Способ получения полипептидов

Способ получения полипептидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОПИПЕПТИДОВ путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, ценШ :ттщ |ЗГ::,,::,13 трифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией,отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и вьвделения полипептидов основной природы , ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

ОЮ %

РЕСПУБЛИН

459 А

4(5!) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ

К ASTOPCXOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 2942205/28-13 (22) 18.06.80 (46) 30.06.85. Бюл. В 24 (72) В.Г.Морозов и В.Х.Хавинсон (53) 615.45:611.435 (088. 8) (56) 1. Ноорег Т.А. et.al. "The

purification and properties of Ьоvine thyuosin".Ann N.J. Acad $е

1975, 249, 125-144. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрнфугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией,. отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и выделения полипептидов основной природы, ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии. хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном. а 1

934589

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения физиологически активных препаратов для лечения иммунодефицитных состояний. 5

Известен способ получения полипептидов путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрифугирования, удаления осад- ка, обработки надосадочной жидкое- 10 ти ацетоном с последующей фильтрацией Ц .

Однако указанный способ является трудоемким, имеет сложную многостадийную технологию производства 15 и не позволяет получать ряд биологически активных веществ, содержащихся в тимусе.

Цель изобретения — упрощение, способа и выделение полипептидов 20 основной природы.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения полипептидов путем гомогенизации изб мельченной ткани железы тимуса, цен- 25 трифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией, ткань тимуеа после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной 30 кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно об, рабатывают ацетоном.

Способ поясняется следующим примером.

Пример 1. Исходное количество тимуса 500 r, Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой клетчатки, промывают водой, 40 затем ацетоном и помещают в соотношео нии 1:4 при 4-10 С. Через 24 ч ацетон сливают,, а ткань тимуса взвешивают и гомогенизируют. Гомогенат помещают в ЗХ-ный раствор уксусной 45 кислоты из расчета 1 часть гомогената на 6 частей раствора кислоты (рН=3,5-4,0). К раствору кислоты добавляют ZhC1 из расчета 1 г ZnCl< на 1 л ЗХ раствора кислоты. Экстрак- 50 цйю проводят в течение 72 ч. По окончании экетракции субстрат центрифугируют при ЗООО об../мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1,5 (1 часть 55 супернатанта и 5 частей ацетона).

Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают 5,0-5,5 r белого порошка, содержащего физиоло. гически активные вещества тимуса.

Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 550 мл 5Х уксусной кислоты. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в.стерильные флаконы по 1 мл, затем лиофилиэируют и закрывают стерильными резиновыми пробками. В результате в одном флаконе содержится 10 мг веществ, выделяемых из тимуса.

Пример 2. Исходное количество тимуса 10 кг. Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой ткани, промывают водой, затем ацетоном и помещают в ацетон в с соотношении 1:4 при 4-10 С. Перед экстракцией ацетон сливают, а ткань тимуса взвешивают и гомогениэируют.

Гомогенат ткани тимуса помещают в

ЗХ-ный раствор уксусной кислоты из расчета 1 часть гомогената на 6 частей раствора кислоты (рН=3,5-4,0).

К раствору кислоты добавляют ZnCl из расчета 1 г ZnC1 на 1 л ЗХ-ного раствора кислоты. Экстракцию проводят в течение 72 ч в емкости с ме— шалкой для периодического перемешивания субстрата. По окончании экстрак-. ции субстрат центрифугируют при

3000 об /мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1:5. Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают

100-110 г белого порошка, содержащего физиологически активные вещества тимуса. Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 11Х и 5Х-ной уксусной кислоте. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в стерильные флаконы по

1 мл, затем лиофнлизируют и закрывают стерильными резиновыми пробками.

Один флакон препарата содержит 10 мг веществ, выделенных из тимуса. Полу.ченный тималин представляет собой комплекс веществ (нуклеопептидов и полипептидов) со следующими характеристиками.

При изучении в эксперименте установлена высокая биологическая активность препарата (стимуляция клеточного иммунитета, процессов регенерации и гомопоэза). В терапевтических дозах препарат не обладает токснчес934589

Состав тималина

Изозлек» трическая точка (0,2 ед.рН) Молекулярная масса (х500) Компонент

Содержание компонентов, вес. 7

Максимум оглощеия в уфпектре предел среднее колебания (НМ) 660

Нуклеопептиды 75-85

2,5

260

Кислые полипептиды

4,0,5000

10-20

280

Основные полипептиды

8,5

5000

3-8

280

Редактор Л.Письман ТехредМ.Гергель КорректорА.ОбруЯаР

Заказ 4497/3 Тираж 722 . Подписное

BHHHI1H Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал IIIIII "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 кими свойствами и не вызывает аллер« гических реакций.

Результаты экспериментального и клинического изучения показали, что препарат обладает выраженной биологической активностью, которая выражается в усилении иммунологической реактивности (увеличение количества лимфоцитов, Т-лимфоцитов, антителообразующих клеток в. селезенке в

4 ответ на введение тимусзависнмого антигена) и сможет найти широкое применение в медицинской практике для лечения и предупреждения ряда заболеваний человека..

Способ получения тималина позволяет выделять нуклеопротеиды и пептиды основной природы, отличается простотой, содержит меньшее количест1О во операций (6 стадий).