Способ определения унитиола
Патент 911255
Авторы
Классы МПК
Способ определения унитиола
Иллюстрации
Реферат
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
<>91125Ь (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 270380 (21) 2903924/18-25 с присоединением заявки Hо(23) Приоритет
Опубликовано 070382. Бюллетень HP 9
РЦ М. Кл.
G N 21/64
Государственный комитет
СССР по делам нзобретеннй н открытнй (531УДК 535. 37 (088.8).
Дата опубликования описания 070382
A.A. Хабаров и В.П. Баранов
-,ð l
Читинский государственный медицинский институт (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УНИТИОЛА
Изобретение относится .к аналитической химии, а именно к способам определения унитиола.
Известен способ титрометрического определения .унитиола с использованием роданида аммония и иодида калия, основанный на появлении синей окраски иода с крахмалом в точке эквивалентности (1).
Наиболее близким к предложенному является способ определения унитиола, заключающийся в воздействии на анализируемую пробу индикатора в щелочной среде . Этот способ основан на реакции препарата с нитропруссидом натрия в щелочной среде, в результате которой получается малиновое окрашивание (2).
Недостатком способа является невысокая чувствительность, в результате чего этот способ позволяет лишь качественно определить унитиол в
11робе и низкая избирательность, так как определению унитиола мев1ают другие соединения, содержащие сульфгидрильгруппы.
Чувствительность известного ме, тода составляет 20 мкг/мп, чувстви" тельность предлагаемого способа составляет 0,07 мкг/мл.
Цель изобретения.. — повышение чувствительности и избирательности способа.
Поставленная цель достигается тем, что в известном способе определения унитиола, заключающемся в воздействии на анализируемую пробу индикатора в щелочной среде, в качестве индикатора используют 1,2-нафто:хинон-4-сульфокислоты натриевую соль, а о содержании унитиола судят по интенсивности флуоресценции полученного при этом.раствора.
Ф
При этом используют слабощелочную среду.
Спектр флуоресценции полученного раствора лежит в области 380 - 500 нм с максимумом 428 нм, спектр возбуждения флуоресценции располагается
20 в интервале 320 - 400 нм с максимумом 361 нм..
Отличительным признаком способа является использование 1,2-нафтохинонсульфоната натрия в слабоще 25 лочной среде с целью,повыаения
t чувствительности и избирательности способа и последующее измерение флуоресценцяи полученного раствора.
Прн изучении оптимальных условий
3() протекания реакции выяснено, что пи«ей >! а я ! Ни! Нм >! т J и«те))< .и В))<к .ти
Фпуор((ll!; «))ни о ко«пе«Ypdf)èè !1ре— пирата нежит )! Н«гервапе О, ()7
30 мкг/мл. Чун .твительность реакции, описываемой В и:3обретении, составляет 0,7 мкг/мл, )го позвот)яет протаблица
Концентрация унитиола, мкг/мп
Относительная интенсивность флуоресценции, %
0,1
0 i 01
18
12
10,0
1,0
2,0
72.
20,0
0,2
0,02
100
33
30 0
3,0
0,3
100
38
4,0
0,4
100
52
5,0
0,5
0,6
100
6,0
100
74
7,0
0,7
100
84
8,0
0,8
90 0
100
90
9,,0
0,9
100
) 0,0 . 100, 0
100
100
100.1,0
Определение проводилось. на отечественном электронном флуориметре марки ЭФ-3MA с фипьтрами В,-1 и
B.-2. Спеектры определялись на флуорс.сцентном спектрофотометре Хитачи" модель ИРF-27. производства Японии.
При изучении оптимапь условий роведения реакции на унитиол найТаблина 2
Объем реактива на 10 мп исследуемого раствора
Концентрация раствора нафтохинонсульфоната, Ъ
0,01 0,1 1
33 50
1 кап.
2 кап.
3 кап.
4 кап.
5 кап.
6 кап.
7 кап.
48 33
42 33
Оптимальной концентрацией раствора 1,2-нафтохинонсульфоната натрия, является 0,1%-ный свежеприготовленный раствор по ? капли на обработку анализируемой пробы объемом 10 м! с ко)ше«трацией ?0 мкг/мп унитиола.
Гас гвор реактива готовится на тетра.боратном б фере с рН =-. 7,5.
0,03
0,04
0,05
0,06
0,07
0,08
0,09
0il00 40,0
50,0
60,0
70,0
80,0
Водить о))ре))е))ениг !)ре))арата в J)i— карст Вени! )х формах и В биологи«епкин. жидкостях, Зависимость инте))сивнгк ти флуоресцевции фе«о унитиола от ко«цен1 рации препарата пре)1стан))е))а в табл ° 1, 1 2 4 3 дена оптимальная концентрация применяемого реактива — раствора 1,2-нафт ахинон-4- сульфокислоты натриевой соли. Зависимость относительной интенсивности флуоресценции унитиола от концентрации нафтахинонсульфсната натрия представлена в табл.2.
38 60 18
42 44 7
45 40 0
Найдена зави имость и))1е«сивности флуоресценции от рН ср! ды, создаваемой тетрабnpaz«)iM буферным раствором. Зависимое ь интенсивности фл,,орес;це«ци« у«н-. тиола от рН cpелы представ..:.« :. в табл.3.
65 рН среды . 3,5 5,0 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 9 0 10
Относительная интенсивность флуоресценции, В
О 3 20 60 70 100 57 40 23
Оптимальным рН среды является водородный показатель, равный 7, 5 для выявления максимальной флуоресценции.
Пример 1. Определение унитиола в 5%-ном растворе. Методика определения: 1 мл 5В раствора из
1 ампулы переносят в мерную колбу на
500 мл. Доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают. К 1 мп полученного раствора прилить 9 мл тетраборатного буферного раствора 0 с рН = 7,5 и после перемешивания
2 капли 0,1Ъ-ного раствора 1,2-нафтохинон-4-сульфокислоты натриевой соли, переносят раствор в кювету и . флуориметра и замеряют интенсивность 25 флуоресценции. Содержание унитиола устанавливают по стандартному образцу, для приготовления которого навеску порошка унитиола равную 0,05 г переносят в мерную Колбу на 500 мп, доводят .водой до метки и перемешивают до полного растворения. К 1 мп полученного раствора препарата приливают 9 мп тетраборатного буферного раствора с рН = 7,5 и 2 капли 0,1%-ного раствора 1,2-нафтохинон-4-сульфокислоты натриевой соли, переносят раствор в кювету и флуориметрировать одновременно с опытными образцами. Результаты определения унитиола в 5%-ном растворе представлены в табл. 4.
Т а б л и ц а 4
Метрологические характеристики
Найдено унитиола
По .калибровочно- В 1 мл 5%-ного му графику, раствора, г/мп мк г/мл
0,050 .0,048
Х = 0,0496 ф = +0,00127
10,0
9,6
Е = +0,00089
035
9,8
О, 049
10,0
0,050
0,050
0,049 .О, 050
0,052
0,048
0,050
Истинное значенне определяемой величины:
10,0
A = O,0496 +
+ 0,00089
9,8 10, О
10,4
9,6
10,0
55 на том же буферном растворе. Осторожно перемешивают, не допуская вспенивания раствора, и флуориметрируют одновременно со стандартными образцами. Содержание унитиола в крови
60 устанавливают по калибровочному гра.фику, для построения которого к
1,0 и 0,1 мп водного раствора унитиола с содержанием препарата 100 мкг/мл приливают соответственно 9,0 и
,« 9,9 мл тетраборатного буфера с рН
Пример 2. Определение унитиола в кровяной сыворотке экспери- ментальных животных 5 мл артериальной крови помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 15 мин при 8000 об/мин. К 1.мл надосадочной жидкости приливают 9 мп тетраборат.ного буферного раствора с рН = 7,5 и 2 капли 0,1Ъ-ного свежеприготовленного раствора 1,2-нафтохинон-4-сульфокислоты натриевой соли
111 I L
911255
Таблица 5
Содержание унитиола в крови через 1 ч после приема
Путь введения
Вес животного оличест во веденного нитиола, г/кг по калибровоч- В 1 мл крови, ному графику, мкг/мл мкг/мл
5,2
52,0
0,16
1,5
Внутримышечно
Формула изобретения
Составитель Е. Карманова
Редактор A. Шандор Техред И .Надь Корректор H. Стец
Заказ 1106/27 Тираж 883 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
7,5 и по 2 капли 0,1Ъ-ного раствора нафтохинонсульфоната натрия в том же буфере, растворы перемешивают и флуориметрируют вместе с Исследуемыми растворами. По результатам флуоТаким образом, предлагаемое техническое решение дало возможность повысить чувствительность и избирательность определения унитиола и может быть использовано с большой эффективностью.
Способ определения унитиола, заключающийся s воздействии на анализируемую пробу индикатора в шелочной среде, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения чувствириметрии строят калибровочный график.
Данные по определении унитиола в сыворотке крови экспериментальных животных представлены н табл.5. тельности и избирательности, в качестве индикатора используют 1,2«н афт охинон-4-сульфокислоты н атриевую соль, а о содержании унитиола судят по интенсивности флуоресценции полученного при этом раствора.
Источники информации, 25 принятые во внимание при экспертизе
1. Гейн Л.Г. и др. Титрометрическое определение унитиола -с примесью сульфата меди.- Фармация, 9 4„ 1975, с. 69-70.
30 2. Фармакопейная статья, ФС-42739-73 (прототип).