Способ количественного определения аминофлуоресцеина в изотиоцианате флуоресцеина

Способ количественного определения аминофлуоресцеина в изотиоцианате флуоресцеина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

в

А.Г.Степанова, H.Â.À6ðîñèìîâà и Н.В.Ванеева в I (72) Авторы изобретеиии

Г

1 (71} Заявитель.(54), СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АИИНОФЛУОРЕСЦЕИНА В.ИЗОТИОЦИАНАТЕ

ФЛУОРЕСЦЕИНА

Изобретение относится к аналитической химии, .а именно к способам количественного определения амино флуоресцеина в изотиоцианате флуоресцеина (ФИТЦ) который является люмиВ

S несцентным микробиологическим краси- телем для метки белков.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения виинофлуорес10 цеина в иэотиоцианате флуоресцеина путем растворения анализируемой пробы в гидроокиси натрия с последующим спектрофотометрированием полученного при этом раствора (1).

Недостатком способа является низкая точность - определение дает суммарное содержание аминофлуоресцеина как образовавшегося иэ изотиоцианата флуоресцеина,.так и находящегося в виде примесей в изотиоцианате флуоресцеина. Раздельное же определение их по спектрам поглощения невозмож но, так как они совпадают.

Цель изобретения - повышение точ-. ности определения.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве растворителя испольI зуют ацетон и измеряют Флюоресценцию полученного раствора.

Определение проводят на приборе

КФЛ-2-1 со скрещенными светофильтрами: СЗС-21 (3) + СС-5 (2) - первичный, вторичный - ОС 12 (3) + ОС-13 (3).

Либо на установке на основе ИСП-51 с фотоэлектрической приставкой, с использованием в качестве источника возбуждения осветителя ОИ-18 со светофильтром УФС-3.

Определение проводят методом добавок.

ОВ05 r флуоресцеинизотиоцианата растворяют в мерной колбе в 100 мл ацетона. Одновременно готовят раствор аминофлуоресцеина, для его формула изобретения

Составитель Л.Соломенцева

Техред E.Xàðèòîí÷èê Корректор Г.Огар

Редактор А.Шандор

Заказ 1106/27 Тираж 883 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, N-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðîä, ул.Проектна,4

0,025 r его растворяют в 100 мл ацетона в мерной колбе.

В три мерные колбы емкостью 50 мл помещают 25 мл раствора ФИТЦ, затем во вторую и третью добавляют соответственно 0,5 и 1, 0 мл раствора аминофлуоресцеина и доводят объем раствора аминофлуоресцеина и доводят объеы раствора во всех трех колбах ацетоном до метки.

Измеряют интенсивность люминесценции в трех растворах и холостом опыте при работе на ИСП-51 при 403 мм

Содержание аминофлуоресцеина в процентах (Х) вычисляют по формуле (I1-1х<ьд С. 400

Х„=--------------= (Ig -1 )g (26-1) 0 000125 400

=--------2----------=0,45б (81-26) ° 0,05 где С вЂ” количество добавленной кисло-. ты, мкг, g - навеска анализируемого образца, г, (26-1) 0 00025 400

Х;= --„--"-- ---------=0,43 (143"26) 0,05

Интенсивность люминесценции раствора в первой колбе (I )-26, во второй колбе (1g) 81, в третьей колбе . (1 )-143, холостой пробы (Iygg -1.

При числе определений (п, равном

4, среднем резул.ьтате (Х = =0,453 (0,0045 г/мл }, надежности определения (р) Р=0,95, коэффициент Стьюдента равен 3,I8 (tp,n).

Стандартное отклонение 5; — ------ = и-1

14 ° 10

=-----=2 15- 10 в

Относительное стандартное отклонение

S 2 15 ° 10

S ===" -----„=0,048

Ъ х 4,15-10

254 4

Относительная погрешность среднего результата т..Р,п Ьч100 3 18 0 48*100

M""-- ----"--- " ---- ------=7,64 .

Vn 2

Предел обнаружения, вычисленный по: 3S-критерию на основании калиб-, ровочной кривой составляет 4. 10 г/мл или 4 ° 10 3.

Время проведения анализа 15 мин, 10 Ошибка определения 0,64.

Выбранный растворитель (ацетон) и условия возбуждения и люминесценции гарантируют определение аминофлуоресцеина, находящегося в раство1% ре только в виде примеси, так как

ФИТЦ легко гидролизуется с образованием аминофлуоресцеина, от выбора. растворителя зависит правильность определения, Из всех опробованных

26 растворителей только в ацетоне практически не происходит гидролиза ФИТЦ, о чем судили по постоянству интенсивности свечения ФИТЦ во времени.

Способ количественного определения аминофлуоресцеина в иэотиоциана- . те флуоресцеина путем растворения анализируемой пробы в растворителе, I отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, в качестве растворителя исполь35 зуют ацетон и,изменяют флуоресценцию полученного раствора.

Источники информации,: принятые во внимание при экспертизе

Изотиоцианатфлуоресцеин. ТУ-6-09-5823-69 (прототип).