Способ определения степени дегидратации стекловидного тела

Способ определения степени дегидратации стекловидного тела

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

CoIo3 Советских

Соцналнстнческни

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВ ЕТЕЛЬСТВУ (ii) 894507 (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 140480 (21) 2927225/18-25 с присоединением заявки N9— (23) Приоритет

Опубликовано 30.1281.Бюллетень 89 48

Дата опубликования описания 30.1281 (5Цм. кл.

G 01 N 24/08

Государственный вомнтет

СССР по делам нзобретеннй н открытнй (53) УДК539. 143. . 43(088. 8 ) (72) Авторы изобретения

В.М.Чередниченко, П.A.Áåçäåòêî и В.Д.Зинченкс

Институт проблем криобиологии и криомедицины

АН Украинской ССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ДЕГИДРАТАЦИИ

СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценкй дегидратирующего действия препаратов, используемых в офтальмологии, в частности для лечения глаукомы.

Известен способ определения степени дегидратации стекловидного тела, заключающийся в том, что через отверстие в роговой оболочке на переднюю поверхность хрусталика помещают груз и по степени его смещения определяют уменьшение или увеличение объема стекловидного тела,на основании которого судят о степени его дегидратации (1). 15

Однако этот способ неточен, поскольку отклонение груза может проис" ходит не только в результате дегидратации,но и за счет натяжения циновых связок и работы цилиарной мышцы. 20

Кроме того, в этом способе не учитывается влияние давления со стороны тканей, окружающих глазное яблоко, а также эластичность склеральной капсу25

При осуществлении этого способа наносится обширная травма глаза (кератоэктомия и введение в переднюю камеру глаза крупного инородного тела), что вызывает ответную реакцию глаза, Ю а в стекловидном теле эта реакция может проявиться в виде изменения числа гидратацни.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ определения степени дегидратации стекловидного тела, основанный на определении количества воды, поглощенной препаратом из стекловидного тела. В этом способе оценивают степень дегидратации при помощи вис" козиметра (2 ).

Однако этот метод нельзя признать точным и объективным, так как не существует полного параллелизма между вязкостью стекловидного тела и содержанием воШ . Вязкость стекловидного тела определяется не только содержанием воды, но и содержанием мукополисахаридов, в частности гиалуроновой кислоты, а также рН стекловидного тела.

Цель изобретения — повышение точ ности способа.

Поставленная цель достигается тем,. что в способе определения степени дегидрации стекловидного тела, основанном на определении количества воды, поглощенной препаратом из стекловидного тела, снимают спектр ядерного

894507 агнитного резонанса (ЯМР) дегндратированного образца при 1-25 С, затем образец охлаждают до (-10)-(-14) С, выдерживают при этой температуре 4560 мин, вторично снимают спектр ЯМР и вычисляют отношение площади под сигналом поглощения воды при (-10)(-14) С к площади при 1-25ОС, далее аналогичным образом при тех же температурах снимают спектры ЯМР и вычисляют отношение площадей для интактного образца, после чего определяют степень дегидратации исследуемого образца.

В основе способа лежит тот факт, что ниже О С в биологических объектах остается невымороженной вода, молекулы которой непосредственно связаны с гидрофильными. центрами биологических макромолекул и других веществ, входящих в состав биологичесmoro материала.

В спектре ядерного магнитного резонанса (ЯИР) высокого разрешения таких объектов при низких темнературах сигнал молекул воды регистрируется в виде сравнительно узкой полосы, интенсивность которой пропорциональна количеству невымороженной (т.е. связанной) воды .

Установлено, что при дегидратации ,стекловидного тела глаза происходит потеря свободной воды, а количество связанной воды (в расчете на единицу сухого веса стекловидного тела} остается неизменным.

При дегядратации стекловидного тела интенсивность линии ЯИР невыморожеииой воды в нем становится больше, чем в случае интактного образ ца такого же объема, поскольку в результате потери свободной воды возрастает концентрация белковых макромолекул и других веществ в ис-. следуемом объекте.

Из сравнения интенсивностей линий

ЯИР воды в замороженных интактных и дегидратированных образцах можно найти степень дегидратации.

Способ осуществляют следующим образом.

Через 30-45 мин после виутривеиного введения дегидратаита энуклеируп)т глаза животного и извлекают стекловидное тело, которое помещают в пробирку спектрометра ЯИР вместе с эталонным веществом - тетраметилсила ноМ (ТИС), находящимся s. запаянном стеклянном капилляре. При 1-25 С они; мйот протонный спектр ЯИР, после че го образец охлаждают до(-10) -(-143C

/ выдерживают при этой температуре

45-60 мин и снова снимают спектр ЯИР, Для каждого иэ спектров находят отношение площадей под сигналами novлощения воды и ТМС. Первое из этих отношений Ь4 (при 1-25 С) является . мерой количества всей воды s oáðàçце в относительных единицах, второе (при (-10) - (-14 ГС) - мерой количества невымерзшей или связанной воды в тех же единицах. Разделив второе отношение на первое, находят количество связанной воды относительно все.1 воды в стекловидном теле:

Ь

4 Фи

Аналогичным образом проводят измерения н вычисления отношения площадей под сигналами воды и ТМС, h и

Ь для интактного стекловидного тела

> количество связанной воды Ье в кото". ром принимают за контроль. Степень дегидратации стекловидного тела d находят по формуле

d =,1 „— фа = (3-ф !фэ)400 k, Пример. Кролику внутривенно вводят дегидратант-полиэтиленоксид с о молекулярной массой 400 (ПЭО-400) в виде 20% раствора, содержащего на

1 кг масси кролика 1,5 r чистого вещества. Через 30 мин глаз энуклеир ют и извлекают стекловидное тело.

Объект помещают в ампулу спектромет-. ра ЯИР вместе с эталоном — ТИС в эа . ,паянном стеклянном капилляре. Ампулу помещают в датчик спектрометра ЯИР высокого разрешения РН-2305 с рабочей частотой 60 ИГц для протонов и снимают спектры ЯИР. На фиг. 1 .. представлен спектр ЯИР, полученный при 25 С. Отношение площадей под сигналами воды и TNC, h< для этого спектра равно 17,96. После этого объект охлаждают непосредственно и датчике спектрометра до -12 С, выдерживают при этой температуре 45 мни и снова снимают спектр ЯИР (фиг. 2)., Из полученного спектра находят от49 ношение площадей под сигналами поглощения воды и ТИС h y

h 2 0,622.

Ба основании полученных результа тов вычисляют количество связанной

4 воды (в безразмерных единицах относительно всей воды образца> в стекловидном теле глаза кролика после введения ПЭ0-400. . 0,622 ) = О,ОЯ463.

Аналогичным образом проводят ис= следования на интактных глазах, откуда находят количество связанной воды (в тех же безразмерных единицах) в интактном стекловидном теле

Ь, 0,02754

Полученные величины Ь и Ь используют для расчета степени дегидратации стекловидного тела под дейЩ ствием ПЭО-400

00% = 3 --- 00%=

0 03463 1

00 4)400 !о =25,7 /о

894507

Формула изобретения ф ие. 8

Составитель В.Покатилов

Редактор Н.Гришанова Техред M. Гергель Корректор A. Дэятко

Заказ 11472/68 Тираж 910 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Предлагаеьаяй способ обеспечивает высокую точность определения степени дегидратации стекловидного тела (rrovрешность способа «+155), поскольку при его осуществлении исследуется только стекловидное тело и на точность определения не могут влиять та» кие факторы, как давление со стороны тканей, окружающих глазное яблоко, эластичность склеральной капсулы, натяжение циновых связок и работа ,цилиарной мышцы.

Спсооб позволяет непосредственно определять степень дегидратации стек» ловидного тела, а не судить об этом косвенно, как в известном способе судят об этом по изменению объема стекловидного тела.

Способ определения степени дегид ратации стекловидного тела, основаннйй на определении количества воды, поглощенной препаратом из стекловидf У" ного тела, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, снимают спектр ЯИР дегидратированного образца при 1-25 С, затем образец охлаждают до (-10)(-14),С, выдерживают при этой темпео ратуре 45-60 мин, вторично снимают спектр ЯИР и вычисляют отношение пло.щади под сигналом поглощения воды при (-10)-(-14)оС к площади при 1 25 С, далее аналогичным образом при о тех же температурах снимают спек,тры ЯИР и вычисляют отношение пло, щадей для интактного образца, после ! чего определяют степень дегидратации исследуемого образца.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Succi и О. et a) 3 "Âî31 0cu ®)!ай, 1968, 47, В 6, Р.407-416 .

2. Керова И.К. Применение мочевины в офтальнологической практике."Вестник офталь-мологии", 1965, Ф 6, с. 65-68 (прототип).