Способ отделения гемо-железа от глобина

Способ отделения гемо-железа от глобина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е „„О1О1Зь

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) ЗаЯвлЕно 13,06.75 (21) 2143704/28-13 (23) Приоритет — (32) )4.06.74 (51) М. Кл.

6 01 N 33/7

Гааудератвеиный комитет (31) 7407882--5 (33) 111веция

Опубликовано 28.02.82. Бюллетень № 8

Дата опубликования описания 28.02.82 (53) У/1К 615 475 (088.8) но делам изобретений и открытий (54) СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ ГЕМΠ— ЖЕЛЕЗА ОТ ГЛОБИНА

Изобретение огно«ится к гематологии и касается обработки жидкостей, содержащих сосгавньгс компоненты крови.

Извссген способ разделения гемоглобина крови, включающий поэтапную обработку рас твори, содержащего гемоглобин, солями и органичс«кими растворителями (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода и сохранения HB TH 8HbIx свойств глобина.

Цель изобретения — повышение выхода и сохранени HJTHBHblx свойств глобина.

Поставленная цель достигается тем, что доводят рН исходного раствора до 2,5 — 4,5 затем обрабатывают его этанолом в концентрации 40--91 об.% и хлористым натрием, выпавший в о«адок гемин удаляют, а глобин осаждают из раствора и отделяют центрифугированисм.

Способ осушссгвляют следующим образом.

Сначала отлсляюг часть железосодержащего компонента, которая существует в виде скопЛения в концентрированных растворах или

;щ«орбиру«гся H;I лрогеиновом компоненте: .

3lo огл!I(ни гг«упгс гоняют посрслством центрифугирования. Добавляют хлорид натрия, затем в образующемся верхнем слое происходит осаждение глобина путем добавления в этот слой вещества, способного увеличивать ионную силу или ьызьпють обезвоживание в то время, как железосодержаший компонент остается в жидкой фазе в жидком или тонкодиспергированном состоянии.

Среда, создаваемая за счет высокого содер1р жания растворителя, например этанола, и низкого содержания воды, с определенной ионной .силой и низкой величиной рН благоприятствует тому, что гемин и его производные, а также продукты его разложения в данной жид15 кости сохраняются в жидком или тонкодиспергированном состоянии, так что глобин можно отделять путем центрифугирования.

Пример 1. К 5 r раствора гемоглобина

ЯО с содержанием сухого вещества 15% и этанола

33% при -8 С добавляют по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении смесь 1,1 мл 1 М соляной кислогы и 5 мл воды. После этого добавления гемпература за -7 С, рН 2,5, 910135

К этой смеси добавляют по каплям 80 мл

94 ного зтачола, охлаждая ее до -10 С. Глобин выпадает в осадок при добавлении к смеси 0,3 мл сульфата аммония в виде 20 ного водного раствора и центрифугируют 10 мин при 8000 g. Поверхностный жидкостный слой имеет ярко-коричневый цвет, а выпавший осадок серого цвета. Этот осадок промывают в 85%-ном этаноле при -10 С и рН 3,1, затем центрифугируют, в результате чего получают. 1О

2,4 г массы с содержанием сухого вещества 23%.

Пример 2. В раствор 36 мл 94% ного этанола, 6 мл воды и 0,55 мл 1 М соляной кислоты при -12 С вводят по каплям при одновременном помешивании и охлаждении

2,5 г раствора гемоглобина, температура остается -12 С, рН 3,0.

Затем к смеси добавляют 45 мл 94 o-ного этанола и жидкость центрифугируют в течение щ

1 мин при 8000 g, получают "густую массу в количестве 0,1 г.

Глобин выпадает в осадок при добавлении

0,4 мл 20 o-ного раствора сульфата аммония, рН доводят до 3,0, путем центрифугирования у так же, как в примере 1, получают 45 г густой массы с содержанием сухого вещества

36%. Дальнейшее осаждение из поверхностного жидкого слоя осуществляют путем добавления

0,4 мл сульфата аммония, получают 9,40 г мас- у сы с содержанием сухого вещества 42%. Полученная густая масса светло-серого цвета, поверхностный слой ярко-коричневого цвета, не образует осадка при введении трихлоруксусной кислоты.

Пример 3. К раствору 20мл 94%-ного этанола и 1,1 мл 1 М соляной кислоты при

-15 С добавляют по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении 5 r раствора гемоглобина, рН 2,9. Смесь центрифугируют . при 27000 g в течение 20 мин, образуется

: черная густая масса в количестве 0,9 г с содержанием сухого вещества 8,3%.

К поверхностному коричневому слою при перемешивании и охлаждении добавляют 50 мл

94 o-ного этанола при -15 С, при добавлении

10 мл воды и 1,2 мл 20%-ного сульфата аммония выпадает осадок.

Осадок отделяют центрифугированием при

8000 g в течение 10 мин и полученную густую массу суспендируют в 94%-ном этаноле при

$0

-15 С и снова отделяют центрифугированием при тех же условиях.

Получают 1,6 r массы светло-серого цвета с содержанием сухого вещества 37,6%.

Пример4. К раствору 40 мл 94%ного этао иола и 1,1 мл 1М соляной кислоты при -15 С при перемешивании и охлаждении добавляют по каплям 5 r раствора гемоглобина, рН 2,0.

К этои смеси добавляют по каплям 5 мл

20 ного хлорида натрия и жидкость центры фугируют при 27000 g в течение 20 мин, получают 1,4 г черной густой массы с содержанием сухого вещества 11%.

К этому поверхностному слою добавляют

12 мл воды и 1 мл 207 ного раствора сульфата аммония, после чего жидкость центрифугируют при 8000 g в течение 10 мин. Получают серую массу в количестве 3,8 г с содержанием сухого вещества 14,6%.

Пример 5. К 5 мл раствора гемоглоо бина при ° 8 С добавляют по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении смесь

11 мл воды, 4 мл этанола и 1 мл 1 М соляной кислоты, температура смеси -6 С. После добавления температура -4 С, рН 2,9. При добавлении 7 мл 0,1 М раствора гидрата окиси натрия рН 3,9. При добавлении 0,2 r сульфата аммония выпадает осадок в виде коричне» вой массы. Осадок отделяют центрифугированием при 300 g.

Жидкую массу суспендируют несколько раз в небольших количествах 94 -ного этанола при рН 3,0 и температуре -12 C и отделяют центрифугированием.

Получают 3,05 r серой массы с содержанием сухого вещества 18,8%.

Пример 6. Из 5 г гемоглобинового раствора осаждают гемоглобин добавлением в этот раствор 10 мл 94%-ного этанола при перемешивании и осаждении при -6 С. Выпавший осадок отделяют центрифугированием в течение 5 мин при 2000 g, получают 6 г красной густой массы. На дне центрифуги образуется осадок черного цвета. Красную массу добавляют к .70 мл раствора 94 o-ного этанола и 1,1 мл 1 М соляной кислоты при -12 С при перемешивании и охлаждении. После добавления рН раствора 2,9, температура -12 С. Смесь центрифугируют !О мин при 27000 g, образуется небольшое количество черной массы.

Невыпавший в осадок слой жидкости добавляют в 2 мл 40 o-ного раствора сульфата аммония и 10 мл воды. Температура этой смеси составляет -8 С, рН 3,4.

Выпавший осадок отделяют центрифугироваиием в течение 10 мин при 800 g. Получают 1,5 г серой густой массы с содержанием сухого вещества 93,3%.

Пример 7. К 20 мл 94%-ного раствора этанола и 1,1 мл 1 М соляной кислоты при, -12 С добавляют по каплям при перемешивании и охлаждении 5 г раствора гемоглобина.

После добавления рН 2,9 температура -12 С.

Полученную смесь кори итевато-черного цвета центрифугируют в течение 10 мин при 27000 g, получают 2,2 r черной массы с содержанием сухого вещества 2,7%; всплывая на поверх910135

Составитель С. Малютина

Техред М.Тенер Корректор В. Бутяга

Редактор В. Петраш

Тираж 883 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 926/79

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ность, светло-коричневая жидкость приобретает гелсобразную консистенцию.

К невыпавшему в осадок жидкому слою добавляют по каплям при перемешивании и охлаждении 70 мл 94%-ного холодного этаиола, а затем 0,8 мл 40%-ного раствора сульфата аммония и 8 мл воды. После этого до,бавления температура составляет -6 С.

1О

Выпавший осадок отделяют центрифугированием в течение 10 мин при 8000 g, получают 1,7 r белой густой массы с содержанием сухого вещества 36%.

Предлагаемый способ обеспечивает высокий 15 выход продукта с сохранением нативных свойств глобина. ь

Формула изобретения

Способ отделения гемо-железа от глобина, включающий поэтапную обработку раствора, содержащего гемоглобин, солями и органическими растворителями, о т л и ч а.ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода и сохранения нативных свойств глобина, доводят рН исходного раствора до 2,5 — 4,5, затем обрабатывают его этанолом в концентрации 4С вЂ” 91 об.% и хлористым натрием, выпавший в осадок гемин удаляют, а глобин осаждают иэ раствора и отделяют центрифугированием. е

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Бреслер С. Е. Введение в молекулярную биологию. 1973, с. 130 в 131.