Способ получения [8-(6-аминогексил)-амино]-аденозин-5- дифосфата

Способ получения [8-(6-аминогексил)-амино]-аденозин-5- дифосфата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскик

Социапистическии

Республик

О П И С А Н И Е ()883056

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Яополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 260380 (21) 2900790/04 с присоединением заявки 34(23) Приоритет (51)М. Кл.

С 07 Н 19/20

С 07 Н 19/16 Ъеударотввниый комитет

СССР

Опубликовано 23.1 181. Бюллетень .% 43

Дата опубликования описания 23.11о1

lo йеяаи изобретений и открытий (53) УДК547.963.

° 32(083. 8) (72) Авторы изобретения

А.С.Данилова и A.H.Îêóëoâà

Ленинградский ордена Ленина и ордена Трудового !

Красного Знамени государственный униеверсмтет. им. А.А.Жданова (7l ) Заявитель (5Ц СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ (8- (6-И",ИНОГЕКСИЛ)-ANHH0) -АДЕНОЗИН-5 -ДИФОСФАТА

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения (8-(6-аминогексил1-амино -аденозин-!

-5 -дифосфата (8-АГА-АДФ), используемого для приготовления биоспецифических адсорбентов для аффинной хроматог5 рафии миозина и миозиноподобных белков.

Известен способ получения 8-АГА-АДФ, t заключающийся в бромировании 5 -аденозинмонофосфата, во взаимодеиствии по«то лученного бромпроизводного с гексаметилендиамином при 140оС, в защите первичной аминогруппы трифторацетильной защитной группой, в получении имидаззлида i8- (6-трифторацетамидо) -. г т I5 амино1-5 -аденозинмонофосфата, который фосфорилируют до 18-(&-трифтораце- тамидо) -амино1-5 -аденозиндифосфата, в последующем удалении трифторацетиль.

20 ной защитной группы. Промежуточные продукты выделяются колоночной хроматографией на ионообменной смоле. 8ы ход целевого продукта в расчете на ис2 ходный мононуклеотид составляет приблизительно 304 (Ц .

Недостатками известного способа получения 8-АГА-АДФ являются многостадийность процесса и невысокий выход целевого продукта (приблизительно 303) .

Цель изобретения — упрощение процесса и повышение выхода целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что согласно способу получения Г8-(6-аминогексил) -амино1-аденозин-5 -дифосфа" та в качестве нуклеотида используют аденозин-5 -дифосфат и взаимодействие полученного бромпроизводного с гекса- метилендиамином производят при комнатной температуре и рН 11,0-11,5 с последующим выделением целевого продукта ионообменной хроматографией.

Предлагаемый способ получения 8-АГА-АДФ позволяет сократить число стадий до .двух, провести реакцию с гексаметилендиамином при комнатной

88305 формула изобретения

Составитель Л.Никулина

Редактор Т.Кугрышева Техред И.Гайду Корректор Г.Решетник

Заказ 10114/32 Тираж 400 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва,Ж-35, Раушская наб.,д.4/5 ю ю ю ю» ° аВ Юию

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул.Проектная,4 температуре и повысить выход целевого продукта с 30 до 443.

Пример. К раствору 0,55 г (1 ммоль ) тринатриевой соли 5 -АДФ в

3 мл йа-ацетатного буфера при рН

4,0 добавляют при энергичном встряхивании О, 19 г (1,2 ммоль) брома в

2 мл этого же буфера и оставляют на ночь при комнатной температуре. Максимум поглощения в УФ-спектре при 10 этом смещается до 263 нм. Непрореагировавший бром экстрагируют CC)4,, после чего реакционную смесь лиофилизуют. Лиофилиэат добавляют к раствору

10 г (0,09 моль) перегнанного гексаметилендиамина в 10 мл Н О. Добавлением конц. НС! устанавливают рН 11,5 и оставляют на 48 ч при комнатной температуре, По истечении этого срока максимум поглощения в Уф-спек" ре смещается до 279 нм. Реакционную смесь разбавляют в 100 раз водой и пропускают через колонку 11х2,5 см, заполненную анионитом ФАФ (олайненский химкомбинат) в С1 форме. Колонку промывают водой (1,5 л) до отсут- ствия качественной реакции на первичную аминогруппу с тринитробензолсульфокислотой, затем 500 мл 0,01 н

HCl и, наконец, 0,04 M iiC1 в g Ol н ЭВ

НС!. Фракция с максимумом поглощения при 27Я нм, определенном при рН 9,5, объединяют, нейтрализуют и лиофилиэуют. Вещество является хро-. матографически чистым при хроматог- зз рафировании на пластинках Silufol

6 4

UV-254 в системе изомасляная кислота: аммиак: вода (66:1:33), дает окрашивание с нингидрином. Соотношения первичный амин: нуклеотид: кислотолабильный фосфор и первичный амин:i нуклеотид:общий фосфор 1:1:1 и 1:1:2 соответственно. Выход, определенный методом с Уф-спектроскопии, считая

278 л.моль ". см = 20400 (рН 11,0), равен 443.

Способ получения (8-(6-аминогексил) -амино -аденозин-5 -дифосфата, I включающий бромирование нуклеотида, взаимодействие полученного бромпроиэводного с гексаметилендиамином, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения процесса и увеличения выхода целевого продукта, в качестве нуклеотида используют аденозин-5 -диофосфат и взаимодействие полученного 8-бромаденозин-5 -ди1 фосфата с гексаметилендиамином производят при комнатной температуре и рН 11,0-11,5.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Trayer l Trayer Н., Small О.

and 8ottomlev R.. "Preparation of

АЬепоз!ne Nucleotide Derivaties SuitаЬ1e for АНinity Chromatography".Biochem,J. 139, 1974, 609,(прототип).