Способ снижения иммунологической активности лимфоцитов

Способ снижения иммунологической активности лимфоцитов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Л.П. Игнащева, А.Г. Федотенков, Л.А. и Л.С. Сеславина я (;.

Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Красного" Знамени научно- исследовательскийинститут гематологии и переливания крови (72) Авторы изобретения (71) Заявителй (54) СПОСОБ СНИЖЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

ЛИМФОЦИТО В

Изобретение относится к медицине, к проблеме трансплантации органов и тканей для лечения депрессий кроветворения.

Известеч способ снижения иммунологических свойств лимфоцитов путем ( обработки клеток кроветворной ткани

NH Cg с последующим введением сус;

4 пензии реципиенту 1).

Однако NH C 1 является токсичным

f0 веществом и применение его в клинической практике связано с известными трудностями.

Цель изобретения — упрощение и повышение эффективности способа за .. счет ослабления гомотрансплантационной активности лимфоцитов

Эта цель достигается тем, что способ снижения иммунологической активности лимфоцитов осуществляют путем обработки суспензии клеток кроветвор- ной ткани органическим веществом с последующим введением суспензии уащипиенту, суспензню клеток обрабатывают 14,9-15Х-ным раствором глицерина в течение 15-30 мин.

Способ осуществляют следующим образом, Гбтовят суспензию клеток селезенки, лимфоузлов, или костного мозга экспериментальных животных на консервирующем растворе, в состав которого входит сахароза, глюкоза, ЭДТУйа натрий лимоннокислый трехзамещеннйй, 10Х-ный раствор желатина.,К полу-. ченной суспензии клеток добавляют глицерин в 14,9-15Х-ной концентра- ции, Взвесь клеток с глицерином хранится в .холодильнике при 4-9 в течение )5-30 мин.

Для доказательства снижения-иммунологической активности лимфоцитов под действием 14,9-)5X-ного глицерина использованы методы "Ъ vivo" учета отмены эндогенного колониеобразования (пример 1), учета инакти вации несингенйых стволовых клеток (пример 2 и 3).

874063 4

Н р и м е р 1 . Иьппей-гибридов (СНА х C57B16)F облучают на аппарабо те ЭГО-2 11 -лучами Со в дозе 600 р.

С целью отмены эндогенного колоние образования через 20 ч .после облучения мьппам вводят суспензию клеток лимфатических узлов мьппей СВА .в разной концентрации. Первой группе вводят взвесь клеток без глицерина вто1 рой группе — взвесь клеток с 14,9

15Х-ным глицерином (при экспозиции

15 мин) третьей группе — взвесь

1 ет клеток с 14,9=15/-ным глицерином (при экспозиции 30 мин); четвертая группа служит контролем облучения.

На 9 день после трансплантации клеток у реципиентов извлекают селезенки, фиксируют их в растворе Буэна и 10Х-нам растворе формалина. Подсчитывают число макроскопически видимых колоний в каждой селезенке. Вычисляют индекс инактивации.

Установлено, что введение клеток

Лимфатических узлсз (без глицерии ) в дозе 1,0х10 ; 2,0х10 ; и 4,0х10 б. 6. приводит к 53,5; 82,2; и 93,1 инактивации эндогенных колониеобразующих единиц соответственно. После экспозиции клеток лимфатических узлов с глицерином в течение 15-30 мин наблюдается значительное снижение или полное отсутствие инактивирующего эффекта лимфоцитов доноров на стволовые клетки реципиента (табл.l).. . В табл.1 приведены изменения ин-.. активации эндогенных КОЕ под влиянием 15 -ного глицерина при трансплантации интактных клеток лимфатических узлов мьппей линии СВА сублетально облученным (600 р ) реципиентам (СВА х C57B16)F„.

При трансплантации реципиентам клеточной суспенэии интактных лимфоцитов производят пересчет на количество "живых" (морфологически сохранных) клеток.

П р .и м е р 2. Свежезаготовленные клетки костного мозга мьппей

С57В16 в дозе 5,0х10 добавляют к клеткам селезенки мышей линии СВА в разной концентрации. Причем взвесь клеток селезенки мьппей СВА готовят в трех видах суспензии: свежезаготовленные клетки, свежезаготовленные клетки с 14„9-15Х-ным глицерином (при экспозиции 15 мин и свежезаго-i товленные клетки с 14,9-15Х-ным глицерином при экспозиции 30 мин)..

Смешанную .суспензию клеток вводят внутривенно мышам-гибридам (СВА-х х С57В16)Р,1 через 20 ч после облучения. Мышей-реципиентов облучают на аппарате ЭГО-2 "-лучами Со в летабо тельной дозе 880 р (опыты с экзогенными колониями) .

Установлено, что свежезаготовленные клетки селезенки мышей СВА в до10 эе 4,0 х 10 инактивируют стволовые клетки мьппей С57В16. Индекс инактивации при этом равен 51,37. Добавление к клеткам селезенки глицерина (при экспозиции 15 мин) приводит к снижению индекса инактивации несингенных стволовых клеток до 35,8 (при той же дозе клеток селезенки мышей СВА — 4,0 х 10 ).. Увеличение времени эквилибрации клеток селезен20 ки с глицерином,до 30 мин приводит к отмене инактивирующего эффекта стволовых клеток мьппей линии С57В16 лимфоцитами селезенки мышей линии

CBJ . (табл.2). р В табл.2 приведена инактивация несингенных КОЕ при трансплантации смеси клеток интактного костного мозга мышей С57В16 с интактными (без глицерИна и с 15Х-ным глицерином ) клетками селезенки мышей СВА летально (880 р) облученным реципиентам (СВА х С57В16) Е,1 .

Пример 3. Свежезаготовленные клетки костного мозга мышей

С57В16 в дозе 5,0х10 добавляют

35 к клеткам костного мозга мышей линии

СВА в разной концентрации.

Условия приготовления суспензий облучения, трансплантации клеток

40 и исследования селезенок одинаковы с примером 2. Установлено, что при взаимодействии клеток костного мозга мьппей разных линий (СВА и C57B16) инактивации подвергаются стволовые клетки мышей С57В16. При дозе свежих

45 клеток костного мозга мышей СВА равнои 0,5х10 индекс инактивации с составляет 25,0Х, а при дозе 4,0х10—

57,0Х. Добавление глицерина к костному мозгу иьппей СВА (при экспозиции 15-30 мин) приводит к значительному снижению или отмене эффекта инактивации стволовых клеток мьппей

С57В16 лимфоцитами костного мозга мышей СВА (табл.3 ).

В табл.3 приведена инактивация несингенных KOE при трансплантации, смеси интактного костного мозга мьппей С57В16 с интактными (без гли874063

5 церина и с 15%-ным глицерином) клетками костного мозга мышей СВА летально облученным реципиентам (CBA х 05/В16),1.

Предложенный способ позволяет значительно снизить гомотрансплантационную активность лимфоцнтов кроветворных тканей.

Т а б л и ц а ) Количе

Количество использован ных мышей

Индекс инактивации

КОЕ, Х

26 26,8

23 О

l4,9

11 9

26

53 5

82,2.

О

ll 8

93,1

36

Таблица 2.05х10 .4,0 х 10

Свел не клетки селезенки мышей СВА

51,3

8:1

Свежие с. 15Х-ным глицерином клетки селезенки мышей

СВА (экспозиция 15 мин) 0 ° 5 g ТО

4,0 х 106

И,6

35,8

1:1

8:1

Свежие с 15Х-ным глицерином клетки селезенки мышей

СВА (экспозиция 30 мин ) 0,5 х 10 4,0 х 10

1:1

8:1 введен клеток лимфоу ььппей

0,5 х

1,0 х

2,0 х

4,0 х

10 27

10 24

10 26

10 34

Трансплантация интактных клеток лимфоузлов с глицерином (экспозиция 15 мин

Трансплантация интахтных клеток лимфоузлов с глицерином (экспозиция

30 мин) 19 0

2l 0

874063

Таблица 3

Свежие клетки костного мозга мышей СВА 0,5 х 10

4,0х 10

25,0

8:!

57,0

0,5 х 10

4,0 х 10

1:1

8:1

2,1

0,5 х 10

4,0 х 10

1:1

8:I.

ll 1

30 мин) Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор В. Иванова Техред M. Рейвес . Корректор1Н. Швьщкая

Заказ 9112 9 Тираж 690 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород-, ул. Проектная, 4

Свежие клетки костного мозга мышей

СВА с ISX-. ным глицерином (экспозиция )5 мин) Свежие клетки костного мозга .мышей

СВА с 15Х-ным глицерином (экспозиция

Способ снижения иммунологической активности лимфоцитов путем обработки суспензии клеток кроветворной ткани органическим веществом с последующим введением суспензии реципи" енту, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повйшения эффективности способа sa счет ослабления гомотрансплантационнай актив ности лимфоцитов, суспензию клеток обрабатывают l4 9-15Х-ным раствором глицерина в течение 15-30 мин.

Источники информации, 30 принятые во внимание при экспертизе

I. О.M. Strong at all.Differential susceptib.ilIty. of Murine Т-and

В- уеphocytes to Freiz"Thaw and

Hypotonic Shook, С riobiology, 1974, у.l, 12, р.127-138,