Способ хранения культур клеток животных и человека

Способ хранения культур клеток животных и человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(72) Автори изобретения

Б. К. Гаврилюк, И. И. Круман и Н. Ф. Остапен

Институт биологической физики AH СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ХРАНЕ НИЯ КУЛЬТУР КЛЕТОК

ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕК

Изобретение относится к клеточной биологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для длительного переживания и сохраненияin vitro клеток млекопитаюших, Известен способ хранения культур животных и человека в поддерживаюшей среде. Поддерживающая среда содержит

40% человеческой сыворотки и 60О раствора Хенса. Перед помешением клеt6 ток в .поддерживающую среду нк предва-. рительно пассируют (1)

Способ характеризуется недостаточной длительностью переживания культуры клеток животных и человека, обусловлен15 ной резким падением рН, что неблагоприятно влияет на переживание клеток. Е1ель изобретения — увеличение длительности переживания клеток.

Поставленная цель достигается тем, что в способе хранения культур клеток животных и человека в поддерживаюшей среде, в качестве поддерживаюшей среды используют ультрафильтрат сывороточной ростовой среды, содержашей компоненты с молекулярным весом до 14 тыс. дальтон.

Ультрафильтрацией свежей сывороточной ростовой среды удаляют компоненты сыворотки крови, имеюшие молекулярный вес более 14 тыс, дальтон, которые стимулируют рост клеток. При этом сохраняются все компоненты сыворотки, которые необходимы для поддержания жизнеспособности клеток. Этим достигается наибольшая близость вешественных составов ростовой и поддерживаюшей сред.

B таблице приведены данные о проверке жизнеспособности клеток после хранения с указанием процента живых клеток по сравнению с исходным количеством в предлагаемом и известном способах.

Пример 1. Ростовую питательную среду Игла, содержащую 10% сыворотки крови крупного рогатого скота, пропускают через стерильный мембранпомещают в ростовую среду 199 с добавлением 10%-ной сыворотки крупного рогатого скота (общий объем 7,5 мл).

Через 2 дня ростовую среду меняют на поддерживающую, в качестве которой используют ультрафильтрат ростовой среды с мол. весом компонентов до

l4 тыс. дальтон и выдерживают 37 С.

Ультрафильтрат ростовой среды получают

1о способом, описанным в примере 1. Определение жизнеспособности клеток осуществляют так же, как в примере 1. При еженедельной смене среды срок переживания клеток культуры достиг 45 сут.

Использование предлагаемого способа позволяет увеличить длительность переживания культуры клеток животных и человека в 1,3 — 1, 5 раза с сохранением большого процента жизнеспособных клеток. Кроме того, способ является простым, перед хранением не требует длительной предварительной подготовки культуры клеток.

ВНК-2 1

Первичная культура почечного эпи50 телия эмбриона человека

Формула изобретения

Способ хранения культур клеток жи40 вотных и человека B поддерживв1оц1ей среде, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью увеличения длительности переживания клеток, в качестве поддерживающей среды Используют ультрафильтрат

45 сывороточной ростовой вреды, содержаСоставитель С. Малютина

Редактор H. Киштулинец Техред С. Мигунова Корректор Г. Назарова

Заказ 2 92/3 8 Тираж 504 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ный фильтр с диаметром пор 20 нм. В результате получают ультрафильтрат с мол. весом компонентов до 14 тыс, дальтон.

Клетки переживаемой культуры фибробластов ВНК-21 в количестве 150 тъ1с. на 1 мл помещают в ростовую питательную среду Игла с 10% сыворотки крупного рогатого скота (общий объем 7,5мл).

Через 2 дня ростовую среду меняют на поддерживающую, в качестве которой используют ультрафильтрат ростовой среды и инкубируют при 37 С. При еже.недельной смене среды срок переживания достигал 40 сут. Жизнеспособность клеток определяют с помощью 1%-ного раствора трипанового синего, а также по интенсивности клеточного роста после консервации. Количество клеток подсчитывают с помощью камеры Горяева.

Пример 2. Клетки первичной культуры, полученные трипсинизацией почечного эпителия эмбриона человека, в количестве 300 тыс. клеток на 1 мл щей компоненты с молекулярным весом до 14 тыс. дальтон.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Анджапаридзе О. Г. и др. Культура ткани и вирусологических исследованиях. М., Изд. медицинской литературы, 1962, с. 101 - 102.