Способ выращивания актиномицетов

Способ выращивания актиномицетов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

И306РЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсиин

Социапистическик

Республик ()939544 (6I ) Дополнительное к авт. санд-ву (22) Заявлено 06. 08. 80 (21) 2993120/28-13 (51)M. Кл. с присоединением заявки №

С 12 И 1/00

//С 12 P 1/06

Ркударстеенный квинтет

СССР ао делаю нзобретеннй н открытнй (23) Приоритет

Опубликовано 30. 06. 82, Бюллетень № 24

Дата опубликования описания 30. 06 . 82 (53) УДК 576.8 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Н. К. Джангалина, М. Х. Шигаева и Н. Б. Ахматуллина

Ф

Казахский ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. С. 1 .", -Кирова и Институт микробиологии и вирусоло A - ÀÍ Казахской ССР (73) Заявители (54) СПОСОБ ВЬЗРАЩИВАНИЯ АКТИНОМИЦЕТОВ

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам выращивания актиномицетов.

Известен способ выращивания актииомицетов на питательной среде. Сти5 муляция роста достигается тем, что посев выдерживают в магнитном поле околс двух недель (1 j.

Недостаток этого способа - его длительность. о

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту к предлагаемому является способ выращивания актиномицетов на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал, необходимые минеральные соли в условиях аэрации среды.

Согласно известному способу культуру продуцента Act.griseus выращивают. на качалке в колбах с питатель- 2о ной средой, содержащей кукурузную муку, крахмал, сернокислый аммоний, хлористый натрий, фосфорнокислый калий, мел и энантовую кислоту (для разобщения процесса окислительного фосфорилирования) в течение 36 ч.

Выращенный посевной материал переносят на засев питательной среды того же состава в посевной аппарат, где культура выращивается при 27+1oC в течение 18-20 ч. Готовый"посевной материал переносят в ферментеры со стерильной питательной средой того же состава. ферментация длится 4855 ч (2J.

Недостатком известного способа является то, что он не обеспечивает получение посевного материала в короткие сроки, протекает недостаточно интенсивно, а выход антибиотика относительно невысок и составляет всего 9600 мкг/мл.

Цель изобретения - ускорение прироста биомассы актиномицетов и интенсификация биосинтеза антибиотика.

Поставленная цель достигается тем, что в способе выращивания актиномицетов на питательной среде, со3 939544 держащей кукурузную муку, крахмал и необходимые минеральные соли в условиях аэрации среды, в качестве стимулятора роста используют N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидин или Й-нитрозоэтилмочевину в концентрации соот-6 -6 ветственно 1 ° 10 -3 ° 10 мг/л и 1 10—

3 10 мг/л.

Пример 1. Выращивают Act.

gtiseus шт P-42-110 на синтетичес-! кой среде следующего состава,3:

НайО 0,1; КС1 0,05, К НРО4 3Hg0

Mg504 7НзО 0,05, сахароза 3, водопроводная вода до 100 мл, рН-7,6.

Приготовленную среду разливают в кол- 1з бы емкостью 750 мл по 100 мл, стерилизуют автоклавированием при 0,8 атм в течение 40 мин. Затем в колбы вносят стерильно раствор N-метил-М-нитро-й-нитрозогуанидина в концен - 20

«6 трации 2,5.10 мг/л, приготовленный

Таблица1.

Биомасса, мг/л

Стимулятор

Концентрация, мг/л

l1 пасаж. ч пассаж.,ч

4 48 72 24 48 72

8,2 5,2

9,! 8,7

10,1 15,9

12,5 16,1

3,2 5,9

4,3 7,2

Конт рол ь

М-метилN-нитро«

1.10 й-нитрозогуанидин

2,5 10

-6

3 10

17,0 18,1

13,3 15,5

2,0 4,0

3,4 5,8

12,2 10,9

10,3 12,5

8,3 7,3

7,5 8,4

7,0 8,0

1 ° 10

2,5 ° 10

3 10

N-нитрозоэтилмочеви12,6 14,5

10,8 i6,1 i0, i 9,8

3,2 5,8

2,5 5,1

3,1 4,9 на

Пример 3. Инкубируют Act.

gr i seus шт. P-42-110 на питательной среде следующе го состава, 4: кукурузная мука 2,0; крахмал 1,5; сернокислый аммоний 0,5-0,6; фосфорнокислый калий 0,03, поваренная соль 0,2, мел 0,5, железо сернокислое 0,025, вода водопроводная до

100,0. Приготовленную среду разливаы ют в колбы емкостью 750 мл по 100 мл, стерилизуют автоклавированием при

1,2 атм в,течение 40 мин, затем в колбы вносят стерйльно раствор N-метилПример 2. Выращивают Act

gt I seus шт. P-42-110 аналогичным образом, но в синтетическую среду добавляют раствор й-нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,5.10 мг/л, приготовленный на фосфатно-цитратном буфере (табл. 1), Наивысшие показатели биомассы при использовании этого стимулятора в концентрации

2,5 10 мг/л превышают контроль на

1303. Степень стимуляции прироста биомассы граничными концентрация еньше.

1 на фосфатном буфере, и споровую суспензию (или кусочек картофельного агара с культурой) Act.griseus шт.

P-42-110. Засеянные колбы ставят на качалку (220 об/мин) и выращивают при 27Ы С (1 пассаж.). 4ереэ 72. ч инкубирования выращенный мицелий передают на засев питательной среды того же состава и следят за накоплением биомассы (!1 пассаж.). Количество биомассы определяют общепринятым весовым методом.

В табл. 1 приведены данные о влиянии нитрозосоединений на накопление биомассы культурой Act.griseus шт.

P-42-110 на синтетической среде.

Как видно из табл. 1, количество биомассы продуцента через 24 ч культирования во втором пассаже при концентрации стимулятора 2,5 10 мг/л составляет 3003. >, 5 939544 6

-N-нитро-N-нитрозогуанидина в концен- тательной среды приведенного состава трации 2,5 10 мг/л и суспенэию (или .. в аппарат с посевной средой, где кусочек картофельного агара с куль- выращивают вегетативный посевной турой), Act griseus P-42-110. 3а- материал в течение 18-20 ч. Готовым сеянные колбы ставят на качалку о

5 посевным материалом засевают колбы (220 об/мин) и выращивают при 27 1 С с ферментационной средой того же в течение 18-24 ч (вместо положенных состава. Антибиотическую активность

36 ч). Выращенный в колбах посев- определяют методом диффузии в агар с тестной материал передают на засев пи- организмом Вас.subti1is АТТСС 6633 ° Таблица2

Антибиотикообразование шт. P-42-110 при добавлении стимулятора в посевную среду

Концентрация стимулятора, мг/л френментационная среда

Посевйая среда

Контроль (без стимулятора) 2172 /4890

457 3/4 391

4981/4834

4680/4488

5295/8960

11741/ 1128 Ъ

12082/11814

11096/11084

1-10

-ь

2,5.10

-6

3;I 0

"Числитель - использование 18-часово знаменатель - использование 24-часо материала.

Как видно иэ табл. 2, влияние стимулятора на антибиотикообраэование в граничных пределах вызывает меньшую стимуляцию.

4О

Пример 4. Выращивают Act, griseus шт. P-42-110 аналогичным го посевного материала, вого посевного образом, на в посевную среду добавляют раствор й-нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,5 ° 10 мг/л, приготовленный на фосфатно-цитратном буфере.. Т а б л и ц а 3

Антибиотическая активность шт. P-42-110 Act griseus при добавлении стимулятора в посевную среду. б

Кон сти мг/

Контроль (без стимулятора)

-6, 1 .10

5295/8960

13110/12820

2172 /4890

4956/4875, 939544

Продолжение табл. 3

2 5 10

-6

3 10

13584/13120

12850/12660 4991/4864

4678/4593

Числитель - использование 18-часового посевного материала, знаменатель - использование 24-часового посевного материала. р и M e р 5 ° Инкубируют

Act. griseus шт. 223-70 ФУ ана15 логичным образом. В посевную среду добавляют раствор N-метил-N-

-нитро-N-нитрозогаунидина, при готовленный на фосфатном буфере, в концентрации 2,5 10 мг/л.

Таблиц а 4. шт. 223-70 ФУ Act griseus в посевную среду.

Антибиотическая активность при добавлении стимулятора

Концентрация стимулятора, мг/л

Ферментационная среда

Посевная среда

Контроль (без стимулятора) 3343 /3879

3860/3992

4860/4792

4190/4230

760 8/780 8

10840/11052

1 1 412/1 1.370

10975/10393

1 ..10

2 5 10

3 -10

Числитель - использование 18-часового посевного материала, знаменатель - использование 24-часового посевного материала

Данные табл. 4 показывают, что при внесении стимулятора в посевную среду с культурой шт. 223-70 ФУ увеличивается антибиотическая активность проду" цента на 1323 и сокращается срок выращи вания посе вного материала на

12-18 ч.

Таким образом, предлагаемый способ выращивания микроорганизмов с внесением в посевную среду малых

1доз нитрозосоединеняй интенсифици- 55 рует прирост биомассы и биосинтез антибиотика. Иаксимальное увеличение биомассы при введении нитрозоДанные табл. 3 показывают, что при использовании стимулятора в концентрации 2,5 1О мг/л сокращается срок выращивания посевного материала на 12-18 ч и увеличивается антибиотикообразование на 1514. Граничные концентрации НЭИ оказывают меньаую стимуляцию.

-6 гуанидина в концентрации 2,5 10 мг/л составляет 3003, а нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,5 10 мг/л

1301. Иаксимальное стимулирование процесса биосинтеза антибиотика при внесении. нитрозогуанидина в концентрации 2,5 10 мг/л на ферментационной регламентной среде составляет 135i и при введении нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,5 ° 10 мг/л E5Ei.

Изобретение дает возможност ь сократить срок выращивания посевного материала на 12-18 ч по сравнению с известным способом.

Формула изобретения

939544

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

11 200122, кл. С 12 К 1/06, 1964. о

2. Авторское свидетельство СССР 675070, кл. С 12 0 9/00, 1976.

Составитель В. Голимбет

Техред и. Тепер Корректор M. лароши

Редактор Л. Филь

Заказ 4599/40 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ выращивания актиномицетов на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал, необходи- S мые минеральные соли, в условиях аэрации среды, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения прироста биомассы актиномицетов и интенсификации биосинтеза антибиотикаа, в каче ст ве стимулятооа поста используют N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидин или N-нитрозоэтилмоче вину в концентрациях соот ветст венно

1 ° 10 — 3 -10 мг/л и 1 ° 10 -3 10 мг!л.