисления Г1» .

Однако известный способ не обеспе- 10 чивает высокой точности.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Эта цель дос ти гаетс я тем, что способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом матери- 1 але осуществляют путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрированием продукта окисления, в качестве субстрата используют аминопроиэводные 1, 2 диоксибензола формуОН H>g

ОН

25 где R„ - аминоароматический или аминоалифатический остаток;

R — алкокси или аминоостаток. N

Пр едл а га етый спос об, определ ен и я активности супероксидцисмутазы осуществляют следующим образов..

В кювету спектрофотометра помещают эабуференную среду, например, 1/15 М фосфатный буфер рН 7,0 с

0,5 М ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) уравновешенную по кислороду с атмосферным воэдухом. Среду постоянно перемещают механической мешалкой, вносят материал, исследуемяй на активность супероксиддисмутаэы, и вводят 20 мкМ 4-анилино-5-метокси-1,2-диоксибенэола или другого аминодифенола, из указанных выше. Регистрируют увеличение оптической плотности на максимуме поглощения образующегося производного О -бенэохинона. Активность супероксиддисмутаэы рассчитывают по степени торможения реакции автоокисления, как принято для непрямых методов определения активности этого фермента.

Исследования показали наличие линейной зависимости между обратной величиной скорости автоокисления и количеством супероксидцисмутазы в широком диапазоне концентраций фермента, что позволяет, пользуясь этой зависимостью, определить эквивалент855502 ои мну„! он - р

Формула изобретения

Составитель С,Малютина

Редактор К.Волощук Техред М. Голинка Корректор Г.Решетник

Заказ 6896/61 Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ное количество фермента по величине скорости автоокисления АМОБХН2.

Использование предлагаемого способа позволяет проводить определения активности супероксиддисмутаэы в фи.зиологической области значений рН, что невозможно при использовании .известного способа. Тем саум обеспечивается возможность контроля активности этого фермента в условиях, близким к условиям его функционирования в биологических тканях. Способ обеспе чивает большую информативность и достоверность получаемых результатов и вместе с тем обеспечивает большую практическую значимость получаемой. информации. 15

Способ определения активности 20 супероксиддисмутаэы в биологическом материале путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрирова-, нием продукта окисления, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве субстрата используют аминопроизводное 1,2 диоксибензола формулы где R„- аминоароматический или амино алифатический остаток

R — алкокси или аминоостаток.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Misra Н.P. and TrioEovich Х

".ТЬе Кобе of Supегоxide anion in the аиСох1йо 1on of ср1перЬг1Ье апй

Simp(å assay ofor Supегоxide dismutase" Bio6.Chem. 1972, Т.247, с.31703175 .