Способ получения рибосомальной рибонуклеиновой кислоты

Способ получения рибосомальной рибонуклеиновой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

< 904708

Союз Соввтсинк

Социалистические

Республик

ОЛ ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (Sl } Дополнительное к авт. саид-ву (22}Заявлено 21.03.80 (2l) 2942117/28-13 (51)М. Êë. с присоединением заявки рй

А 61 К 35/60

9кударетвипыВ кенктет

СССР ао делам кзебретеикк и открытка (23) Приоритет— (53) 3 ЙК615,45:

°:615. 34 (088. 8) Опубликовано 1 5 . 02 . 82. Бюллетень яв 6

Дата опубликования описания 1 5 . 02 . 82 (72} Авторы изобретения

à -—

Н.Л.Делоне и А,Г,Хволес!

Второй московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова (71} Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОСОМАЛЬНОЙ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ

КИСЛОТЫ

Изобретение относится к области биохимии, а именно к способам получения ДНК в экспериментально" практике.

Известен способ получения рибо5 сомальной рибонуклеиновой кислоты путем гомогенизации овоцитов рыб раствором хлористого натрия, обработки клеточной суспензии фенолом, суспендирования в смеси хлористого натрия-фенол-додецил-сульфата натрия, обработки этанолом и центрифугирования (1) .

Однако известный способ не позволяет увеличить выход целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что способ получения рибосомальной рибонуклеиновой кислоты осуществляют путем гомогенизации овоцитов рыб раствором хлористого натрия, обработки клеточной суспензии фенолом, суспендирования в смеси хлористого натрия и фенол-додецил-сульфата натрия, обработки этанолом и центрифугирования, овоциты рыб перед гомогенизацией помещают в воду, добавляют диметилсульфат в концентрации 3 ° 10 M-3 10 М и выдерживают их в течение

4-6 ч.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. В 1 л отстойной воды водопровода с десятью вьюнами (самки) добавляли диметилсульфат (ДМС) в концентрации 3 10 М, после воздействия которого наблюдается полная гибель рыб через l ч от начала его применения. При гистохимическом и биохимическом анализах овоцитов в опыте, а также в контроде (10 вьюнов - самок) у рыб никаких изменений в отношении содержания

РНК в овоцитах не отмечалось.

Пример 2. В 1 л отстойной воды водопровода с десятью вьюнами (самки) добавляли ДМС в концентрации 3- 10 М. Рыб через 6 ч забивают

ЗР

3 90470 и выделяют их яичники для гистохимических и биохимических исследований.

Рыбы в контроле (10 вьюнов-самок)были живы, никаких изменений в отношении содержания PHK e овоцитах не отмечалось.

Биохимические исследования классов молекул рибосомальной PHK овоцитов опытных вьюнов показали, что при использовании метода электрофО- 1ð реза в геле агарозы в опыте можно выявить полосы электрофореза, соответствующие 45S РНК, 28 $ РНК, 18 S

РНК, а также 5S РНК, а в контрольном геле полоса класса 45 S PHK отсутствовала. Кроме того, при последующих расчетах площадей на графиках сканирования в спектрофотометре с оптической приставкой для цилиндрических гелей при изучении каждого класса рибосомальной PHK было показана, что участки геля опыта с полосами 28S

РНК, 18S PHI, а также 5S PHK намного превышают соответствующие участки в контрольном геле. В цифровых показателях это можно представить следующим образом.

В опыт»: 45 S - 10,4 ; 28 $—

21,5$; 18 $ — 31,6; 5 S — 70,4Ч .

В контроле 28 S — 4,2 ; 18$7,3У; 5S - 23<.

Используя метод биохимического анализа, получают распределение РНК, свидетельствующее о повышении содержания в опыте всех классов рибосомаль

35 ных PHK. Кроме того, появился показатель, регистрирующий присутствие

45 S РНК в опыте. Выход PHK по сравнению с контролем увеличился по фракциям: 28 S - в 5,1 (411.9 М, 18 S— в 4,3 (335,613), SS — в 3,07 (206,08Ц раза.

В контрольном геле фракция 45 S

PHK отсутствовала, а в опыте она содержала 10,4 f PHK.

8 . 4

В опыте: 45 S нет; 28 S 4,8 ;

18 S 7,19; 5 S 20,5у

В контроле: 28 S — 3 91; 18 Я—

7, 2 т ; 5 S - 22, 1 .

Сопоставление использованных способов показывает, что действие диметилсульфата на опытных вьюнах (пример 2) приводит к усилению синтетических процессов. Диметилсульфат стимулирует появление в клетке овоцитов вьюна всех фракций рибосомальной РНК, включая предшественник (45 S PHK) Регуляция считыва,,ия со всех этих генов связана. В норме большое число рибосомальных генов заблокировано. Ряд районов ядрышкового организма при этом гетерохроматизируется. Диметилсульфат снимаI ет блок гетерохроматина с этих участков. Происходит одновременная регуляция генов и рибосомальной PHK u генов, с которых идет считывание 5 S

РНК.

Предложенный способ позволяет резко увеличить содержание всех фракций

РНК в анализируемом материале (овоциты вьюна). Содержание всех исследуемых фракций PHK no сравнению с контролем увеличивается: 28 S -в5, 1 раза;

18 S - в 4,3 раза; 5 S - в 3,07 раза.

После воздействия диметилсульфата в овоцитах вьюна е наружается фракция 45 S РНК, равная 10,4У РНК, в то время, как в контрольных овоцитах она отсутствовала.

Предлагаемый способ получения рибосомальной рибонуклеиновой кислоты отличается простотой и через 46 ч позволяет увеличить все фракции

PHK в анализируемом материале. Способ может быть широко использован в практике лабораторных биохимических исследований, S0

Пример 3. В 1 л,отстойной воды водопровода с десятью вьюнами (самки) добавляли ДМС в концентра" ции 3 "ИГ М, воздействие которого совершенно не отразилось на состоянии рыб. Рыбы в контроле (10 вьюновсамок) были живы, никаких изменений в отношении содержания PHK в овоцитах не отмечалось. Выход PHK no фракциям существенно не отличался в rene опыта от геля контроля я может быть представлен следующими цифровыми показателями.

Формула изобретения

Способ получения рибосомальной рибонуклеиновой кислоты путем гомогенизации овоцятов рыб раствором хлористого натрия, обработки клеточной суспенэии фенолом, суспендирования в смеси хлористого натрия и фенол-додецил-сульфата натрия, обработки этанолом и центрифугирования, отличающийся тем, что; с целью повышения выхода целевого продукта, овоциты рыб перед гомоге904708

Составитель С.Иалютина

Редактор Л.Веселовская Техред И.Гергель

КорректорН.Швыдкая в

Заказ 195/9 Тираж 716 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раувская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 низацией помещают в воду, добавляют диметилсульфат в концентрации от 3 ° 10 M до 3 ° 10 " M и выдерживают их в течение 4-6 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

М 639897, кл. С 07 F 21/00, 1977.