Способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови

Способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советски к

Социалистическими

Респубинк

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (iii909634 (6I ) Дополнительное к авт. санд-ву— (22) Заявлено30.06«78 (2() 2640625/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23 ) «Ч р мори тет—

Опублнковано28.02.82. Бтоллетень № 8

Дата опубликования описания 28.02.82 (53)M. Кл.

G 0l М 33/68 рее74арстееннын eaesrer

СССР ае делан нзееретеннй н открытий (53) УДК 612. .01 5.1(088.8) Е. П. Суриков (72) Автор изобретения (7!) Заявитель

Научно-исследовательский институт медицинской радиологии

AMH СССР (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ АРИЛЭСТЕРАЗЫ

И АЛЬБУМИНА СЫВОРОТКИ КРОВИ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам выделения белков и ферментов методом электрофореза.

Известен способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле (1)

Однако при осуществлении известного способа затруднена идентификация фракции арилэстеразы, определение ее содержания в сыворотке крови, так как фракция арилэстеразы обладает относительной электрофоретической подвижностью, близкой к подвижности альбумина, что снижа ет точность получаемых результатов и не позволяет использовать электрофорез для выделения арилэстеразы в чистом виде.

Uenb изобретения - повышение точности способа.

Указа>птая цель достигается тем, что нри осушествлении способа разделения арнлэстеразы и . альбумнна. сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле, сыворотку предварительно эмуль

2 гируют олеиновой кислотой, взятой до конечной концентрации 0,001-0,002 M.

Способ осуществляется следующим образом.

Перед электрофорезом к сыворотке крови добавляют жирную кислоту, например олеиновую, в концентрации 0,0010,002 N. При этом арилэстераза образует комплекс с жирной кислотой, обладающей более высокой электрофоретической подвижностью, чем фракция альбумпна или арилэстераза до прибавления жирной кислоты. За счет этого ярилэстераза передвигается к аноду с большей скоростью., что позволяет выделять ее в первой фракции в практически чистом от других белков виде. Выявление локализации арилэстеразы на электрофореграмме и ее элюирование производят известным мето-. дом.

Пример. К сыворотке крови человека добавляют олеиновую кислоту из раочета 0,5 мг/мл и тшательно перемешивают в пробирке стеклянной палочкой в те

Составитель Ю. Алмазов

Техред M. ГеРгeab Корректор М, Демчик репектор B. Пилипенко

Заказ 886/69 Тираж 883 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., n.:I/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 3 0096 чение 4-5 мин до получения эмульсии.

Пробу полученной таким образом эмап сии вносят в стартовую лунку в 1,01,5 Мом агаровом геле с мединаловым буфером рН F> 2-8,4. К электродам цодключают напряжение от источника постоянного тока и проводяг электрофорез.

По истечении времени, достаточного для оптимального разделения (1,0-1,2 ч) арилэстеразы и альбумина, электрофорез прекрашают. От основного агарового бло ка, в котором проводился электрофорез, отрезают контрольную электрофореграмму и в ней выявляют локализацию фракций арилэстераз. С этой целью ее инкубируют в 0,01-0,02%-ом растворе 2-нафтилацетата с 0,03-0,04% прочного синего

Б в 0,1 . н,фосфатном буфере рН 7,67,8. Из основной части блока агарового геля вырезают участок, соответствующий локализации арилэстеразы. Зтот участок помешают в центрифужную пробирку, замораживают при 20-30 С, размораживают и центрифугируют при 1000 об/мин.

Надосадочную жидкость сливают, диализуют,в целлофановом мешке против дисО тиллированной воды при 4-5 С и высушивают лиофильной сушкой. Полученный препарат арилэстеразы является практически чистым, так как при повторном электрофорезе образует одну белковую зону, обпадакецую ферментативными свойствами арилэстеразы (индекс 3.1.1.2 по Международной классификации и но34 ф менклатуре ферментов), гидролизует 2-нафтилацетат, активируется Са угнетается тяжелыми металлами и комплексоо бразователями.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность полученных результатов за счет повьпцения электрофоретической подвижности арилэстеразы сыворотки крови при эмульгировании с олеиновой кислотой с 1,0-1.1 до 1,5-1,6 по отношению к подвижности альбумина, при этом арилэстеразу выделяют в чистом виде в первой фракции.

Формула изобретения

Способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле, о т л и ч а— ю ш и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, сыворотку крови предв рительно эмульгируют олеиновой кислотой, взятой до конечной концентрации 0,001-., 0,002 M.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 Uriel Л.Cbaracterisalion des 48oC nesterases et доЖгеь esherases. со -1зох б Оеэ apres ef,ectrcpbore se

let m unoeE,ес1гор 1оге5е. е getose. э.дррйссйлои д Ге ос1е des esKегоses с)о serum Фамом orvnak. A n Gas%

Pasteur, ч. 101,1961, р. 104.