Способ приготовления давленых препаратов хромосом хлопчатника

Способ приготовления давленых препаратов хромосом хлопчатника

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социвлистичесиик

Республик (ii) 880364 (6I ) Дополнительное к авт. свид-ву (5! )М. Кл. (22)Заявлено 3! .01.80 (21) 2876977/30-15

1 с присоединением заявки !Е

А Ol Н I/04 (еаударетакавый камктет (23) Приоритет (53) УДК 631. .52(088.8) вв делам кзебретений к вткрыткй

Опубликовано 15.11 81. Бюллетень М 42

Дата опубликования описания 18.11.81 (72) Авторы изобретения

IO.M. Агаев и Т.К. Агаева

Институт генетики и селекции АН Азербайджайской CCP (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДАВЛЕНЫХ ПРЕПАРАТОВ

ХРОМОСОМ ХЛОПЧАТНИКА

Изобретение относится к цитологии и селекции растений и может быть использовано в сельском хозяйстве.

Известны способы приготовления давленых препаратов хромосом растений: ацето-карминовый, ацетолакмоидный, ацето-арсеиновый, ацето-железогеиатоксииииааый (I).

Однако эти способы на хлопчатнике дают неудовлетворительные результаты.

Известен также способ приготовления давленых препаратов для изучения метафазных хромосом хлопчатника, при котором хлопчатник намачивают,в касторовом масле 24 ч, затем тщательно промывают и помещают в термостат для

15 проращивания. У проростков корешки фиксируют в смеси Левитскс!го (1:)), промывают в проточной воде, обеэвоживают спиртом, мацерируют в 207-ном .растворе едкого натра, выдерживают

26 о в ацето-железо-гематокислине при 40 С более 3 ч, подогревают вместе с красителем на спиртовке 3-4 мин, затем удаляют корневой чехлик и получают 2-3 среза кончика корешка, которые укладывают на предметное стекло в каплю . просветляющей смеси, накрывают покровным стеклом, после чего клетки раза гоняют легким нажимом ногтя в один слой и покровное стекло заклеивают густым канадским бальзамом. Просветляющую среду (смесь) готовят иэ l/3 глицерина и 2/3 концентрированного водного раствора хлоралгидрата (2).

Однако этот способ обладает рядом недостатков. Намачивание семян в кас-. торовом масле отрицательно сказывается на их прорастании; материал (ко решки), как правило, давится неудов летворительно, в результате чего клетки под покровнъм стеклом распластываются неравномерно, отчасти paspymaются, налегают друг на друга, хромосомы окрашиваются монотонно в темнофиолетовый, почти черный цвет, беэ четкого. выявления морфологическнх признаков и распологаются в метафаэ880364 ных пластинках скученно, не в одной плоскости; во многих слу ыях препараты оказываются в значительной степени загрязненными капельками жира и .жироподобных веществ. Приготовление более или менее удачного препарата по этому способу носит весьма случайный характер.

Целью изобретения является улучшения качества препаратов.

Поставленная цель достигается тем, что. в способ приготовления давленных препаратов хромосом хлопчатника, включающий фиксацию корешков по Левитскому, обработку раствором едкого натра, окрашивание в ацето-железогематоксилине, включают следующие операции: корешки, зафиксированные по

Левитскому (1 1), промытые и обезвоженные до 70Х-ного этанола, обрабатывают непосредственно или после постфиксации по Карнуа (6:3:1) 1 н ° раствором едкого натра, промывают дистиллированной водой 20-30 мин,окрашивают в ацето-железо-гематоксилине при 2933 С в течение от 1,5 до 24 ч, отмы- . о вают от излишков красителя дистиллированной водой 20-30 мин, после чего кончики окрашенных корешков частично мацирируют с помощью цитазы, промывают дистиллированной водой и приготовляют давленые препараты с использованием в качестве просветляющей среды 45Х-ной уксусной кислоты.

Корешки обрабатывают 1 н. раст) вором едкого натра в течение 1-3 ч о при температуре 25-30 С или 15-25 мин .при 60 С.

При частичной мацерации кончики окрашенных корешков выдерживают в цитазе в плотно закрытом сосуде .в тео чение 1,5-7,0 ч при 20-25 С или одних-трех суток при 3-7 С.

Пример. Семена хлопчатника пяти видов проращивают в термостате в чашках Петри на увлажненной фильтpoBRJIbHoA бумаге при температуре

29-30 С. По достижении корешками длины 6 — 15 мм лучшие из них отделяют от проростков и погружают в свежеприготовленную смесь Левитского, состоящую из равных частей 1 .-ной хромовой кислоты и 4 -ного формальдегида, Фиксация корешков длится 24 ч. После фиксации корешки промывают в проточной воде 3 ч, обезвоживают поочередно в 30-, 50- и 70 -ных растворах этанола по 10-15 мин. В 70 .-ном этаноле до приготовления давленых препаратов корешки можно хранить несколько суток в холодильнике, что необязательно.

Далее: 1) корешки дополнительно фиксируют (постфиксация) по Карнуа (6:3:1) в течение 20 ч;

2) промывают последовательно в 96и 70 -ных растворах этанола по 10 мин:

3) обрабатывают 1 н. раствором едо

1о кого натра при 60 С 20 мин; данную обработку рекомендуется проводить в небольшом объеме (4-5 мл) раствора щелочи в маленьком тонкостенном сосуде с пробкой в термостате при 60 С в камере; вместо этого корешки можно обрабатывать 1 н. раствором едкого натра при 25-30 С в течение 1-3 ч; .

4) промывают в 5-6 сменах дистиллированной воды при комнатной темпего ратуре 25 мин

5) слегка обсушивают фильтровальной бумагой, убрав влагу с их поверхности;

6) выдерживают в свежефильтрованном через бумажный фильтр ацето-железо-гематоксилине при 29-30 С 20 ч; о

7) отмывают от излишков красителя дистиллированной водой 30 мин; в это время удаляют ненужные части, оставляя кончики корешков длиной 1,21,5 мм;

8) помещают кончики корешков в каплю цитазы в маленьких .плотно закрытых сосудах (фарфоровых тиглях, закрываемых корковой пробковой проб35 кой) при 25 С на 1,5-7,0 ч;

9) полощут в дистиллированной воде 3-т5 мин;

10) расщепляют каждый корешок в воде, преимущественно вдоль, на три40 четыре части;

11) полощут каждую часть корешка отдельно в 45Х-ной уксусной кислоте, помещают в свежую каплю этой кислоты на предметном стекле, накрывают покровным стеклом, приготавливают давленый препарат.

Ацето-железо-гематоксилин готовили по способу: 4 г гематоксилина растворяют в 100 мл 45 -ной уксусной кислоты в колбе, затем добавляют 1 г железо-аммонийных квасцов. Колбу закрывают неплотно ватной пробкой и оставляют в светлом теплом (26-30 С) о месте на шесть-семь суток для созре55 вания красителя. Содержимое колбы ежедневно несколько раз взбалтывают.При температуре ниже 26 С созревание мо жет длиться более семи суток. 1 .осле

Формула изобретения

20

Составитель Л. Марченкова

Редактор И. Нестерова Техред Т.Иаточка Корректор Е. Рошко с

Тираж 703 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 9780/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 8803 созревания краситель фильтруют через бумажный фильтр и хранят в холодильнике. Краситель сохраняет свои красящие свойства более месяца. Перед употреблением краситель взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр. с

Приготовленные по предлагаемому способу давленые препараты имеют интенсивно окрашенные хромосомы с четко выраженными морфологическими призна- 1О ками.

1. Способ приготовления давленых препаратов хромосом хлопчатника, включающий фиксацию корешков по Левитскому, обработку раствором едкого натра, окрашивание в ацето-железо-гематоксилине, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества препаратов, корешки, зафиксированные по Левитскому (1:1), промытые и обезвоженные до 707-ного этанола, обрабатывают непосредственно или после постфиксации по Карнуа (6:3:1) 1 н. раствором едкого натра, промывают дистиллированной водой 20-30 мин, окрашивают в ацето-железо-гематоксили64 6 не при 29-33 С в течение от 1,5 до

24 ч, отмывают от излишков красителя дистиллированной водой 20-30 мин, после чего кончики окрашенных корешков частично. мацерируют с помощью цитазы, промывают дистиллированной водой и приготовляют давленые препараты с использованием в качестве просветляющей среды 45Х-ной уксусной кислоты.

2. Способ по п. l, о т л и ч а ю— шийся тем, что, корешки обрабатывают 1 н. раствором едкого натра в течение 1-3 ч.при температуре 2530 С или 15-25 мин при 6д С.

3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и ч а ю шийся тем, что, при частичной мацерации кончики окрашенных корешков выдерживают в цитазе в плотно закрытом сосуде в течение 1 57,0 ч при 20-25 С .или одних-трех суток при 3-7О С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Паушева З.П. Практикум по цитологии растений. М., "Колос", 1974, с. 119-!27, 176-181.

2. "Цитология и генетика", т. 5, М- 2, 1971, с. 184-185 (прототип).