Способ получения модифицированного макропористого кремнезема

Способ получения модифицированного макропористого кремнезема

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

А. В. Брыкалов, В. Н. Постнов, С. И. Кольцов, Авторы (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОДИФИЦИРОВАННОГО

МАКРОПОРИСТОГО .КРЕМНЕЗЕМА

Изобретение относится к технологии обработки кремнезема, в частности к способу получения макропористого кремнезема, используемого в качестве носителя

llama афинной хроматографии гемина.

Известен способ получения модифицированного макропористого кремнезема обработкой его основания азотсодержащим органическим соединением — производными биурета (1 J.

Недостатком известного способа является невозможность получения носителя для афинной хроматографии гемина ввиду низкой разделительной способности.

Цель изобретения - получение носителя для афинной хроматографии гемина с повышенной разделительной способностью. !

Цель достигается тем, что в качестве азогсодержащего соединения используют глутаровый альдегид и ароматический диамин, процесс ведут в водной среде при рН 1,0-2,0 с послеюующим диазогировакием и азосочеганием -с азосоставляющей формулы

В качестве ароматического диамина

acIIonbsyl0r например@, м-фенинендиамин, И «фенинендиамин, бензидин. Полученный после первой стадии продукт, содержащий

0,5-0,7 мг-екв/г ароматических амина групп, диазогируюг с помощью интрига натрия ans последуюинн о аэосочеганиа с сенективным, лих аидом (Й,4 гистидин}.

Пример 1. В колбе емкостью

250 мл суспендируют 6 г макропарисгого кремнезема с 50 мл хлороформа, затем вводят О,P г м-фенииендиамина, пооле чего смесь перемнаиваюг при комнатной температуре 30 мин. Жидкую фазу отделяют декантацией, твердую cymar npu

50 С в течение 1 ч, после чего ее при пере меш иван ни обрабатывают смесьюиз

Фракции по 5 мл эпюируют из колонки

ЗО мп фосфатного буфера рН 7,0. Все операции проводят при 4 С. Выход очищенного ог гемопигментов гамма-глобулина составляет 60-80 мг. Гемогенность полученного препарата подтверждена эпектрофорезом в попиакриламидном геле.

Регенерация отработанного носителя осуществляется следующим образом: использованный носитель промывают раствором 0,01н йаОН и для последующего использования промывают фосфатным буфером (рн 7,0).

Носитель, полученный в соответствии с предлагаемым способом, обладает высокой механической прочностью, отличается отсутствием набухания в органических растворителях, не подвержен микробиологической атаке, устойчив к условиям стерилизации, отличается достаточной емкостью и многократностью его использования.

Формула изобретения

Способ получения модифицированного макропористого кремнезема обработкой его основания аэотсодержащим органическим соединением, о т и и ч а юшийся тем, что, с целью получения носителя дпя афинной хроматографии гемина с повышенной разделител.,ной способностью, в качестве азотсодержащего органического соединения используют глутаровый альаегид и ароматическими диамин, процесс ведут в водной среде при рН 1,0-2,0 с последующим диазогированием и азосочетанием с азосоставляющей формулы

НЮ

". СН -СИ-СООН

М

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

% 607836, кл. С 08 К 9/04, 1978 (прототип) . з 8571, 5 r гпутарового альдегида, 3 мп НС и

30 мл дистиллированной воды и инкубируюг нри 20-25 С в течение 20-30 мин с, о целью поликонденсации. Жидкую фазу вновь отделяют декангацией, полученный продукт последовательно отмывают 200 мл ацетона и 300 мп дистиллированной воды.

l1aaee 1 r полученного продукта суспендируют в 30 мл НС8, охлаждают до

ОоС, добавляют 0,3 г йаМОд и диазоти- {О руют в течение 10-15 мин.

Полученный продукт отмывают охлажденной водой, фосфатным буфером (рН

7,0), эатеЪ добавляют 200 мг I-гистидина, растворенного в том же буфере, и {s ведут азосочетание в течение 1 ч, после чего носитель промывают фосфатным буфером (рН 7,0). В результате количество ковапентно связанного 1.-гистидина с макропористым кремнеземом составляет

30-58 мг. на 1 г носителя.

Пример 2. Получение носителя осуществляют так же, как и в примере 1, только вместо м-фенипендиамина использу-. ют И -фенипендиамин.

11 р и м е р 3. 0,2 г бензидина раст.воряют в 5 мл концентрированной НСЕ, добавляют ЗО мл воды. Полученный раствор при пвремешивании приливают к суспензии, состоящей из 3 г макропористого 30 кремнезема и 4 r 25%-ного глутарового альдегида, и проводят реакцию попиконденсации в течение ЗО мин .при комнатной температуре. Жидкую фазу отделяют, а продукт последовательно отмывают 200 мл ацетона, 300 мл дистиллированной воды.

Qaaee носитель получают так же, как в примере 1.

Пример 4. Использование модифицированного кремнезема в качестве носителя дпя афинной хроматографии при очи40 стке плацентарного гамма-глобулина челочека от гемопигментов.

В хроматографическую колонку 1,5х х30 см помещают 2 r нHоeсc{и{т еeл я, полученного по периметру 1 3, и уравнивают фос45 фатным буфером (pH 7,0), наносят 1 мл

10%-ного плацентарного гамма- глобулина, содержащего 6-12 мг гемопигментов.

Составитель А. Молин

Редактор Н. Лазаренко ТехредА, Ач Корректор М. Йемчик

Подписное

Заказ 7139/38 Тираж 530

ВНИИПИ Государсгвенн{й о комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Ра ская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, уп. Проектная, 4