Способ получения амида n -трет.бутоксикарбонилпролил-лейцил- глицина

Способ получения амида n -трет.бутоксикарбонилпролил-лейцил- глицина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(72) Авторы изобретения

С.Я.Иикста, У.О.Калей и Г.П.Вл (7l ) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИДА N -ТРЕТА

-БУТО КСИКАРБОНИЛ-ПРОЛИЛ-ЛЕЙЦИЛ-ГЛИКИНА

Изобретение относится к способу получения амида Й -трет-бутоксикарoL бонил(Вос)-пролил-лейцил-глицина (аминокислоты L-конфигурации, кроме глицина) который является исходным веществом для синтеза амида пролил5

-лейцил-глицина, применяемого в медицине для лечения паркинсониэма и в пептидном синтезе для получения биологически активных гормонов оксито10 цина и дезаминоокситоцина.

Известен способ получения амида

МЯ(Вос-пролил-лейцил-глицина путем классического синтеза с использованием для конденсации NÔ"Вос-амино15 кислот данной последовательности метода смешанных ангидридов с иэобутиловым эфиром хлоругольной кисло- . ты при температуре -15-(-20 С). о

Отщеплеиие Вос-защиты проводят 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане. Аммонолиэ полученного этилового эфира Ф-Вос-пролил-лейцил-глицииа осуществляют насыщенным ра, створом аммиака в метаноле. Выход ,соответствующего амида в пятистадий- ном синтезе составляет б9Х (11.

Недостатками известного синтеза являются сравнительно низкий выход целевого продукта вследствие многостадийности процесса и слохность технологического процесса, связанная с применением хлористого водорода и проведением синтеза при низкой температуре. . Наиболее близким к предлагаемому является способ твердофазного синтеза амида Й01"Вос-пролил-лейцил-глицина на аминоацилполимере, путем ступенчатого наращивания аминокислот с С-конца, где s качестве аминоацилполимера использован Впс-глицил-оксиацетил-полистирол. Для защиты hf -àìèíîãðóïï на каадой стадии используют Вос-группировку.

Отщепление Вбс-группы перед калщой стадией конденсации проводят 2,5 н раствором хлористого водорода в этиловом эфире уксусной кислоты, а нейсле перекристаллиэации из воды составляет б1Ж, считая на Вос-глицил-оксиацетил-полис тирол (2) .

Однако известный способ отличается низким выходом целевого продукта слозностью проведения технологического процесса, связанной с применением газообразного хлористого водорода в качестве реагеита для отщепления Вос-защиты из-за необходииости полной гериетичности аппаратуры, и загрязнением окружающей среды, так как газообразный хлористый водород является сильнодействующим ядовитым веществои.

Цель изобретения — повышение выхода, упрощение технологического процесса и обеспечение защиты окружающей среды.

Поставленная цель достигается теи, что согласно способу получения амида и -Вос-пролил-лейцил-глицина путем ступенчатого наращивания аминокислот с С-конца твердофазнии методом на аминоацилполииере, исходя из N -трет-бутоксикарбонил глицил-сефадекса, с использованием в качестве конденсирующего средства

45 дициклогексилкарбодиииида, отщепленнем М -Boc-защитной группы на каждой отадии осуществляют 0 5-1 н раствором серной кислоты в уксусной кислоте. Конденсацию N Boc-аминокислоты с аминоацилсефадексом осуществляют при молярных соотношениях

d и -Вос"аминокислоты, дициклогвксилкарбодиимнда и аииноацил-сефадакса

3:1, 5:1.

Используемый в качестве аминою ацилполииера Вос-глицил-сефадекс является полярным гндрофильним аии40

3 85711 трализацию смеси проводят lOX-ным раствором триэтиламина в диметилфориамиде. Конденсацию Вос-аминокислот с глицил-оксиацетилполистиролом осуществляют дициклогексилкарбодиимидным методом при молярных соотношениях

Вос-аминокислоты, дицикпогекснлкарбодиниида (ДЦГК} и глицил-оксиацетилполистирола 3;3:! соответственно.

Реакция пептидообразования в случае 1О лейцина протекает в течение 3 ч, а пролина - 2 ч. Обработкой полученного пептидил-полимера насыщенным раствором аммиака в метаноле осуществляют одновременно отщепление пеп- д тида от полимерного носителя и аммонолиз пептида. Выход продукта по7 4 ноацил-полимерои. Гидрофильность и доступность активных центров способствует более благопрнятноиу проникновению реагентов во все участки набух него геля и тем саиьи ускоряет реакцию отщеплеиия Вос-защиты.

Применение в качестве реагеита для отщепления Вос-защиты 0,5-1 н раствора серной кислоты в уксусной кислоте позволяет провести реакцию отщепления селективно, т.е. не затрагивая слокноэфирной связи между аминокислотой и полимером, что исключает отщепление пептида от полимерного носителя и обеспечивает увеличение выхода.

Достигается такыре упрощение проведения процесса, так как отпадает необходимость работать с токсичным и:коррозийныи хлористым водородом, Кроме того, время отщепления Вос-защиты уменьшается 2 раза °

Применение в реакции конденсации

-Вос-аминокислоты, дициклогексилкарбодиимида и аминоацилполимера в иолярных соотношениях 3:1, 5:! соответственно способствует преимущественному протеканию реакции пептидообразования, а не побочной реакции перегруппировки промежуточного активированного производного аминокислоты с дициклогексилкарбодиииидом в неактивную аииноацилмочевину, препятствующей полному протеканию реакции конденсации.

Время протекания реакции конденсации для Вос-лейцина и Вос-пролина составляет 1,5 ч.

Синтез Вос-Pro"Leu-Gly-NH протекает по следующей схеме

Вос-глицил-сефадекс . 1 . H S04/АсОН

2. 10Х-ный тризтиламин/

/диметилформамидглицил — сефадекс

Вос-лейцин, ДЦГК

Вос-лейцил-глицил-сефадекс

1 Навои/АсоН

lOX EgN/CHgC1g лейцил-глицил-сефадекс

Вос-пролин, ДЦГК

Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекс

1 нн /неон

Аиид и -Вос-пролил-лейцил-глицина.

d, П р. и м е р 1. Й -Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекс.

30

3.

Промывка этанолом, 3 раза

Промывка эфиром, 3 раза

15

S 8571

5 r Вос-глицил-сефадекса с емкостью 0,53 ммоль Вос-глицина на 1 r сефадекса помещают в реакционный сосуд, предназначенный для ручного синтеза, и проводят следующий цикл

one ций. нд N-Вос-пролил-лейцил-глицина.

% 6 г полученного и -Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекса прибавляют

60 мл охлаяденного насыщенного раст- 1р вора аммиака в метаноле, колбу плотно закрывают и оставляют при комнатной температуре в течение двух дней.

Затем полимер-носитель отфильтровывают, промывают его метанолом (3>. 1з 1О мл), и метанольный раствор упаривают в вакууме. Кристаллический остаток перекристаллизовывают из воды н получают целевой продукт в виде белого кристаллического вещества.

М Выход 0,99 r (97X- в пересчете на

-Вос-глицил-сефадекс). Тн 139140 С, Я ) — 72, 5 (С=2, метанол) .

Найдено, %! С 54,92; H 8,42: и 14,17.

Пример 2. Синтез и -Вос- щ

И.

-пролил-лейцил-глицил-сефадекса про. водят по аналогичному циклу операций, описанному в примере I, за

Обработка I н растворо серной кислоты в уксусной кислоте

Промывка ДИФА, 3 раза 20

5. Обработка 10 -ным ра- створом трнэтиламина в ДИФА 10

6. Промывка ДИФА, 3 раза 20

l7 4 исключением операций l и 13 где обработку проводят 30 мл 0,5 н раствора серной кислоты в уксусной кислоте; время реакции в операции

1 30 мин, а в операции 13 40 мин.

Амид и Вос-пролил-лейцил-глицина получают аналогично примеру l.

Выход 0,98 г (963 в пересчете на и Вос-глицил-сефадекс). Тпд 139140 С, $43 — 72 (С**2, метанол), Найдено, X: С 54,90; Н 8,46; и 14 24.

ЩР40 1/2 Н О

Вычислено, Х: С 54,87; Н 8,44; и 14,22, Пример 3. Синтез N -Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекса проводят по аналогичному циклу операций. описанному в примере 1, за исключением операций 9 и )4.

В операции 9 к реакционной . смеси прибавляют 1,84 r (3 ммоль) N+

-Boe-лейцина и 1,64 r (3 ммоль) ДЦГК.

В операции 14 к реакционной омеси прибавляют 1,71 r (3 ммоль) й"

-Вос-пролина, 1,64 г (3 ммоль) ДЦГК.

Аналогично примеру 1 получают амид

N -Вос-пролил-лейцил-глицина.

Выход 0 9! r (89X, считая íà N

-Вос-глицил-сефадекс) . Т нр, 137139 С, (с!. ) — 71,9 (C=2, метанол) .

Найдено, : С 54,72; Н 8,48;

N 14,12.

857117

Продолжение табл. ъ 4

7. Промывка этанолом, 3 раза

8. Промывка эфиром, 3 раза

9. Прибавление 1,84 r

{3 ммоль) Вос-лейцина 0,82 г (1,5 ммоль) ДЦГК в смеси ДИФА и дихлорметана 1:1

20

10. Промывка ДИФА, 5 раз

11. Промывка этанолом, 3 раза

12. Промывка эфиром, 3 раза

13. Обработка I н раствором серной кислоты в уксусной кислоте

20!

4. Повторение операций 2-8

20

16. Повторение операций

10-12 . Приведены ммоль в расчете на I ммоль аминокислоты на нолимере.

Формула изобретения

15. Прибавление 1,7) r .(3 ммоль) и 1Вос-пpоМ лина, 0,82 г (1,5 ммоль)

М

ДЦГК в смеси ДИФА и дихлорметана (Ii:I), I

Способ получения амида Й -трет-бутоксикарбонил-пролил-лейцнл-глицина путем ступенчатого наращивания аминокислот с С-конца твердофазным методом на аминоацилполимере„ исходя из и трет-буюоксикарбоннл-глицил-полимера, с использованием в качестве конденсирующего агента ди-циклогексилкарбодиимида, с отщеплением на каждой стадии И -Вос-защитной группы кислотным реагентом, с последующим отщеплением конечного

45 пептида от полимерного носителя с одновременным аммонолизом и выделением .целевого продукта, о т л нч а ю шийся тем, что, с целью

Ю повыщения выхода упрощения техноло1 гнческого процесса и обеспечения защиты окружающей среды, в качестве аминоацилполимера используют Й -Вос-глицил-се@адекс, отщепление

Вос-защиты проводят 0,5-1 н раствором ерной кислоты в уксусной кислоте, а конденсацию И© Вес-аминокислоты с амнноацил-се4}адексом осуществляют при молярных соотнощениях Н "ВосСос тав июль Г. Желтухина

Редактор Н.Лазаренко Техред М,Рейвес

Корректор Г.Назарова

Заказ 134 36 Тираж 443

ВНИИПИ Государственного коми вета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35,, Раушская наб., д. 4/5

Подписное филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Провктиая, 9 8571

-амйнокислрты, дициклогексилкарбодиимида и аминоацил-сефадекса 3:1, 5:1.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Микста С.Я., Крустиня Дэ.П.

Яунземе А. В. и Папсуевнч О.П. Усовершенствованный синтез С-концевого фрагмента окситоцина. — "Известия АН Лат"

17 10 вийской ССР, Серия "Химия", 1975, Ф 5, с. 618-621.

2. Hizoguchi Т. 5Ь1дечапе К., Takamura М. Solid - phase synthesis

employing haloacyl - polystyrene

as a polymer support. - СЬев. Pharm..

8uI)., 1970, ч. 18, Ф 7, рр. 14651474 (прототип).