Супрессор синтеза иммуноглобулинов

Иллюстрации

Супрессор синтеза иммуноглобулинов (патент 897245)
Супрессор синтеза иммуноглобулинов (патент 897245)
Супрессор синтеза иммуноглобулинов (патент 897245)
Показать все

Реферат

 

(72) Авторы изобретения

Е. В. Бененсон, В. Г. Панов и В. В. Василе (7l) Заявитель

Семипалатинский государственный медицинский (54) СУПРЕССОР СИНТЕЗА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ

Изобретение относится. к медицине, а именно иммунологии и может быть использовано для подавления трансплантационных реакций и лечения аутоиммунных заболеваний.

Известно применение поливинилпирролидона в качестве противовоспалительного средства (13.

Цель изобретения - расширение ассортимента супрессоров синтеза иммуноглобулинов.

Поставленная цель достигается применением поливинилпирролидона в качест ве супрессора синтеза иммуноглобулинов.

Супрессия синтеза иммуноглобулинов иммунокомпетентными клетками (например

3$ лимфоцитами) поливинилпирролидоном включает следующие этапы. Получение лимфоцитов периферической крови боль- ных, культивирование лимфоцитов, опре20 деление иммуноглобулинов в культуральной жидкости методом диск-электрофозе- ра, регистрацию полученных данных на. спектрофотометре, обработку получен2 ных спектрофотограмм с целью коли чественного ойределения иммуноглобулиновых функций.

М етодом, осаждения венозной гепаринизированной крови получают лейкоциты периферической крови больных.,Выделение. лимфоцитов производят в градиенте плотности верографина. Затем в чистый пени"циллиновый флакон помешают 2.10 лимфо, цитов в 2,0 мл среды 199 с 0,5 мл поли винилпирролидона. Экспозицию продолжают.в течение 60 мии при 37©С. Затем культуральную жидкость сливают, лимфоциты заливают 2,0 мл среды 199 и ин кубируют в течение 5 - 7 сут в термоста-.. те при 37 С. Во втором флаконе инкубируют лимфоциты не обработанные поЛи винилпирролидоном.

Культуральную жидкость в количестве

0,2 мл подвергают диск-электрофорезу в полиакриламидном геле (система геля

М 1 рН разделяющего геля 8, 6, рН концентрирующего геля 7,3, рН электродного триг» лицинового буфера 8, 5, электрофореЬ в раз

Уровень иммуноглобулинов, мг%

Обследуемый конт нгент

А Б

Э(gM .1

11 1>3

0,016

93,5+

0,43 1 г,е

0,018

5,9

Вольные ревматоидным артритом

0,01

1,2 й

< 0,001 < 0,001

0,08

0,24

0,27

11 1,2+

3700 g 045 «+

140,0 0,07

Больные ревматизмом

0,2

3 89724 деляюшем геле при 5 милиамперах на гель

1 ч, окрашивание амидовым черным).

Количественное определение полученных фракций иммуноглобулинов производят на спектрофотометре, снабженном микрометрической приставкой и подставкой для геля. При перемещении столбика, геля с находящимися в нем фракциями . иммуноглобулинов относительно источника света и фотоэлемента .по показаниям 10 спектрофотомера на миллиметровой бумаге строят спектрофотограмму. По оси абсцисс откладывают длину соответствуюшей фракции, определяемую по шкале микрометрической приставки, По оси ординат откладыва- 1% ют соответствующее фракции количество единиц поглощения.

Окончательный результат определяют площадью под кривой на спектрофотограмме и выражают в единицах поглощения, уй

Площадь под кривой определяют по формуле. бсК.C o > где

Я - плошадь под кривой;

К - 1 064;

С вЂ” ордината максимума кривой; а — длина отрезка, соединяюшего две точки кривой, проходяшего,параллельно оси обцисс на уровне с/2.

По калибровочной кривой, построенной 36 по контрольным иммуноглобулинам с известной концентрацией, единицы поглощения переводят в мг%.

Пример 1. Выделяют культуру лимфоцитов из венозной крови больного

Диагноз — ревматоидный артрит. Инкубацию проводят в двух пенициллиновых флаконах по 2 10 клеток в 2,0 мл среЬ о ды 199 в течение 5 — 7 сут при 37 С.

В одном флаконе лимфоциты инкубируют после взаимодействия с 15% водным раствором поливинилпирролидона с молекулярным весом 10000 в течение 60 мин, в другом флаконе лимфоциты, не подвергавшиеся взаимодействию с поливинилпирролидоном. Культуральную жидкость 5—

7 суточной культуры лимфоцитов в количестве 0,2 мл подвергают диск-электрофорезу в полиакриламидном геле с последующей спектрофотометрией иммуноглобулиновых фракций. В культуральной жидкости лимфоцитов, не подвергавшихся взаимодействию с поливинилпирролидоном содержится 1,3 мг% иммуноглобулинов M и 2,6 мг% иммуноглобулинов J

В культуральной жидкости лимфоцитов, подвергнувшихся взаимодействию с поливинилпирролидоном содержится 0,43 мг% иммуноглобулинов M и 0,021 мг% иммуноглобулинов J

Были проведены исследования у 20 больных достоверным ревматоидным артритом, 11 больных ревматизмом, 8 больных системной красной волчанкой, 9 больных неревматическими заболеваниями (хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гипертоническая болезнь, ишемическая болезнь сердца и др.) и 12 здоровых доноров. Во всех случаях наблюдается эффект супрессии синтеза иммуноглобулинов поливинилп ирролидоном.

Данные исследований по супрессии синтеза иммуноглобулинов поливинилпирролидоном при различных заболеваниях сведены в таблицу. (уровень иммуноглобулинов 3g М, с у мг%, в культуральной жидкости лимфоцитов, не обработанных поливинилпирролидоном А и обработанных поливинилпирролидоном 5) .

0,021. + <0,001 <0,05

0,006

0,04 (0,01 (0,05

0,03

897245

Проаолжение таблицы

Уровень иммуноглобулинов, мг%

Обслецуемый контиБ нгент!

19,4 0,55 < 00,024 р с0,01 <0,001

1,75 +

Больные 8 системной красной волч анкой

0,4 1,7 0,08 0,018,0,032 й. (О 01 с. 0,001

0,01

1,46 g 0,14 g

0,3

0,022

Больные 9 неревматическими забо0,03

0,15 лев ания ми

0,015 g <0,001 с0,001

0,011

0,08

0,018

1,15 3

0,18

0,27

0,038

Здоровые 1 2 доноры !!

Больные хроническими гастритами, язвенной болезнью 12-ти перстной,кишки, гипертонической болезнью, хроническим бронхитом, ишемической болезнью сердца и др.

°" дит к сокращению сроков лечения больных.

Фор мула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор К. Воловик Техред С. Мигунова Корректор О. Билак

Заказ 11781/7 Тираж 716 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, г . Ужгород, ул. Проектная, 4

Как видно из. таблицы, при всех заболеваниях и у здоровых поливинилпирролидон обладает достоверным супрессорным действием на клетки, синтезирующие им» щ мунноглобулины.

Применение поливинилпирролидона обеспечивает значительное уменьшение возникновения у больных нежелательных побочных действий при лечении аутоиммунных заболеваний и подавлении трансплантационных реакций. Это позволяет получать высокий лечебный эффект, привоПрименение поливинилпирролидона в качестве супрессора синтеза иммуноглобулинов.

Источники информации, принятыр во внимание при экспертизе

1. Рабинович И. М. Применение поли меров в медицине, Л., Медицина", 1972.