Способ сохранения клеток и тканей растений

Способ сохранения клеток и тканей растений

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е ()865245 изовеитиния

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Респубпик (6! ) Дополните.вьное к авт. свнд-ву

{51}М. К,л.

А 01 И 3/00 (22) Заявлено 07. 02. 78 (21) 2590508/30-15 с присоединением заявки Pk— (23) Л рноритет

Ibiyaapesawek камктвт

СССР ао дааан взобретехнй к ютхрытнй

Опубликовано 23.09.81. бюллетень № 35

Дата опубликования описания 23.09,81

{53) УДК578.68 (088. 8) т е»

А. П. Попов, P. Г. Бутенко н И. Н. жукове . )

Ь

Ордена Трудового Красного Знамени и ститут физиологии

I растений им. К. А. Тимирязе (72) Авторы изобретения (7l ) Заявитель (54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ РАСТЕНИИ

Изобретение относится к криогенным

f, способам хранения живых клеток и ткаг ней, а именно к хранению растительных клеток и тканей, культивируемых на ис-. кусственных питательных средах и тех, . которые могут продуцировать ценные ве3 щества.

Известен способ сохранения культивируемых клеток и тканей растений путем периодических переносов их на свежую питательную среду Г1.1.

Этот способ является главным при хранении коллекций культур. Но длительное пассирование in vitro conpoaompается значительными изменениями на ген1S ном, хромосонном и клеточном уровнях, которые могут привести к потере ценных в практическом отношении или уникальных качеств культивируемых клеток. Кроме того, требуются большие затраты труда и средств для поддержания постоянно пополняющихся коллекций.

Известен также способ хранения клеток и тканей животных в условиях низких температур с применением сыворотА ки крови животных 1.23.

Однако при осуществлении известного способа применение сыворотки животных для хранения растительных-тканей и клеток до настоящего .времени не быпо исследовано.

Цель изобретения — повышение выживаемости и жизнеспособности клеток и тканей растений после замораживания и хранения при-температуре жидкого азота (-196ОС) .

Поставленная цель достигается тем, что искусственную питательную среду заменяют. полностью или частично перед добавлением крнопротектора сывороткой крови животных.

Для опытов была выбрана культура клеток моркови, так как она является типичным образцом подобных культур и состоит, по крайней мере, из трех субпопуляций: отдельных клеток, размеры которых изменяются в широких пределах, плотных агрегатов мелких клеток и рых5245

Отдельные клетки 100+10 106+28 139+13

Агрегаты клеток 100+23 248+60 210+28

253+19

420+91

Все культивируемые единицы

100+14 133+22 162+13 331+47

ЭФФективность высева (при учете 100 колоний 1 мм, %) 522

ВНИИПИ Заказ 7906/6 Тираж 703 Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 лых агрегатов крупных клеток. Величина агрегатов достигает 2-3 мм, т. е. это уже большие колонии, состоящие из множества клеток. Поэтому результаты, полученные на культуре клеток моркови, очевидно справедливы и для других растительных клеток и тканей.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Суспензионные культуры клеток моркови, выращенные на искусственной питательной среде, в которую включены только соли, витамины, фитогормоны и углеводы, концентрируют центрифугированием. Среду удаляют, а клетки ресуспендируют либо в свежей питательной среде, либо в той же среде, к которой добавлена сыворотка крови телят в количестве от 10 до 90Х в различных вариантах (по объему). Затем к суспензиям добавляют диметилсульфоксид до конечной его концентрации (5%), ампулируют и замораживают в сосудах

Дюара с сухим льдом и этанолом. Градиент замораживания 2 C/ìèí. Конечная о

Формула изобретения

Способ сохранения клеток и тканей растений, включающий культивирование . клеток и тканей в искусственной питательной среде, добавление криопротектора, последующее замораживание и хранение в жидком азоте, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выживаемости и жизнеспособности клеток растений после культиви" рования, перед добавлением криопротек4 температура -70 С. Потом ампулы переносят в жидкий азот. После хранения. (до 11 месяцев) ампулы оттаивают при

40 С, удаляют криопротектор.: Клетки переносят в обычную питательную среду и высевают в чашки Петри с агаризованной той же средой. Одновременно определяют жизнеспособность клеток с помощью феносафранина.

В таблице представленà зависимость жизнеспособности культур клеток от концентрации сыворотки крови теленка, 1

Из таблицы видно, что наилучший эффект наблюдается при полной замене среды на сыворотку крови теленка.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает более эффективное хране20 ние клеток и тканей растений при низких температурах. После оттаивания рост культуральных клеток, замороженных по предлагаемому способу, опережает рост клеток, замороженных по из-. вестному способу, на две недели.

45 тора питательную среду на 10-90Х заменяют сывороткой крови животных.

Источники информации, лринятые во внимание. при экспертизе

1. Бутенко Р, Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М., "Наука", 1964, с. 6.168.

2. Патент США Р 3852155, кл. 195-18, 1974 (прототип),