Способ получения мутантов вакцинного штамма е риккетсии провачека

Способ получения мутантов вакцинного штамма е риккетсии провачека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалнстических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (1)889706 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 150280 (21) 2914959/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет—

Опубликовано 151281 Бюллетень Йо 46

Дата опубликования описания 15.1281 (51)м. к„.>. С 12 И 15/00

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8.093. .1 (088. 8) (71) Заявитель акад. Н.Ф.Гамалеи Академии медицинских наук СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУТАНТОВ ВАКЦИОННОГО

ШТАММА E РИККЕТСИЙ ПРОВАЧЕКА

Изобретение относится к микробиологии и может ать использовано для получения генетически измененных форм риккетсий, пригодных для применения в молекулярно-генетических исследованиях.

Известен способ получения мутантов вакционного штамма Е риккетсий

Провачека путем пассирования риккетсий в куриных эмбрионах с последующим отбором мутантов (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода мутантов.

Целью изобретения является повышение выхода мутантов.

Эта:цель достигается тем, что согласно. способу получения мутантов вакционного штамма Е риккетсий Провачека путем пассирования риккетсий в куриных эмбрионах с последующим отбором мутантов, свежеприготовленную взвесь вакционного штамма E рикке сий Провачека в концентрации 10

10 ИД кэ/1 г ткани предварительно разводят физиологическим раствором в соотношении 1:5 и обрабатывают Мметил М" -нитро-N- «m розогуанидином в концентрации 5-10 мкг 10-20 мин и

1 и 2 пассажи проводят в присутствии

50-200 мкг/эмбрион антибиотика, а 30

3 пассаж — 1000-2000 мкг/эмбрион антибиотика.

При этом пассажи проводят в присутствии антибиотика эритроМщина или ри фампи цин а.

Пример. Для получения предложенным способом :мутантов риккетсий, устойчивых к антибиотикам, используют свежеприготовленную взвесь штамма Е риккетсий Провачека, полученную из интенсивно инфицированных риккетсиями куриных эмбрионов (107-108

ИД /1 г ткани), извлеченных в день опыта из слабых куриных эмбрионов на б сут после заражения. Риккетсии частично очищают от ткани центрифугированием взвеси в цельном молоке при

6000 об. /мин 40 мин на центрифуге с охлаждением. Осадок суспендируют в физиологическом растворе (рН 7,2) в разведении 1:5 и тотчас после приготовления обрабатывают нитрозогуанидином НГ в концентрации 5 мкн 20 мин или 10 мкг 10 мин. По окончании контакта, суспензию разводят до 1:50 физиологическим раствором с 20% молока и вводят в объеме 0,5 мп в желточный мешок б-7-суточного эмбриона.

Для отбора мутантов в желточный мешок эмбриона на пятые сут после зара889706

Составитель С.Малютина

Редактор N.Петрова Техред Т.Маточка 1(орректор В. Синицкая т

Заказ 10898/44 Тираж 531 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 жения, обработанного НГ взвесью риккетсий, вводят рифампицин (50

100 мкг/эмбрирн) в. дозе, значительно ингибирующий.рост риккетсий исходного штамма..Эти же дозы рифампицина, но вводимые вслед за ннфицированием (в этих условиях действие антибиоти" ка наибольшее). эмбрионов, используют на следующем. пассаже -отобранных популяций..Популяции риккетсий, обна руженные з присутствии этих доз рифампицина, пассируют на 3-ем пассаже при введении вслед риккетсиоцидной дозы антибиОтика †. 1000 мкг рифампицина/эмбрион.. Путем предлагаемого способа получены мутанты штамма E .риккетсий Провачека, стабильно устой. чивые к 2000 мкг/эмбрион рифампицина и 4000 мкг/эмбрион эритромицина.указанные концентрации .антибиотиков являются предельно допустимыми при введании в куриные эмбрионы вследствие их токсичности для эмбрионов.

Применение предлагаемого способа повышает выход мутантов, сокращает время отбора мутантов, дает возмож ность отбора к нескольким селективным факторам, а также позволяет получать мутанты, которые без воздействия мутагеном получить не удается.

Формула изобретения

1. Способ получения мутантов накционного штамма Е риккетсий Провачека путем пассирования риккетснй в куриных эмбрионах с последующим отбором мутантов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода мутантов, свежеприготовленную взвесь вакционного штамма. Е риккетсий Провачека в концентрации 10

10 ИД з/1 г ткани предварительно

9 разводят физиологическим раствором в соотношении 1:5 и обрабатывают йметил-И -нитро-й-нитрозогуанидином

I в концентрации 5-10 мкг 10-20 мин и 1 и 2 пассажи проводят в присутствии 50-200 мкг/эмбрион антибиотика, а 3 пассаж — 1000-2000 мкг/эмбрион антибиотика.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что пассажи проводят

20 в присутствии, антибиотика эритромицина или рифампицина.

Источники информации, принятые во внимание при эксперТизе

1. Балаева. Н.М. 0 вирулентности вакционного штамма Е риккетсий Провачека и некоторые. вопросы биологии риккетсий группы сыпного тифа. Докт. дис., 1971. Москва.