Способ получения щелочной протеазы

Иллюстрации

Способ получения щелочной протеазы (патент 899646)
Способ получения щелочной протеазы (патент 899646)
Способ получения щелочной протеазы (патент 899646)
Показать все

Реферат

 

СОюз советских

Соцнапистичесник

Реснубпнн

Оп ИКАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<,899646 (Bl ) Дополнительное к авт. санд-ву— (5l)M. Кл. (22) За я влено 1 8. 04, 80 (21) 291 23 56/2 8-1 8 с присоединением заявки М(23)приорнтетГоеуаерстеаиай квинтет

СССР ие делан изобретений и открытий

С 12 N 9/50 (53) УДК 577 15 (088. 8) Опубликовано 23 01 82. Бюллетень Рй 3

Дата опубликования описания 23. 01 82

З„Г.Медведев, В.Г.Халабузарь и M.Ï.Мирошник (72) Авторы изобретения г

Ладыжинский завод ферментных препаратов (7i) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛСИ НОЙ ПРОТЕАЗЫ

Изобретение относится к фермент ной отрасли микробиологической промышленности, в частности к способу получения щелочной протеазы.

Известны способу получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентев - бактерий из группы

Bacillus subfi 1is или Вас11 1цэ гпезепtericus на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимуляторы био10 синтеза, ферментов при постоянной температуре, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной . жидкости. При выращивании продуцен15 тов в течение всего процесса культивирования в свободном пространстве ферментера поддерживается избыточное давление на уровне 0,3-0,5 кгс/см с целью устранения попадания посто" ронней HHKpooflopH иэ внешней сре" ды И, Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемо му положительному эффекту является способ получения комплекса ферментных препаратов путем выращивания их продуцентов - бактерий из группы Вас11—

1u s su bf i 1 i s на питатель ной среде, содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, в котором процесс культивирования начинают при повышенной температуре, а затем снижают до

37 С, аэрацию осуществляют постадийно, увеличивая количество подаваемого воздуха с 0,35 до 1>0 мъ /м,мин, рН среды, в случае щелочной протеазы, поддерживают в интервале 6„16,3, а концентрацию источника углерода на уровне 8-9i. Выращивание

Bacillus subf i1is-12 при указанных режимах позволяет получать протеоли. тическую активность 1200фвд/мл. по

89964

3 методике ФО!1Г! (опытно-пр мышленный регламент производства гранулирован ной щелочной протеаэы, действующий на Ладыжинском заводе ферментных препаратов) (2 .

Однако культивирование продуцен— тов щелочной протеазы по известному способу не обеспечивает оптимальных условий массообмена, сорбции кислорода и десорбции двуокиси углерода на различных стадиях выращивания.

Цель изобретения - увеличение активности фермента.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентoe — бактерий из группы

Bacillus subfi1is, на питательной среде, содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости, в процессе .культивирования дополнительно регулируют и давление в ферментере путем поддержания его в период интенсивного роста культуры до начала стационарной фазы пределах 2,0-0,8 кгс/см, в в период активного синтеза ферментов снижая его до 0,50,2 кгс/см .

4 менения давления активность культуральной жидкости в конце ферментации

12000 ед/мл.

П р и и е р 2. В ферментер емкостью 63 м загружают 31,5 м стерильной питательной среды, в состав которой входит крахмал, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и фосфорнокислый двуэамещенный аммоний. Доводят температуру до 40С, подают 1800 M /÷ воздуха на аэрацию, производят посев культуры Вас11!us

subfilis-72 и поднимают давление в ферментере до 2,0 кг/см". В период активного роста биомассы, до начала стационарной фазы в течение первых 24 ч давление в ферментере поддерживают на уровне 2,0 кгс/ем, после 24 ч давление снижают до

0,2 кгс/см, оставляя его таким до конца культивирования. Активность в конце вырацивания 13500 ед/мл (по методу ФОЛП). Беэ постадийного изменения давления активность культуральной жидкости в конце ферментаиии 12000 ед/мл.

Таким образом, реализация изоб ретения позволяет повысить активность щелочнои протеаэы на 1520 .

Ожидаемый экономический эффект от внедрения изобретения при плановом выпуске 750 товарных тонн в год составит 1,.32 млн. руб.

Пример l. В ферментер емкостью 63 мз .загружают 31,5 м стерильной питательной среды, в состав которой входит крахмал, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и фосфорнокислый двузамещенный аммоний. Доводят температуру среды до 40 С, подают 1800 мз /ч воздуха на аэрацию, производят посев культуры Bacil 1us вцЬГiiis- 12 и поднимают давление в ферментере до 1,0 кг/см .

В период активного роста биомассы, до начала стационарной фазы в течеwe первых 24 ч давление в ферментере поддерживают на уровне 1,0 кгс/см", после 24 ч давление снижают до

0,3 кгс/см, оставляя его таким до конца культивирования. Активность в конце выращивания 14200 ед/мл (no методу ФОЛП). Без постадийного из4$

5$ формула изобретения

Способ получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентовбактерий иэ группы Васi!1us subfilis на питательной среде, содержащей источник углерода в постоянной кон" центрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности фермента, в процессе культивирования дополнительно регулируют и давление в ферментере путем поддерживания его в период интенсивного роста культуры до начала стационарной фазы в пределах

899б46

Составитель Е. Воробьева

Редактор И.Николайчук Техред I.Кастелевич Корректор

Заказ 12072/34 Тираж 504 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5 филиал ППП "Патент", г,ужгород, ул.Проектная, 4

2,0-0,8 кгс/см, а в период ак тивного синтезе ферментов снижая до 0;5-0,2 кгс/см

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Ь

1. Калунянц К.А., Голгер Л.И.

Производство ферментных препаратов из грибов и бактерий. M., 1970, 2. Авторское свидетельство СССР 4395 11, кл. «2 0 13/10, 1975 (прототип).