Способ анализа в жидкостной хроматографии

Способ анализа в жидкостной хроматографии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (и)890237

Союз Советских

Социалистических

Республитт, (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву— (22)Заявлено 17.03.80 (21) 2896193/23-25 с присоеаинениект заявки М(23) Прнорнтет—

Опубликовано 15 ° 12 ° 81 Бюллетень М 46

Дата опубликования описания 15 12. 81 (5l)M. Кл.

G 01 N 31/08

3Ъаударотвеииый комитет до делан изобретеиий и открытий (53) УДК 543 544 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Е.Г.Сорокина и Е.В.Сюткина (7I) Заявитель (54) СПОСОБ АНАЛИЗА В ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Изобретение относится к жидкостной хроматографии и может быть использовано при детектировании оптическими методами, Известен способ детектирования в плоскостной хроматографии, включающий облучение пластинки, состоящей иэ слоя сорбента на подложке, пучком света определенной частицы и регистрации прошедшего или отраженного света jI) .

Недостатком известного способа является относительно низкая чувствительность и значительное рассеяние светового потока на слое сорбента.

Известен также способ анализа в жидкостной плоскостной хроматографии, включающий разделение веществ на тонком слое сорбента, высушивание плас-. тинки и спрыскивание полученной сорбционной системы реактивами, селективно вступающими во взаимодействие с разделенными веществами с образованием окрашенных производных, в результате чего увеличивается экстинкция эон на слое сорбента (2).Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является метод гашения флуоресценции, основанный на предва рительном разделении смеси веществ, высушивании пластинок и введении в слой сорбента индикатора, который в то результате взаимодействия с разделенными веществами теряет способность флуоресцировать при облучении пластинки соответствующим излучением, в то время как свободные участки сор!

5, бента флуоресцируютГ3).

Недостатки этого метода следующие.

Предел детектирования при оптическом определении количества вещества в зоне зависит от соотношения пропущенного (отражвнного) и поглощенного (рассеянного) излучения.В известных методах оптимизация этого соотношения направлена на увеличение поглощения излучения веществом в зоне по от89023

40 ношению к рассеянному на сорбенте из-, лучению. Однако не предпринимались попытки уменьшить рассеяние света сорбентом на готовой тонкослойной хроматограмме.Опрыскивание хроматограммы различными реактивами затрудняет подчас идентификацию соединений, в том числе по их спектрам при работе со спектрофотометром КИ-3. Кроме того, нет универсального проявляюще- <0 го реактива, что затрудняет проявление обычными методами хроматограмм сложных смесей ° Реактивы могут вступать во взаимодействие с примесями и давать ложные зоны или снижать 15 разность в экстинкции зон и свободных участков сорбента. В зависимости от выбранной системы растворителей . . в качестве элюента зона вещества может локализироваться у наружной поверхности слоя, в его центральной части поперечного сечения и у поверхности, контактирующей с подложкой.

В последнем случае эффективность опрыскивания проявляющим реагентом может оказаться низкой, в целом, когда различные вещества локализуются по-разному в поперечном сечении слоя, необходимы дополнительные процедуры калибровки, в противном случае результаты анализа нельзя считать достоверными и представительными.

Целью изобретения является снижение повышения чувствительности и рас ширение возможностей идентификации веществ, разделенных на плоском сор35 бирующем слое.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу анализа в жидкостной хроматографии, включающем разделение смеси веществ на тонком сорбирующем слое, после окончания разделения тонкий слой сорбента заполняют жидкостью с коэффициентом преломления, равным или близким коэффициенту преломления сорбента, и проводят

45 оптическое детектирование полученной системы.

Суть изобретения состоит в том, что при прозрачной подложке слой сорбента становится оптически прозрач,ным (или близким к этому)., в результате чего уменьшается рассеяние падающего света на слое сорбента. Этот вариант применим как в случае сканирования по пропусканию, так и по отражению. Применим он и в случае детектирования с переменной длиной волны падающего света. Жидкость, иногда на7

4 зываемую иммерсионной,наносят на слой опрыскиванием, окунанием пластинки или подводом за счет капиллярных сил, аналогично подводу элюента, Детектирование можно также проводить в кассете из достаточно прозрачного стекла, или пслимерного материала, например, покрывая пластинку сверху полиэтиленовой пленкой для предотвращения испарения жидкости.

Возможно также введение в ее состав добавок, снижающих общую летучесть системы. Возможно продувание над пластинкой инертного газа, например, азота, насыщенного парами жидкости, Для снижения скорости испарения возможно охлаждение всей системы до температуры, когда испарение не вносит существенных погрешностей в измере-. ния. Детектирование можно осуществлять путем перемещения световодов по поверхности пластинки, смазанной компаундом, имеющим тот же коэффициент преломления, что и световод, например, канадским бальзамом. В состав жидкости можно вводить незначительные добавки проявляющих реактивов, не изменяющих существенно оптические свойства системы. Аналогичный способ можно использовать и я колоночной жидкостной хроматографии.

Пример 1. В ходе исследования аминокислотного состава физиологических жидкостей из мозга и печени крыс, находившихся s момент операции в состоянии гипоксии и в нормальных физиологических условиях, соответст-. вующие хроматограммы, полученные на пластинках фирмы "Е.Иерк" и на пластинках с незакрепленным слоем, изготовленных в лабораторных условиях, с силикагелем, обрабатывают четыреххлористым углеродом. Детектирование проводят на спектрофотометре фирмы

"Оптон" КИ-3.

Результаты исследования показывают следующее. Соотношение поглощен.ного к рассеянному свету при использовании ртутной и ксеноновой ламп, а также вольфрамовой лампы, больше в

1;5- 10 раз (в зависимости от используемого слоя сорбента), чем в известном методе; отпадает необходимость использования кингидрина для проявления ряда аминокислот; в ходе идентификации получены стабильные характеристические спектры разделенных веществ, что повышает надежность их идентификации дефекты поверхности

890237

Формула изобретения но высоких температурах, что особенно 1. Способ анализа в жидкостной важно при изучении динамики гипоксии 43 хроматографии, включающий разделение детенышей "хлопковых крыс. смеси веществ на слое сорбента и onПример 6. Условия эксперитическое количественное и качествен" мента аналогичны примеру. 1, но детек- ное детектирование, о т л и ч а ю— тирование проводят по отражению с шийся тем, что, с целью снижеиспользованием зеркальной подложки., 50 ния повышения чувствительности и

Жидкость наносят опрыскиванием или расширения возможностей идентификации окунанием. веществ, после разделения в слой сорПример 7, Условия экспери- бента вводят жидкость, сни>акающую мента аналогичны примеру 1. После общую оптическую плотность сорбируюподведения жидкости к слою пластинку у щего слоя по отношению к используемонакрывают тонким листом полиэтилена му излучению. или кварца и осуществляют детектиро- 2. Способ по и.1, о т л и ч а ю вание с одновременной регенерацией шийся тем, что жидкость имеет

4 пластинки фирмы "Е.Мерк" (они доста- коэффициент преломления равный или

S слоя силикагеля без связующего не сказываются на результатах определения.

Пример 2. Условия эксперимента аналогичны примеру 1, но в качестве жидкости используют толуол.

Система получается менее оптически прозрачной, в связи с чем указанное соотношение изменяется от 1,4 до 6.

1олуол подают на пластинку как eoc- ie ходящим, так и нисходящим способом через листок фильтровальной бумаги.

Над поверхностью пластинки продувают азот, который. бврботируют через подогретый толуол. Эксперименты показывают., что направление газо-парового потока целесообразно выбирать таким же, что и для элюента.

Пример 3. Условия эксперимента аналогичны примеру 2 но детекt 26 тирование проводят при температуре от +28 С до -7оС, что несколько снио жает скорость испарения толуола и четыреххлористого водорода и облегчает условия проведения детектирования. 23

Пример 4. При определении цитруллина, мочевины, триптамина и триптофана улучшают условия детектирования путем обработки хром тограммы 14-ным раствором 4-диметиламинобензальдегида в 964-ном таноле, затем о

3О выдерживают хроматограмму 3-5 мин в парах соляной кислоты, а затем обрабатывают четыреххлористым углеродом и проводят детектирование. Предел определения снижается в 2-8 раз.

Реактив можно добавлять сразу в жидкость.

Пример 5. Условия определения как в примере 1. К четыреххлористому углероду добавляют 33 четырех- . 4 бромистого углерода, что снижает общую летучесть системы и позволяет проводить определение при сравнительточно дороги) путем непрерывного от- вода жидкости аналогично тому, как это делают в БН-камере с одновременной непрерывной додачей жидкости к противоположному, концу слоя сорбента.

Пример 8. Высушенную хроматограмму покрывают слоем канадского бальзама, по которому перемещают полированный торец световода, сплетенного из волоконной оптики с коэффициентом преломления, равным коэф" фициенту преломления бальзама. По слою пропускают поток жидкости.

Результаты, полученные в ходе лабораторных испытаний, показывают, что предложенный способ позволяет: снизить предел определения в 1,5-10 раз при прочих равных условиях, избежать ошибок, связанных с неоднородностью слоя сорбента упростить метод путем исключения дополнительных операций проявления, получить возможность надежной идентификации веществ на спектрофотометре KM-3 при снятии соответствующих спектральных характеристик; ускорить проведение анализа; создать новое направление в ТСХ при подборе элюентов, когда учитывают не только элюирующую способность системы, но и ее оптические свойства, с тем, чтобы проводить разделение сразу иммерсионной жидкостью (например, разделение аминов на силикагеле в системе четыреххлористый углерод - этилацетат, когда описанный прием можно осуществлять сразу в проточном варианте); избежать дополнительных калибровок при различном распределении разделяемых веществ по поперечному сечению тонкого слоя сорбента.

Составитель А,Бочков

Редактор О.Персиянцева Техред И. Надь, Корректор Г. Огар

Заказ 10960/71 Тираж 910 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, И-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул,Проектная,4

7 89023 близкий коэффициенту преломления сор. бента.

Способ по п.1, о т л и ч аю шийся тем, что в жидкость вводят добавки, снижающие летучесть раствора.

4. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что над пластинкой в ходе детектирования продувают поток газа, насыщенного парами жидкости. М

5. Способ по пп.1 и 4, о т л и,ч а ю шийся тем, что продувку осуществляют в направлении перемещения элюата по тонкому слою.

6. Способ по п.l, о т л и ч а ю - О шийся тем, что жидкость наносят опрыскиванием или окунанием.

7. Способ по п.1, о т л и ч à gшийся тем, что жидкость подводят и отводят от слоя сорбента аналогично @ элюенту (элюату) при непрерывном хроматографировании.

8. Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем, что слой сорбента до7 8 полнительно обрабатывают проявляющим реагентом.

9. Способ по пп 1 и 8, о т л и ч а ю шийся тем, что проявляющий реагент вводят в состав жидкости.

10, Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем, что детектирование проводят при температурах в интервале от +28 С до -7 С

ll. Способпоп.l, отличаюшийся тем, что слой сорбента покрывают пластинкой из оптически прозрачного материала, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе .

1. Шталь. Э. Хроматография в тонких слоях. М., "Иир", 1965, с.57.

2. Ахрем А. и Кузнецова А. Тонкослойная хроматография. M., "Наука", 1964, с.45.

3. Беленький Б.Г. и Виленчик Jl.З.

Хроматография полимеров. M., "Химия"., 1978, с.274 (прототип).