Способ получения комплекса протеолитических ферментов

Способ получения комплекса протеолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советски к

Соцнапнстнческнк

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОВЕЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (и)933097 (61) Дополнительное к авт. csNA-ay (5I )M. Кл.

А 61 К 35/60 (22) Заявлено 29.05,80 (21) 2955550/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет

9кудареткеы11 кемитет

СССР аа делан кэаеретенкй к отерктк11

Опубликоваио 07.06.82. бюллетень,йе 21

Дата опубликования описания 07 ° 06.82, (53) УДК615.45:

:615.34(088.8) С.А.Кудинов, Л.М.Эпштейн, М.В.Колодэейская, В,Н.Акулин и Т.Н.Пивненко (72) Авторы изобретения

Ордена Трудового Красного Знамени институт биохимии имени А.В.Палладина (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ

ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к ферментной промышленности, а именно к технологии получения протеолитических ферментов.

Известен способ получения комплекса протеолитических ферментов путем гомогенизации животной ткани водных организмов, осаждения ферментов с последующим выделением целевого продукта.

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода целевого продукта (выход препарата составляет 20 г из 1 кг сырья).

Целью изобретения является повы°,. i$ шение выхода и расширение сырьевои базы.

Указанная цель достигается способом получения комплекса протеолитических ферментов, включающим

20 гомогенизацию животной ткани водных организмов, осаждение ферментов с последующим выделением целевого продукта, отличающегося от известного тем, что гомогенизации подвергают отходы окуня-терпуга Sebastolobus maегоhi s, Pl eurogrammus о

monopterigiur при температуре 2-4 С> далее Ферменты осаждают охлажденным до -15 т (-20 С) ацетоном при о соотношении сырья к ацетону l: 2,21: 2, полученный осадок через 2030 мин отжимают и удаляют ацетон при температуре 20-25 С.

Пример 1. 1 кг гепатопанкреаса, выделенного из свежего окуня-терпуга Sebastolobus maегоhis, гомогенизируют на микроизмельчителе тканей PT-2 со скоростью 5000 об/мин при 2 С до получения однородной массы.

К 1 кг охлажденного гомогената добавляют 2 объема (2 литра) ацетона, охпажденного до -20 С при быстром перемешивании. Через 20 мин, полученный осадок отжимают на Нутчо фильтре, высушивают при 20 С, уда933097 4 лучения однородной массы. К 1 кг охлажденного гомогената добавляют

2,2 л охлажденного до -15 С ацетона при перемешивании. Через 30 мин осадок отжимают на Нутч-фильтре, высушивают при 25 С удаляя следы ацетона, .в вакууме сушильного шкафа, Комплекс ферментов, полученный

1О по описанному способу, содержит щелочную, нейтральную и кислую протеиназы, аминопептидазы, карбоксипептидазы. Из 1 кг гепатопанкреаса окуня-терпуга получают 248 г препарата (28 г белка), что îoñтавляет 25 от исходного сырья.

Выход по казеинополитической активности составляет 70 . Удельная активность, выраженная в ед/мг белка, равна 309 (субстрат БТМЭ вЂ” бензоил-Z-тирозин метиловый эфир), 192 (субстрат БАЭЗ вЂ” бензоил-Z-аргинин этиловый эфир), 0,4 (субстрат казеин).

Ацетоновый препарат из водного экстракта

3081

3,9

Ацетоновый препарат из гомогената

27,8

Результаты показали, что предло женный способ позволяет получить из гепатопанкреаса окуня-терпуга по простой технологии ферментный комплекс с высоким выходом и имеющий набор ценных ферментов. Общая протеолитическая активность ацетоновых препаратов, полученных из водных экстрактов (см. табл.) по сравнению с протеолитическим комплексом, полученйым по предложенному способу, значительно ниже: на казеине — в 3,5 раза, БАЭЗ вЂ” в 3,1 раза, ляя следы ацетона продуванием воз духа.

Комплекс ферментов, полученный по предложенному способу, содержит щелочную, нейтральную и кислую протеиназы субстраты: казеин рН 7,8; гемоглобин рН 6,0; 3,0 ., аминопептидаэы,(лей-гли-гли рН 7,8), карбоксипептидазы (карбобензокси-глицилглицин, рН 7,8). Из 1 кг гепатопанкреаса окуня-терпуга получают в среднем 225 r препарата (25,8 г бйлка), что составляет 23 от исходного сырья. Выход по казеинолитической активности в среднем 65,770 . Удельная активность, выраженная в ед/мг белка, равна 309 (субстрат БТМЭ вЂ” бензоил-Z- тирозин метиловый эфир), 192 (субстрат БАЭЭ— бензоип-Z-аргинин этиловый эфир)

0,4 (субстрат казеин ). "Гепатопанкреас" это совокупность внутренних органов рыб с преобладанием элементов желудочно-кишечного тракта, содержащих гепатопанкреас.

Пример 2. 1 кг гепатопанкреаса окуня-терпуга Р1eurogram-.

mus monopterigiur гомогенизируют при 4,5 тыс. oe/ìèí при 4 С до по2$

В таблице представлены сравнительные данные по выходу и активности комплекса протеолитических ферментов.

1.384.500 1.922.700

)1000 5 ° 337.600 8.590.200

БТМЭ вЂ” в 4,5 раза. При известном способе выход препарата составляет

20 r из 1 кг сырья. В предлагаемом способе выход составляет 225-250 г препарата из I кг сырья или в расчете на белок в препарате — 2628 г белка. Из 1О кг сырья получен препарат, содержащий 20 r химотрипсина и 24 г трипсина, в то время, как из 10 кг поджелудочной железы крупного рогатого скота можно получить 3 г кристаллического фермента.

Формула изобретения .

Способ получения комплекса протеолитических ферментов путем гомогенизации животной ткани водных организмов, осаждения ферментов с последукицим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и расширения сырьевой базы, гомоге933097 6 низации подвергают отходы окуня. терпуга Sebastolobus maегоhis, P1eurogrammus monopterigiur npu

2-4 С, далее ферменты осаждают охФ

S лажденным до (-15)-(-20 )С ацетоном при соотношении сырья к ацетону l 2,2-1:2, полученный осадок через 20-30 мин отжимают и удаляют ацетон при 20-25" С.

Составитель С.Иапютина

Редактор Г.Прусова Техред З.Фанта Корректор Л.Бокшан

Заказ 4000 5 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4