Штамм астinомусеs griseus вниигенетика-307ф, продуцент антибиотика гризина

Штамм астinомусеs griseus вниигенетика-307ф, продуцент антибиотика гризина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(») 88111

Союз Советскик

Социалистическими

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22)Заявлено 04.04.80 (21) 2916801/30-15 с присоединением заявки № (23) П р нор итет

Опубликовано 15.11.81. Бюллетень № 42

Дата опубликования описания 18 . 11.8 1 (51)M. Кл.

С 12 Я 1/04

1Ъоудорстеенный комитет (53) УДК 6!5.779..9(088.8) ао делом изобретений к открытий

В. Г. Жданов, Л. С. Юстратова, В. В. Куклин, Н. Д. Ломовская, Л. К. Емельянова,-Т. А. Воейкова,„

А. А. Ковалев, Ю. Д. Колыганов и Г. С. Доронина (72) Авторы изобретения

- (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (54) lllTAMM,ALT!NÎÌÓÑÅS GRISEUS ВНИИГЕНЕТИКА-307Ф, ПРОДУЦЕНТ АНТИБИОТИКА ГРИЗИНА

Изобретение относит я к микробиологической промышленности и касается получения промышленных штаммов, продуцирующих кормовой антибиотик гризин.

Биологически активное вещество— антибиотик гризин широко применяется в сельском хозяйстве в качестве стимулятора роста животных ° На основе гризина с помощью наполнителя приготовляют кормовой препарат кормогри- зин. Продуцентом гризина является культура Actinomyces g riseus.

Из известных штаммов наибольшей активностью обладает штамм Actinomyces griseus ВНИИгенетика-115, его активность через 48 ч ферментации составляет 9600 ед/мл(1.). Штамм

ВНИИгенетика †1. как наиболее активный, рассматривается в качестве прототипа и в качестве базового образца.

Однако данные штаммы характеризуются чувствительностью к производственным фагам, а также недостаточно высокой скоростью роста и антибиотикообразования.

Цель .изобретения — получение штамма культуры Actinomyces griseus. устойчивого к новым актинофагам, выделенным из фаголизатов производственных культур при производстве препарата кормогрии, а также обладающего повышенной скоростью роста и антибиотикообразования, и повышенной способностью синтезировать антибиотик гризин.

Новый штамм ВНИИгенетика-307Ф получен как прототрофный ревертант аргининзависимого мутанта штамма Actinomyces griseus ВНИИгенетика-115 на фоне 400 мкг/мл антибиотика гризина;

Штамм Actinomyces дг seus ВНИИгенетика-307Ф, продуцент антибиотика гризина хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов и имеет регистрационный номер ЦМПМБ-512;

I 1

Морфологические и культуральные признаки. Клетки мицелия нитевидной формы, спороносцы спиральные, споры овальные размером 1,0-1,2х0 8-0,9.мк, Оболочка спор гладкая.

Картофельный а- àð,,Через 7 сут. культивирования при 28 С образует

0 колонии диаметром 6-7 мм, округлые, слегка выпуклые, гладкие. воздушный мицелий серый, четко выражена белая кайма, обратная стооона колоний светло-серая, со светлой каймой.

Соевая среда. Через 7 сут культиа вированная при 28 С образует колонии диаметром 8 9 мм, округлые, гладкие, воздушный мицелий светло-серый. Колонии с белой каймой, обратная сторона серая, со светлой каймой.

Маса-гептонный агар. Через а

7 сут культивирования.. при 28 С обра. зует колонии диаметром 3-5 мм, округлые, гладкие, слегка выпуклые. со слабо развитым воздушным мицелием.

Среда Гаузе 1. Через 7 сут куль. тивирования при 28ОС образует колонии диаметром 7-8 мм, округлые, гладкие, слегка выпуклые, воздушный мицелий серьй или светло-серый, по краям колоний белая кайма, обратная сторона колоний темно-серая, со светлой каймои, На жидкой регламентной производственной среде 43-х часовая культура образует крупные сплетения мицелия из свободно "растущих гиф.

Физиологические и биохимические свойства. Источники углерода хорошо усваивают фруктоэу, глюкозу, мальтозу, ксилозу, маннит, маннозу. рг ноэу, крахмал, слабо-арабиноэу, "".àõàðîçó, не усваивает лактозу, сорбит и дульцит. Наблюдается хороший рост на клетчатке.

Источники азота: хорошо растет на синтетических питательных средах, содержащих минеральные источники азота (азотнокислый аммоний. азотнокислый натрий), и на сложных пита-. тельных средах с органическим источником азота (пептон). Желатину разжижают в первые дни роста. Молоко пептонизируют на седьмые сутки роста без коагуляции.

Антагонистические свойства. Обладает широким антимикрсЦным спектром

1117

4 действия, подавляет грамположительные и грамотрицательные бактерии.

Предлагаемый штамм Actinomyces

qriseus ВНИИгенетика-307Ф устойчив к новым антинофагам Pg =/70, Pg =

115, лизирующим производственную культуру, обладает ускоренным ростом и антибиотикообразованием, эа 43 ч ферментации синтезирует в среднем

1о 11000-12000 ед/мл антибиотика гризина, Максимальная активность штамма достигает 15000 ед/мл.

При испытании штамма ВНИИгенетика-307Ф в опытнопромьппленных условиях на Унгенском биохимическом заводе получена активность антибиотика в культурной жидкости от 4500 до

9000 ед/мл. Средний показатель по 25 производственным операциям 6244 ед/мл

2О Средняя активность известного щтамма Actinomyces griseus ВНИИ-генетика-115 в производственных условиях — 4000-4500 ед/мл.

Примеры использования штамма

Actinomyces griseus ВНИИ-генетика307Ф для получения антибиотика гризина.

П р и и е р 1 . Колонии штамма

Actinomvces п1.isdus ВНИИгенетика307Ф выращивают в течение 7 сут при

28 С нн картофельной агаризованной среде и затем пересеивают на косяки с этой же средой. Культуру на косяках выращивают в термостате в те-. чение 7 сут при 28 С ° Посевной куль6

35 р турой штамма засеивают колбы Эрлен-мейера объемом 750 мл, содержащие

50 мл ферментационной среды следующего состава, Ж: кукурузная мука 2 ;

40 крахмал 1,5;àçîòíîêèñëûé аммоний

0,5; мел 0,3; хлористый натрий 0,2; фосфат калия однозамещенный 0,02; магний серкокислый 0,05 (рН 6,8-7,3) .

Ферментацию проводят на круговой о качалке при -240 об/мин и 28 С. Через

43 ч ферментации продуцент кормогризина Actinomyces gtiseus штамм

ВНИИгенетика-307Ф в лабораторных условиях синтезирует в среднем 11000Г2000 ед/мл антибиотика гризина. Содержание антибиотика в культурной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тесткультуры Вас. subt H s 6633.

Для проверки штамма ВНИИгенетика-307Ф на устойчивость к антинофагам, выделенным из производственных Фатализатов, получают чистые культуры

8811

20

Формула изобретения

30

Составитель Т. Тулякова

Техред Т,Маточка Корректор А. Ференц

Редактор Н. Минко

Заказ 9872/42 Тираж 531

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 актинофагов, обозначенные Pg = 70

У

Pg =115. Размножают актннофаги двухслойным методом, внося в верхний слой среды ПКА=5 с 0,8% агара (пропись среды приведена ниже) приблизительно 1 10 спор чувствительной

3 культуры и актинофаг в количестве. достаточном для образования слившихся негативных колоний. Через 18-20 ч инкубаций верхний слой снимают шпателем и центрифугируют 15-20 мин при

5 тыс. об/мин. Проверку выросшей культуры .штамма ВНИИгенетика-307Ф на устойчивость к актинофагам проводят на твердой питательной среде

ПКА-5 следующего состава, Ж: глюкоза 1,0; кукурузный экстракт 0 5; хло- ристый натрий 0,5; хлористый кальций 0,05; агар 1,5.

Пример 2 . Для выращивания продуцента антибиотика гризина используют среду по примеру 1. Колбы объемом 750 мл со 100 мл среды эасеивают культурой Act1nomyces arisáus ВНИИгенетика-307Ф. Культуру в колбах выращивают на качалках при

240 об/мин и 28 С 24 ч. Выращенный таким образом посевной материал передают в посевной аппарат. Выращивание посевного материала в посевных аппаратах ведут 18 ч при 28 С. Подготовленный посевной материал в количестве I0% вносят в ферментер емкостью !6 м3 с ферментационной средой по примеру 1 . Ферментацию ве17 6 дут при 28 С. Через 45 ч ферментации получена активность антибиотика в культуральной жидкости 8100 ед/мл.

Применение высокоактивного фагоустойчивого штамма Actinomyces gri»

seus ВНИИгенетика-307Ф, продуцирую- щего антибиотик гризин, позволяет осуществить рентабельное крупнотон» нажное производства кормового препарата кормогризина максимально, исключить возможность фаголизисных ферментаций. Кроме того, использование предлагаемого штамма в промышленных условиях позволяет снизить себестоимость выпускаемого продукта - препарата кормогризина, увеличив его продуктивность — съея продукта с 1 м3 за единицу.

Штамм Actinomyces griseus ВНИИгенетика-307Ф, продуцент антибиотика гризина. Штамм хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов Всесоюзного научно-исследователь» ского института генетики и селекции промьппленных микроорганизмов и имеет регистрационный номер ЦМПИ5-512.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Ф 510512, кл. С 12 К I/00. 1976.