Способ количественного определения 3-цимарозид,к- строфантина-

Способ количественного определения 3-цимарозид,к- строфантина-

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДИИЛЬСТВУ

Сеюз Сеевтсиик

Социалистических

Реслублкк (61) Дополнительное к авт. саид-ау (22) Заявлено 271179 (21) 2843677/23-04 Ф)

G 01 И 31/08 с присоединением заявки Йо (23) Приоритет

Госудкрствеииый комитет

СССР во делам изобретеиий и открыти1

Опублнковано 230881. Бюллетень Н931

Дата опубликования опнсання 230881 (53) УДК 543.544 (088.8) .(72) Авторы изобретения

В.Я.Давыдов, A.Â.Êècåëeâ, Д.И.Попо

Московский ордена Ленина и ордена (71)заявители государственный УнивеРситет им. М. научно-исследовательский инс амени ный мации (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ З-ЦИМЛРОЗИД, К-СТРОФй,НТИДИНЛ-Р

Изобретение относится к аналити ческой химии, а именно к способам . количественного определения З-цимаро-. зид, К-строфантидина- р {цимарина).

Йзвестен способ количественного определения цимарина, основанный на обработке анализируемой пробы пикриновой кислотой в щелочной, среде с последукщим фотометрированием полученного раствора(1) .

Недостаток этого способа низкая точность определения.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ ко- 15 личественного определения цимарина, заключающийся в обработке анализируемой пробы раствором диннтробензойной кислоты в присутствии едкого натра с последующим фотометрированием 20 полученного Ърн этом раствора 2 .

Недостатком известного способа является низкая точность определения, поскольку определение является суммар 25 ным так как все гликознды с пятичлент ным лактонным кольцом дают аналогичные окрашнвания с динитробензойной кислотой, что приводит к недостоверным результатам анализа. 30

Цель изобретения - повьваение точности определения.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу количественного определения 3-цюиарозид, К-строфаитидииа-g, заключающемся в обработке анализируемой пробы ароматическим соединением, содержащим нитрогруппу, в качестве последнего используют нитробензол и обработку ведут при весовом соотношении

3-цимарозид, К-строфантидина-Q sнитробензол 0,25-1 4-1 в среде водного раствора этилового спир."а с последующим хроматографированием полученной при этом смеси.

Смешивают равные объемы исследуемого раствора, содержащего цимарин, и раствора с известной концентрацией нитробензола (играющего роль внутреннего стандарта) в водно-спиртовой смеси (308 этанола + 708 воды, проценты объемные). Смесь тщательно перемешивают. Затем проводят хроматографический анализ этой смеси, содержащей цимарин н нитробензол. Пробу вводят в колонну жидкостного хроматографа, наполненную адсорбентом, с поверхностнымн гндрофобными функ-» циональньики группами. для детектиро857859 вания используется ультрафиолетовый детектор с переменной длиной волны, настроенной на волну в области

210-225 нм. Для хроматографического определения цимарина используются водно-этанольный элюент. Температура хроматографической колонны поддерживается постоянной в интервале от 20 до 700С. Из полученных хроматограмм определяется площадь пиков цимарина и нитробензола.

Процентное содержание цимарина

Сц (%) определяется r(o формуле

15 где 5„ /S g - отношение площадей пиков цимарина и нитробензола на хроматограмме, С„6(%) — процентное содержание нитробензола в исход- Щ ном растворе, К=1,08+-0,04 — константаь, которая находится из калибровочного графика.

Отношение площадей пикон нв зависит от величины введенной пробы, скорости потока злюента и температуры колонны. Необходимо только, чтобы эти полосы не перекрывались.

Лучшие результаты получают при использовании элюента, содержащего

15-45% объемных процентов этилового спирта в воде, колонны из нержавеющей стали длиной 10-25 см и внутренним диаметром 3-5 мм, наполненной суспензионным способом силикагелем с размером частиц около 5-10 мкм (к поверхности которого привиты углеводородные радикалы С -С„ ) ; ультрафиолетового детектора с переменной длиной волны, работающего при длине волны 210-225нм.40 .Выбранная в интервале от 20 до 70 С температура колонны поддерживается с точностью -0 10С.

Предлагаемый способ позволяет проводить определение пимарина в 45 растворе в интервале концентраций

0,001-0,08% с пределом определе ния 0,0001%. Для определения калибровочной константы К берут 5 точных навесок порошка цимарина-стандарта (ФС 42-633-72) от 0,003 до 0,02 г в мерныЕ колбы емкостью 25 мл. Взвешивание проводят на аналитических весах "Метлер" с использованием

6 значащих цифр. Затем в колбы заливают водно-спиртовую смесь (30% этанола + 70% воды). После полного растворения цимарина объем раствора доводят до метки той же смесью и раствор тщательно перемешивают.

Внутренний стандарт готовят точным @) взвешиванием и мерной колбе емкостью

25 мл 0,0100 r нитробензола. Затем растворяют нитробензол в такой же водно-спиртовой смеси (30% этанола

+ 70% воды) ° После полного растворенйя объем раствора доводят той же смесью до метки и тщательно перемешивают. Затем смешивают в маленьком бюксе с притертой пробкой 1 мл каждого раствора, содержащего цимарин, .с 1 мл раствора внутреннего стайдарта - нитробензола. После этого проводят хроматографический анализ каждого раствора цимарина, содержащего внутренний стандарт.

Строят график, откладывая S /5„6 ч против величин С„(% ) /С 6 (% ) ° где Sи/5нб - отношение площадей пиков цимарина и нитробензола на хроматограмме, Сц(%)/C„S (%) — отношение процентного содержания цимарина и нитробензола в исходных растворах. Их этого графика определяют коэффициент К.

Для разных серий растворов цимарина и нитробензола величина К=1,08+0,04.

Константа К не зависит от содержания цимарина и нитробензола в анализируемой смеси.

Предлагаемый хроматографический способ определения концентрации цимарина в растворах может быть использован для определения биологической активности препаратов и растворов, содержащих цимарин.

Биологическая активность растворов цимарина в единицах ЛЕД/см может быть определена по формуле

1 ЛЕД/с(и= (2) .х где S /S„S — отношение площадей и пиков цимарина и нитробензола на хроматограмме, С„ (%) — концентрация исходного раствора нитробензоластандарта, К - калибровочная константа, равная 1,08 0,04, коэффициент, связыванхций прсщентную концентрацию цимарина в растворе с биологической активностью, выраженной в единицах ЛЕД/см, равной 436 + .21 ЛЕД/cM %.

Пример 1. Определяют количество цимарина в растворе для инъекций.

1 мл раствора цимарина для инъекций смешивают с 1 мл раствора нитробензола (0,0383%). Проводят хроматографический анализ. Для анализа используют жидкостный храматограф фирмы

Спектра-Физикс 3500В(СШй) с детектором UV-VIS 770 при длине волны 217 нм, хроматографическую колонну, наполнен ную адсорбентом liChrosorb RP-8 с размером частиц около 7 мкм, дозироночный кран с петлей объемом 70 мкл. Температура колонны 50 С. Скорость потока злюента, состоящего из 30% этанола и 70% ноды, составляет 0,5 мл/мин.

Площади пиков цимарина и нитробензола на хроматограмме определяют с по857859

ПРиготовлено а /щ„

Определено методом жидкостной хроматограФии С,Ъ

0,25

О, 0134

0,0597

О, 0131

0,0614

1,6

О 0455 Ог 0433

3,6

Формула изобретения

Составитель Л.Соломенцева

Техред С. Мигунова Корректор С.Корниенко

Редактор О.Малец

Заказ 7233/73 Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 мощью интегратора Автолаб TY той же фирмы (США). В качестве внутреннего стандарта используют 0,038% раствор нитробензола в водно-этанольной смеси (303 этанола). Площади пиков цимарина S = 114382 мвс, а нитробензола S«= 115398 мвс.

114382 0,0383

С, (Ь)— — О, 035%

115398 1,08

115398 1,08

Пример 2. Определяют количество цимарина в растворе для инъекций. Условия анализа те же, что в примере 1. Плошади пиков цимарина

S = 98430 мвс, а нитробензола

S g = 115744 мвс

С (В) — 98430 0<0383 — 0,030

115744 1, 08

20 ъ 98430 О 0383 ь

1,ЛЕД/см =- — — — - ---- 436 = 13 ЛЕД/см

115744 1,08

Таким образом, предлагаемый способ определения цимарина в растворах дает воэможность определить только цимарин в растворе, в котором присутствуют еще и примеси других родственных веществ. Кроме того, этот способ экономичен.

В таблице приведено определение 30 процентной концентрации (С,Ъ)

3-цимарозид, К-строфантидина- p (цимарина) в растворе методом жидкостной хроматографии при различных отношениях массы цимарина, в„, к мас-35 се нитробенэола, п „6, в растворе по времени и затратам. з

Предлагаемый способ находит широкое применение как метод контроля стандартных образцов цимарина и препаратов, содержащих цимарин, их производстве и в процессе хранения.

Способ количественного определения З-цимарозид, К-строфантидина-fb путем обработки анализируемой пробы ароматическим соединением, содержащим нитрогруппу, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности определения, в качестве ароматическсго соединения, содержащего нитрогруппу, используют нитробенэол и обработку ведут при весовом соотношении З-цимарозид, К-строфантидина-p:íèòðoáåíçoë 0,25-1:4-1 в среде водного раствора этилового спирта с последукщим хроматографированием полученной при этом смеси.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Сивицкая О.К. Колориметрическое определение цимарина в жидком концентрате горицвета 1:2 на 25 спиро те. Сборник научных трудов ЦАНИИ.

М., 1963, т. 4, с. 123-129.

2. Фурсов A. Ф. Колориметрическое определение некоторых сердечных гликозидов. " Аптечное дело. 1961, 6 1l т. 10, Р 2, с ° 33-38 (прототип) .