Способ получения щелочной протеазы

Способ получения щелочной протеазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОюз советских

Соцнапистичесник

Реснубпнн

Оп ИКАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<,899646 (Bl ) Дополнительное к авт. санд-ву— (5l)M. Кл. (22) За я влено 1 8. 04, 80 (21) 291 23 56/2 8-1 8 с присоединением заявки М(23)приорнтетГоеуаерстеаиай квинтет

СССР ие делан изобретений и открытий

С 12 N 9/50 (53) УДК 577 15 (088. 8) Опубликовано 23 01 82. Бюллетень Рй 3

Дата опубликования описания 23. 01 82

З„Г.Медведев, В.Г.Халабузарь и M.Ï.Мирошник (72) Авторы изобретения г

Ладыжинский завод ферментных препаратов (7i) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛСИ НОЙ ПРОТЕАЗЫ

Изобретение относится к фермент ной отрасли микробиологической промышленности, в частности к способу получения щелочной протеазы.

Известны способу получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентев - бактерий из группы

Bacillus subfi 1is или Вас11 1цэ гпезепtericus на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимуляторы био10 синтеза, ферментов при постоянной температуре, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной . жидкости. При выращивании продуцен15 тов в течение всего процесса культивирования в свободном пространстве ферментера поддерживается избыточное давление на уровне 0,3-0,5 кгс/см с целью устранения попадания посто" ронней HHKpooflopH иэ внешней сре" ды И, Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемо му положительному эффекту является способ получения комплекса ферментных препаратов путем выращивания их продуцентов - бактерий из группы Вас11—

1u s su bf i 1 i s на питатель ной среде, содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, в котором процесс культивирования начинают при повышенной температуре, а затем снижают до

37 С, аэрацию осуществляют постадийно, увеличивая количество подаваемого воздуха с 0,35 до 1>0 мъ /м,мин, рН среды, в случае щелочной протеазы, поддерживают в интервале 6„16,3, а концентрацию источника углерода на уровне 8-9i. Выращивание

Bacillus subf i1is-12 при указанных режимах позволяет получать протеоли. тическую активность 1200фвд/мл. по

89964

3 методике ФО!1Г! (опытно-пр мышленный регламент производства гранулирован ной щелочной протеаэы, действующий на Ладыжинском заводе ферментных препаратов) (2 .

Однако культивирование продуцен— тов щелочной протеазы по известному способу не обеспечивает оптимальных условий массообмена, сорбции кислорода и десорбции двуокиси углерода на различных стадиях выращивания.

Цель изобретения - увеличение активности фермента.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентoe — бактерий из группы

Bacillus subfi1is, на питательной среде, содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости, в процессе .культивирования дополнительно регулируют и давление в ферментере путем поддержания его в период интенсивного роста культуры до начала стационарной фазы пределах 2,0-0,8 кгс/см, в в период активного синтеза ферментов снижая его до 0,50,2 кгс/см .

4 менения давления активность культуральной жидкости в конце ферментации

12000 ед/мл.

П р и и е р 2. В ферментер емкостью 63 м загружают 31,5 м стерильной питательной среды, в состав которой входит крахмал, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и фосфорнокислый двуэамещенный аммоний. Доводят температуру до 40С, подают 1800 M /÷ воздуха на аэрацию, производят посев культуры Вас11!us

subfilis-72 и поднимают давление в ферментере до 2,0 кг/см". В период активного роста биомассы, до начала стационарной фазы в течение первых 24 ч давление в ферментере поддерживают на уровне 2,0 кгс/ем, после 24 ч давление снижают до

0,2 кгс/см, оставляя его таким до конца культивирования. Активность в конце вырацивания 13500 ед/мл (по методу ФОЛП). Беэ постадийного изменения давления активность культуральной жидкости в конце ферментаиии 12000 ед/мл.

Таким образом, реализация изоб ретения позволяет повысить активность щелочнои протеаэы на 1520 .

Ожидаемый экономический эффект от внедрения изобретения при плановом выпуске 750 товарных тонн в год составит 1,.32 млн. руб.

Пример l. В ферментер емкостью 63 мз .загружают 31,5 м стерильной питательной среды, в состав которой входит крахмал, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и фосфорнокислый двузамещенный аммоний. Доводят температуру среды до 40 С, подают 1800 мз /ч воздуха на аэрацию, производят посев культуры Bacil 1us вцЬГiiis- 12 и поднимают давление в ферментере до 1,0 кг/см .

В период активного роста биомассы, до начала стационарной фазы в течеwe первых 24 ч давление в ферментере поддерживают на уровне 1,0 кгс/см", после 24 ч давление снижают до

0,3 кгс/см, оставляя его таким до конца культивирования. Активность в конце выращивания 14200 ед/мл (no методу ФОЛП). Без постадийного из4$

5$ формула изобретения

Способ получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентовбактерий иэ группы Васi!1us subfilis на питательной среде, содержащей источник углерода в постоянной кон" центрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности фермента, в процессе культивирования дополнительно регулируют и давление в ферментере путем поддерживания его в период интенсивного роста культуры до начала стационарной фазы в пределах

899б46

Составитель Е. Воробьева

Редактор И.Николайчук Техред I.Кастелевич Корректор

Заказ 12072/34 Тираж 504 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5 филиал ППП "Патент", г,ужгород, ул.Проектная, 4

2,0-0,8 кгс/см, а в период ак тивного синтезе ферментов снижая до 0;5-0,2 кгс/см

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Ь

1. Калунянц К.А., Голгер Л.И.

Производство ферментных препаратов из грибов и бактерий. M., 1970, 2. Авторское свидетельство СССР 4395 11, кл. «2 0 13/10, 1975 (прототип).