Способ получения @ -триптофана

Способ получения @ -триптофана

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е < 1,883029

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву— (22)Заявлено 23.11.79 (21) 2842386/23-04 (51)Я. Кд.

С 07 0 209/20//

С 11 и 11/04 с присоединением заявки М

Государстесниый коиитет (23) Приоритет

СССР.

Опубликовано 23.11.81. оюллетень _#_a 43 ао делен изобретений и открытий (53) УД К547. 757.07(088.8) Дата опубликования описания 23. 11.81

В.Г. Озереденко, Г.А. Великжанина, В.В. Сан, Н. Г. Федичкина, 3. В. Коленова, T.È. Стручале1на и Н.И. Жданова !

1,. -

1:.

Институт органической химии АН Киргизской С P (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ -ТРИПТОФАНА

Изобретеwe относится к улучшенному способу получения -триптофана, при- меняемого в биоорганической химии.

Известен способ получения L-триптофана из индола, пирувата калия и хлористого аммония с использованием иммобилизованной триптофаназы с добавлением в реакционную смесь пиридоксаль-5 -фосфата, Выход триптофана составляет 703.

Триптофаназу выделяют из штамма

Е. со1i В/i t-7A. Иммобилизацию осуществляют на BrCN-сефарозе при 70 С в течение 10 мин C 1) .

Недостатком известного способа является предварительная очистка фермента, так как это сложная и трудоемкая процедура использование носителя, активированного BrCN, который является дорогостоящим реактивом, и, наконец, при использовании иммобилизованной триптофаназы в реакционную смесь необходимо постоянно добавлять пиридоксаль-5 -фосфат, который является коферментом для этого энзима.

Цель изобретения - упрощение технологического процесса.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения L-триптофана взаимодействием индола, пирувата калия и хлористого аммония,. в качестве катализатора берут нативные клетки Вас. Subti lis 339, иммобилизованные в полиакриламидном геле.

Это позволяет получить триптофан за счет использования биокатализатора с триптофансинтетазной активностью без предварительного выделения фермента, цто значительно упрощает технологическую цепочку при проведении синтеза, исключает из реакционной смеси кофермент .

Il р и м е р 1. 2 мл нативных клеток Васз) l l us Sub t i 1 is с содержанием белка 100 мг/мл в 0,1 м калий-фосфатном буферном растворе рН 7,5, смешивают с 1 мл раствора акриламида и бисакриламида

Формула изобретения г

Составитель Т. Мамонтова

Редактор Т. Кугрышева Техред М. Рейвес Корректор М. Коста

Заказ 10111/30 Тираж 446 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

883029 (475 мг и 25 мг соответственно) н прибавляют на холоду 0,3 мл 5l-ного раствора (МНц )» S>0>, 0,3 мл N, N,N,N-тетра- . метилэтилендиамина. Полимеризацию ведут при 37 С в течение 3 мин. Затемгел ь протирают через сито О, 5. мм и промывают калий-фосфатным буферным раствором. Полученный биокатализатор прибавляют в реакционную среду, содер-6 жащую индол 5 10 М, пирува-. калия

10 М, хлористый аммоний 10 М. 8 калий-фосфатном 0,1 М буферном растворе рН 7,5. Общий объем реакционной смеси составляет 30 мл. При этом начальная скорость реакции ч„ 0,174 М ° мин . 15

Прй проведении процесса в течение 3040 мин выход составляет 77 433> а при установлении равновесия в системе

96,93 индола превращается в L-триптован. зо

П ри ме р 2. В 2хлитровых колонках с иммобилизованными клетками

Вас. Subti lis (полученных по примеру 1) пропускают раствор, содержащий ,индол с концентрацией 10 " M, пируват г

;калия 10 М и хлористый аммоний 10 М, Затем раствор проходит через колонку с анионитом ИА-1, на котором осуществляют сорбцию триптофана.

После пропускания 50 мп раствора gp через биореактор колонку с анионитом выводят из системы и триптофан элюируют 0,5 r 10 -ного раствора амми а ка, раствор у пар и вают до 50 мл, триптофан высаживают этиловым спиртом. Осадок промывают холодным спиртом. Получают 0,92 г L òðèïòîôàíà.

Продукт идентифицируют методом тонкослойной хроматографии на пластинках

Si1ufol в системе изопропанол-этиловый эфир-уксусная кислота-аммиаквода (30:30:16:24).

Оптическая активность продукта

Хр -31, С 1, Н О, Т. пл . 281C

282 С.

Способ получения L-триптофана взаимодействием индола, пирувата ка- ° лия и хлористого аммония в присутствии биокатализатора, о т л и ч à ешийся тем, что, с целью упрощения технологического процесса> в качестве биокатализатора берут нативные .. клетки Вас i l lus Sub ti 1 i s, иммобилизованные в полиакриламидном геле.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. ГцКц Saburo, Eur. J. Арр1.

Microbiol,, 1975, 1(1), с. 23-39 (прототип).