Способ дифференциации культур васillus тнuringiеnsis

Способ дифференциации культур васillus тнuringiеnsis

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Соцналистнческнк

Ресниублнк (и) 927854 (6I ) Дополнительное к ввт. свид-ау (22)Заявлено 25.01 79 (21) 2718453/30-15 с присоединением заявки М (23) Приоритет(5t}Nl- Кл.

С 12 и 1/00

1Ьеуаарстаееы5 конатет

CCCP ао аоаеи аэебрвтеннй и отарытвЯ (53) УДК 578.6. . 078(088. 8) Опубликовано 15 ° 05 82. Бюллетень М 18

Дата опубликования описания 15. 05 ° 82 (72) Авторы изобретения

Л.А.Чил-Акопян и С.Ç.Чарчян (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ КУЛЬТУР

ВАСI LLUS THURINGIENS I S

Изобретение относится к микробиологии, а именно к изучению энтомопатогенных бактерий, используемых в про изводстве бактериальных инсектицидных препаратов. Оно может быть использовано как в научно-исследовательских целях при селекции высокопродуктивных штаммов Baci11оэ thuringiens s, так и в практической работе, при производстве инсектицидных препаратов из культур этого вида.

Культуоальные признаки бактерий

Baci.1lus thuringiens s при выращивании их на различных питательных средах весьма ограничены и по характеру колоний нельзя отличить клоны, образующие и не образующие кристалловидные токсины.

Имеются данные о дифференциации по морфологическим особенностям колоний 13Однако связи характера колоний с наличием или отсутствием кристаллов в культуре не отмечается.

Известно также выявление кристаллообразования разными способами микроскопического исследования в свето" вом и электронном микроскопах (2 3.

Однако определение известными способами в культурах Вас. йЬог!пд1.

ens s кристаллообразования, и тем более, численного соотношения в ней

I кристаллообразующих и бескристаль о ных клонов затруднено трудоемкостью микроскопических исследований с большой затратой рабочего времени. Последнее ограничивает возможности проведения больших объемов исследований, тре15 бующих учета кристаллообраэования у отдельных колоний, в частности, при массовых анализах на производст: ве.

Цель изобретения - ускорение процесса дифференциации культур Bacillus thuringiensis.

Цель достигается тем, что согласно способу дифференциации культур, Bacillus thuringiens s культивируНтаммы

И ссле до в а но колоний каждо ro штамма

Исследовано штаммов

Окраска колоний

Пигмент

Пигмент +

Кристалл Кристалл

Кристалл Кристалл

837 839 841

844 876 880

889 893 896 12

917. 1096-3

853 1

Розовая

805 8» 2

831 873 875

884 895 905

914 915 918

919

871»13

879 891

887

888

921

924

Смесь колоний розовые и без пиг5

1

1

5

5

8

28

50 мента

102

32

641

828 925

Без пигмента

3 92785 ют на яичножелтковой агариэованной среде, а колонии отбирают по розовому окрашиванию.

Способ заключается в использовании установленной прямой корреляции пигментообразования некоторых разновидностей Вас. thur ing 1åïû s с образованием энтомоцидных кристаллов.

Колонии, образующие кристаллы, дифференцируют от колоний, не образую- 10 щих кристаллы, визуально, по культуральному признаку, а именно: пигменту розового цвета на 103-ной эмуль,сии яичного желтка в физиологическом растворе с 33 агар-агара. Яичный 15 желток из асептически вскрытого яйца добавляют в растопленный и остуженный до 40-50оС стерильный физиологический раствор с агаром. После тщательного перемешивания среду раз- 20 ливают в чашки Петри, на которые рассевают суспензию исследуемой культуры. Инкубация проводится при 28

30 С в течение 2 сут.

Кристаллообразующие колонии диф- l5 ференцируются визуально по их розоJ вому цвету, в отличие от беловатой пигментации колоний, не образующих кристаллов.

Дифференциацию кристаллообразования пигментированных культур осуществляют с обязательной индивидуальной микроскопией каждой колонии.

Установленная между кристаллообразованием и пигментообраэованием корреляция подтверждена при исследовании рассевов пигментообразующих культур Вас.thuringiensis на вышеуказанной питательной среде.

Пример 1. Культуры разновидности caucasicus состоят иэ штаммов, различных по составу пигментных и апигментных клонов. Одни культуры состоят. полностью иэ пигментных клонов, другие - из апигментных, третьи - из их смеси.

Корреляция образования кристалловидных токсинов с пигметообразованием у культур Вас.thuringiens s ч

cancasi cus приведена в табл. 1.

Таблица 1

Таблица 2

Исследовано колоний каждого штамма

Исследовано штаммов

Штаммы

Окраска колоний

ПигментПигмент +

Кристалл

Кристалл Кристалл Кристалл

+ +

Розовая 32,43,827,855,862 5

881,90 3, 8 48,854

Без пигмента 695 716

Приведенные в табл. 2 данные свизю детельствуют о том, что среди куль.тур серотипа "А" имеются штаммы, полностью пигментированные или совершенно без пигмента. Смешанных пигментных и апигментных культур среди имеющихся не оказалось. Имеет место полная корреляция пигментации и образования кристаллов.

Пример 3. Исходная культура

Вас.thuringiens s v. caucasicus 92" ао характери зует ся 10 -ным крист аллообразованием. При рассеве она состоит из 54 розовых и 951 апигментных клонов. После двух последовательных рассевов и выделений изолируют два кло45 на - апигментный и пигментный. Первый характеризуется отсутствием кристаллов, а второй - 504-ным образованием кристаллов.

Определение кристаллообразования

50 по пигментации колоний, вместо микроскопии, значительно упрощает работы с пигментообразующими культурами Вас. thuring 1ens s. Визуальная оценка кристаллообраэования выполняется ориентировочно в 10-50 раз быст-. рее, чем микроскопически. формула изобретения

Способ дифференциации культур

В aci 1 I us thur ing i ens s, включающий культивирование последней на твердой питательной среде и отбор выросших колоний, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса дифференциации, Baci 11us thur ing ien" в1s культивируют на яичножелтковой агаризованной среде, а колонии отбирают по розовому окрашиванию.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Гу касян А. Б. и др. Биоло гия и культивирование микроорганизмов.

Красноярск, 1969, с.83.

2. Норрис Дж. Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М., "Колос", 1976, с. 100-142 (прототип).

ВНИИПИ Заказ 3170/36 Тираж 505 Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 927854 6

Как видно из табл. 1 данные мик- антигену. Это устраняет предпаложероаналиэа выявляют связь образова- ние о воэможности наличия в культуре ния кристаллов с пигментообразованием. посторонних Вас.cereus.

Ф

Серологические исследования по казывают, что выделение из культур s Пример 2. Коррекляция обракристаллофоров разновидности саи- зования кристалловидных токсинов с

caslcUs штаммы апигментных некрис- пигментообраэованием у культур серо. таллофоров (24 штамма) оказывают- пита "А" Вас.thuringiensls., привеся гомологичными caucasicus по Н- дена в табл. 2.