Способ выявления менингококкового антигена

Способ выявления менингококкового антигена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социапистическик

Респубики

< 899043 (61 ) Допол н и тельное к а вт. с вид-ву (22) Заявлено 05. 12. 79 (21) 2881414/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет (5l)N. Кл.

А 61 К 39/02

Государственный комитет

СССР ов делам изобретений и открытий

Опубликовано 23.01.82. Бюллетень ре 3

Дата опубликова ия ания-23 61.82. (53) УДКД616-07(088.8) В.И.Покровский, Н. .Семина, С.В.Шабалина, И.В.Рубцов, В.С.Цветков и jГ.А.Ермолин (72) Авторы изобретения

Центральный ордена Ленина институт усовершенствования врачей и Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии (71) Заявители (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИЕНИНГОКОККОВОГО

АНТИГЕНА

Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, и касается способа выявления менингококкового антигена в биологических суботратах (в крови, ликворе).

Известен способ выявления менингококкового антигена путем фиксации иммуноглобулинов кроличьей антисыворотки против менингококкового антигена на полистироле, внесения исследуемого антигена и инкубирования с последующим внесением меченых антител к иммуноглобулинам, повторным инкубированием смеси и выявлением менингококкового антигена по образованию комплекса с ферментной меткой f.ll .

Однако известный способ недостаточно чувствителен для выявления менингококкового антигена в биологических субстратах (в сыворотках, ликворе) и требует большого количества сыворотки.

Цель изобретения — повышение чув ствительности способа.

Эта цель достигается тем, что выявление менингококкового антигена проводят путем фиксации иммуноглобулинов кроличьей антисыворотки против менингококкового антигена на полистироле, внесения исследуемой сыворотки, содержащей менингококковый антиген, и инкубирования с последующим внесением меченых антител к иммуноглобулинам, повторным инкубированием смеси и выявлением менингококкового антигена по образованию комплекса с меткой, причем иммуноглобулины используют в концентрации 5-7 мкг/мл, фиксацию проводят при рН 9,4-9,8, а инкубирование с исследуемым антигеном ведут в течение 50-60 мин.

Пример. В лунки микротитровальных плашек вносят раствор гаммаглобулиновой.фракции в концентрации

5-7 мкг/мл (по белку) с содержанис

899043

Формула изобретения антител 0,1 мкг/мл. Плашки с содержанием лунок инкубируют 18-20 ч при +4 — +5 С. Содержимое из лунок удаляют. Лунки промывают от несвязавшихся белков и вносят исследуемый субстрат. Плашки инкубируют

50-60 мин при +37 — +38 С. Содержимое из лунок удаляют и лунки отмывают от несвязавшихся сывороточных белков, после чего в лунки вносят 1р тот же гаммаглобулин, которым были сенсибилизированы плашки, но меченый ферментом. Инкубируют плашки

50-60 мин при +37 — +38 С. Содержимое лунок удаляют, лунки отмывают от несвязавшихся меченых антител и вносят в них раствор субстрата на фермент-метку.

Результаты учитывают качественно визуально по разнице в окраске раст- ур вора субстрата в лунках, сенсибилизированных менингококковыми антителами и в лунках, сенсибилизированных инертным белком, и характеризуют количественно по превышению раз- д ности,экстинкций в этих двух лунках двух ошибок измерения используемого спектрофотометрического устройства.

Использование предложенного способа позволяет определять менинго- щ кокковые антигены с содержанием их в биологических субстратах до

0,0001 мкг/мл с целью ранней диагкостики менингококковой инфекции при эпидемиологическом обследовании различных контингентов для своевременного выявления опасных источников менингококковой инфекции.

Способ выявления менингококкового антигена путем фиксации иммуноглобулинов кроличьей антисыворотки против менингококкового антигена на полистироле, внесения исследуемого антигена и инкубирования с последующим внесением меченых антител к иммуноглобулинам, повторным инкубированием смеси и выявлением менингококкового антигена по образованию комплекса с меткой, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, иммуноглобулины используют в концентрации 5-7 мкг/мл, фиксацию проводят при рН 9,4-9,8, а инкубирование с исследуемым антигеном ведут в течение 50-60 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Фримень Х. Иммунологические методы. M., "Мир", 1979.

Составитель Г.Крюкова

Редактор А.Козориз Техред И. Гайду Корректор У.Пономаренко

Заказ !1992/5 Тй раж 716 . Подписное

BHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

ll3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал !1!1П "Патент", г, Ужгород, ул .. Проектная, 4