Питательная среда для культивирования и хранения пневмококков

Питательная среда для культивирования и хранения пневмококков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е 1»1 878790

ИЗОБРЕТЕ Н И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Со1оз Советских

Социалистических

Реслублик (61) Дополнительное к авт. свил-1зу— (22) Заявлено 07.12.79 (21) 2851888/28-13 с нр11сослииснисм заявки Л: —— (23) !1риоритст— (51) М. К.1.

С 12 N 1/29

//С 12 М 1/20;

С 12 R 1/265

Госуда рственнык комитет

IIo делам изобретений и открытий (43) Опуоликовано 07.11.81. !)юл.1стснь М 41 (53) УДК 576.8.093.1 (088.8) (45) 3,ата опубликования описания 07.11.81 (72) Автopbl изобретения О. В. Бухарин, Б. Я, Усвяцов, Л. И. Прянишникова

1 (71) Заявитель Оренбургский государственный медицинский институт 1 . (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ

КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ

П Н ЕВМОКОККОВ

Изобретение относится к медицинской микробиологии.

Извсстна питательная среда лля культивирования и хранения пневмококков, соле«»кащая бульон Мартена, агар, нормаль11ую лошадиную сыворотку и вазединовое масло (1).

Однако такая питательная среда не позволяет,:1литсльно хранить пнсвмококки без потерь вирулентности.

Целью изобретения являстся удлинение срока хранения пнсвмококков без потери вирулентности.

Эта цель достигается тем, что питательная среда лля культивирования и хранения пневмококков, солс ржащая бульон

Мартена, агар, нормальную лошадиную сыворотку и вазелиновос масло, лополнительIIo она содержит 1 ° 10 — - 10 9 /оный водный раствор 1-метил-6, 7-лнмстоксибен.-, имилазола гилрохлорнла при следующем

СООТНОШЕНИИ КОМ ПОНЕ«тОВ, ВЕС. Io:

Агар 0,2 — 0,3

Норм алы1ая ло1палиная сыворотка 4,0 — 6,0

Вазслиновос масло :3,0 — 5,0

1° . 10- — 1. 10 9 /о-ный

«олпый раствор 1-метил-6, 7-лиметоксибсизимидазола гилрохлорида 8,0 — 10,0

Бульон Мартена Остальное !

1итатсльнг1о сре;р готовят ел с, lyloIIIII ii образом.

Первоначально готовят бульс111 Мартена смешением псптона Мартена с равным объемом мясного настоя, устанавливают рН 7,8, лобавля1от 0,5 всс. ч. хлорllcTol натрия, кипятят 10 мин. снижают рН ло

7,6 — 7.5 и фильтруют. К 100 вес. ч. бульо10 1:à Мартсна добавляют 0,2 — 0,3 «сс. ч. ага:, а, вылсржи«а1от в автоклазе 30 ми11 при

120 С и добавляют 4 — 6 вес. ч, нормали нои лошалнной сыворотки, .1ля снижения ро,1II бактерицидных факторов нормальную

15 лошалиную сыворотку можно инактивировать при 58 С в тсченис 30 мин. К полу чснной смеси;1обавляют 8 — 10 вес. ч. водного раствора 1-мстил-6,7-диметоксибензи милазола гилрохлорида ко"центрации

20 1 10 " — 1 ° 10 г/мл. Раствор 1-мстил-6, 7- и1мстоксибснзимилазола гилрохлорила готовят на листиллированной воде или на физиологическом растворс.

В получс11ну10 питательную среду засе25 «ают суточную б1 л «он ную культуру гп1свмококков илн культуру, вылслснную нспосрелственно от больного ннсв...оннсй. Сверху питатсльну1о среду заливают 3 — 5 всс. г. вазелинового масла, кото30 рос прслотвраща T высыхание питатс,п

878790

Процент погибших мышей

До хранения (через

24 ч после поссва) Срок хранения при 4 С, иод.

Количество, кг

Компонент среды

Бульон а!артена

Агар

Г:покоза

Нормальная лошадиная сыворотка

Вазслииовос масло!

0,3

0,02

5 Q

5,0

0,2

Бульон Мартена

Агар

Нормальная лошадиная сыворотка, инактивированная

Вазслпновое масло

Водный раствор 1-ме; тил-6,7-диметоксибензимидазола гидрохлорида концентрации 1.10 — г/мл

6,0

3,0

84,6

81,5

77,1

8,0

Бульон Мартена

Агар

Нормальная лошадиная сыворотка

Вазелиновое масло

Водный раствор 1-метил-6,7-диметоксибензимидазола гидрохлорида концентрации

1 10 —" г/мл

0,3

4,0

5,0

79,8

40,5

77,1

73,7

74,3

10,0

Бульон Мартена

Агар

Нормальная лошадиная сыворотка. инактивировшшая

Вазелиновое масло

Водный раствор 1-метил-6,7-дпмстоксибепзимпдазола гпдрохлорида концентрации

1. !Q-l0 г/мл!

0,2

73 3 41.6

75,9

81,6

5.0

4.0

3 пой среды нрн хранении. После суточной инкубации в термостате при 37 С посевы хранят прн 4 С.

Через определенные сроки хранения опрсдсля!от вирулентпость пневмококков. .1ля этого проводят внутрибрюшиннос заражение белых мышей весом 18 — 20 г. OLIcHку вирулентности ппевмококков проводят по количеству погибших в течение 10 дней аблю !с!и!я мышей, отнесенному и общему копичсству зараженных мышей, выражспHÎMу l3 II!)0ÖClIТах.

П р и м с р ы. Приготовля!от известную питатс.l»Halo среду, три предложенные питатсльныс среды и две питательные среды, одна из которых содержит водный раствор

1-метил-б, 7-дигиетоксибензимндазола гидролорида концентрации больше 10-з г/мл в количестве больше 10 вес. ч., а другая— водный раствор 1-метил-б, 7-диметоксибснзимидазола гидрохлорида концентрации

Питатслыьзя среда для культивирования и хранения пиевмококков

4 меньше 1 ° 10 !! г/хь! н количестве мс!!ьшс

8 вес. ч.

Культуру пневмококков засевают в питательную среду. Сверху посев заливают слоем вазелинового масла. После суточной инкубации при 37 С в термостате посевы хранят при 4 С. Через 24 ч после посева (т. е. до хранения), а также через 2, 4, 5, р 6, 7 недель хранения проводят внутрибрю шинное заражение белы,; мышей весом

18 — 20 г с цель)о оценки вирулеHTHocTH ппевмококков в завис, мости от сроков хранения. Подсчитывают количество мышей, !!5 погибши.; в течение 10 дней наблюдения.

Находят отношение количества погибших в течение 10 дней после заражения мышей к общему количеству зараженных мышей, выраженному в процентах. Составы пита,"р тельных сред и результаты опытов приведены в таблице.

878790

Бульон Мартена

Агар

Нормальная лошадиная сыворотка, инактивированная

Baseлиновое масло

Водный раствор 1-метил-6,7-диметоксибенаимидазола гидрохлорида концентрации

10 †г/мл

0,3

5,0

4.0

50.5

50,8

25,!

7,0

0.3

Бульон Мартена

Агар

Нормальная лошадиная сыворотка, инактивированная

Baseлиновое масло

Водный раствор 1-метил-6,7-диметоксибенаимидазола гидрохлорида концентрации

lP -8 г/мл

5,0

4,0

1 5,3

46,3

12.1

55

4,0-6,0

3,0 — 5,0 сыворотка

Вазелиновое масло

8,0 — 10,0

Остальное

Из таблицы видно, что вирулентность пневмококков при хранении на известной среде сохраняется в течение менее двух недель (опыт 1). При хранении на пита чельной среде с водным раствором 1-метил-6,7-диметоксибензимидазола гидрохлорида концентрации 1 ° 10 — 1 10 " г/мл, взятым в количестве 8; 9 и 10 г, вирулентность сохраняется 6 недель. Пневмококки, хранившиеся 7 недель, гибели мышей не вызывают (опыты 2 — 4), При хранении пневмококков на питательной среде с добавлением водного ра створа 1-метил-6,7-диметоксибензимидазо ла гидрохлорида концентрации меньше

1. 10 —" г/мл в количестве меньше 8 г ви рулентность пневмококков снижается после двух недель хранения до величин, не приемлемых для применения пневмококков в исследованиях (oiiin 5). При хранении пневмококков на питательной среде с добавлением водного раствора 1-мстил-б,7-диметоксибензимидазола гидрохлорида кон центрации больше 1 ° 10 9 г/мл в количестве больше 10 вес. ч. вирулентность пневмококков ко второй неделе хранения в значи тельной степени подавляется (опыт 6).

Пневмококки с такой вирулеитностью lip применимы для исследований.

Применение предложенной питательной среды для культивирования и хранения пневмококков дает возможность увеличить срок сохранения вирулентности лневмококков до 6 недель, в то время как на известной питательной среде, пневмококки сохраняют вирулентность не более двух недель, т. е. срок сохранения вирулентност11 увеличивается в 3 раза.

Длительное сохранение вирулентности

25 пневмококков имеет большое значение при микробиологических исследованиях для диагностических и лечебно-профилактических целей, например, для получения диагностических препаратов, для определения

30 типов пневмококков по антигенным свойствам, для определения тяжести заболева ния через определение степени вирулентности посредством исследования процента капсулообразования, фагоцитабильности, 35 токсинообразования, для определения чувствительности пневмококков к антибиоти. кам, для получения вакцинных штаммов.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования и хранения пневмококков, содержащая бульон Мартена, агар, нормальную лошадиную сыворотку и вазелиновое мас

45 ло, отличающаяся тем, что, с целью удлинения срока хранения пчевмококков без потери вирулентности, она дополнительно содержит 1 ° 10 7 — 1 10 9%-ный водный раствор 1-метил-б,7-диметоксибен50 зимидазо la гидрохлорпда при следующем соотношении компонентов, вес. %:

Агар 0.2-0,3

Нормальная лошадиная

1 - 10 — 1 ° 10 "%-ный водный раствор 1-мстил-6, 7-диметоксибензимидазола гидрохлорида

Бульон Мартена

Сост«ll3111ñ.ï, С. Малютина

1осдактор 3. Боролкина 1 ехрсд И. Пенчко 1(оррскторвк H. Федорова и О, Гусева

Изд. М 572 Тираж 530

ВНИИПИ Государе венного i.î .tèòñòà CCCР ио додави изобре-.сияй и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская;ниа.,;.. -1/5

Подписное

Заказ 7396

Загорская типография Уириолиграфиздата .11осоолисволкона

Источники инфоомации, принятые во внимание при экспертизе

1. Л. Б, Балаян. Образование сульфидно-устойчивык штаммов пневмококков.—

«Журнал микробиологии, эпидемиологии

h иммунобиологии», № 3. 19477, с. 71 — 75.